实验动物SPF鸡质量控制标准介绍 被引量：4

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作者 韩凌霞 孟兴 +1 位作者 佟相慧 陈洪岩 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第3期72-78,共7页

无特定病原体(SPF)鸡是目前国际上公认的唯一陆禽类实验动物,是禽用及部分人用生物制品生产和检定的重要原材料之一。SPF鸡的微生物学、遗传学、配合饲料和饲养管理等方面的系列质量标准的制定和发布实施,对规范SPF鸡的生产,提高其在禽... 无特定病原体(SPF)鸡是目前国际上公认的唯一陆禽类实验动物,是禽用及部分人用生物制品生产和检定的重要原材料之一。SPF鸡的微生物学、遗传学、配合饲料和饲养管理等方面的系列质量标准的制定和发布实施,对规范SPF鸡的生产,提高其在禽病和生命科学研究中的可靠性和可重复性,保证疫苗质量,具有重要意义。本文从微生物学、遗传学、配合饲料、饲养管理和运输等5个方面,梳理了SPF鸡质量控制有关的现行国家标准、团体标准和地方标准,期望能为SPF鸡的生产和使用单位提供有益的参考。 展开更多

关键词 无特定病原体鸡 质量控制 标准

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关于禽类实验动物感染实验中的安乐术的分析与思考 被引量：3

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作者 韩凌霞 王兴童 陈洪岩 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期105-109,共5页

实验动物病原学感染实验在兽医科学和生物制品研究等方面发挥越来越大的作用。我们对从2009年1月1日至2014年4月正式发表在美国国家生物技术信息中心(NCBI)的以禽类进行感染试验的科研报告进行了文献汇总,重点关注动物福利,尤其是安乐... 实验动物病原学感染实验在兽医科学和生物制品研究等方面发挥越来越大的作用。我们对从2009年1月1日至2014年4月正式发表在美国国家生物技术信息中心(NCBI)的以禽类进行感染试验的科研报告进行了文献汇总,重点关注动物福利,尤其是安乐死方面。通过对247项研究报告的调查,虽然几乎所有报告都声称通过其所在单位的动物实验和管理福利委员会的审核,但同类感染实验中采用的临终终点的判定和安乐术不尽相同,麻醉途径和剂量也缺乏标准。文章对目前国际上报道的安乐术的特点也做了比较。 展开更多

关键词 禽类实验动物 感染实验 安乐术

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MDV感染B19、B21单倍型SPF鸡外周血淋巴细胞BLec1、BNK及细胞因子基因转录水平比较 被引量：4

3

作者 宁官保 田文霞 +3 位作者 张园华 张鼎 张晓娜 韩凌霞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1184-1190,共7页

本研究旨在揭示BLec1、BNK及细胞因子在B21和B19两种单倍型鸡对马立克病(MD)抗性差异中的可能机制。分别对B21和B19单倍型1日龄鸡腹腔接种马立克病毒(MDV)超强毒株,在攻毒后不同时间检测鸡外周血淋巴细胞中BLec1、BNK及IFN-γ、IL-4、IL... 本研究旨在揭示BLec1、BNK及细胞因子在B21和B19两种单倍型鸡对马立克病(MD)抗性差异中的可能机制。分别对B21和B19单倍型1日龄鸡腹腔接种马立克病毒(MDV)超强毒株,在攻毒后不同时间检测鸡外周血淋巴细胞中BLec1、BNK及IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-18的基因转录水平。结果显示,在第4、7天,两种鸡BNK、BLec1和4种细胞因子水平表现出不同程度的降低。在第10天,B21单倍型鸡中BNK、BLec1、IFN-γ、IL-4和IL-18基因转录量出现不同程度的升高,而B19单倍型鸡中细胞因子转录水平有所下降。在第13天,B21单倍型鸡中BNK、BLec1、IL-18和IL-10基因转录量表现出不同程度的升高,而B19单倍型鸡中则有所下降。以上结果总体表明,MD耐受型鸡在感染沉默期BNK、BLec1和细胞因子转录量高于敏感型,不同遗传基因型鸡对MD的抗性差异与耐受基因及细胞因子的转录情况有着密切的关系。 展开更多

关键词 细胞因子 BLec1 BNK 基因转录

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不同MHC-B单倍型SPF鸡对禽白血病的抗性研究 被引量：3

4

作者 廉传江 周刚 +3 位作者 司昌德 文辉强 陈洪岩 韩凌霞 《实验动物科学》 2014年第2期38-43,共6页

目的探索不同MHC-B单倍型SPF鸡对禽白血病(Avian leukosis,AL)的抗性差异,为建立AL抗性和易感鸡系提供实验依据。方法选择纯合G1、G5、G6鸡系及杂合G8鸡系雏鸡进行人工感染白血病病毒A亚群(Avian leukosis virus,ALV-A)RAV-1毒株实验,G... 目的探索不同MHC-B单倍型SPF鸡对禽白血病(Avian leukosis,AL)的抗性差异,为建立AL抗性和易感鸡系提供实验依据。方法选择纯合G1、G5、G6鸡系及杂合G8鸡系雏鸡进行人工感染白血病病毒A亚群(Avian leukosis virus,ALV-A)RAV-1毒株实验,G8系雏鸡(6羽)作为对照。攻毒后对各鸡系的死亡率、病变率、血液中抗体水平以及外周血淋巴细胞的病毒载量等与抗性相关指标进行动态评估与统计学分析,最终确定抗性较强和较弱的鸡系。结果 G5系病变率和死亡率均明显高于其它攻毒鸡系,G1系最低,G6和G8系居中;G1系在攻毒后第5周开始,抗体效价一直高于其它鸡系,而G5系则最低,并且在攻毒后第8周至11周和第15周至18周,G1系的抗体效价显著高于G5系(P<0.05);G1系的病毒载量在攻毒后第7周至15周,低于其它鸡系,而G5系自攻毒后第9周至13周,极显著高于G1系(P<0.01)。结论 G1系在感染ALV后,死亡率较低,病变轻微,抗体保护力较强,且病毒的增殖较慢,因而其对AL具有较强的抗性,而G5系则相反较为易感。本研究不仅为建立AL抗性较强和较易感的鸡系提供了实验依据,而且对进一步阐明鸡主要组织相容性复合体(Major histocompatablity complex,MHC)多态性与AL抗病性的关系有重要作用。 展开更多

关键词 MHC-B单倍型 SPF鸡 禽白血病 抗性

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去除信号肽有利鸡白细胞介素-10在哺乳动物细胞胞浆的表达 被引量：3

5

作者 彭蔚宇 王丽廷 +4 位作者 王兴童 杨柳 孟兴 陈洪岩 韩凌霞 《实验动物科学》 2017年第2期16-20,25,共6页

目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchIL-10F)和去信号肽(euchIL-... 目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchIL-10F)和去信号肽(euchIL-10M)的chIL-10编码基因,克隆入含有报告基因e GFP和新霉素抗性基因(neo)的真核表达载体pEGFP-N1中,获得重组质粒N1-euchIL-10F和N1-euchIL-10M。分别转染中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1),经G418加压筛选、纯化,获得稳定表达chIL-10蛋白的CHO-K1细胞系,利用激光共聚焦试验观察外源蛋白的细胞定位。结果通过RT-PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验,表明euchIL-10F和euchIL-10M均整合入细胞基因组中,且N1-euchIL-10M在胞浆大量表达较强的绿色荧光,而N1-euchIL-10F表达的荧光较弱,且胞浆内含量很低。结论去除信号肽利于chIL-10基因在体外真核细胞胞浆的表达。 展开更多

关键词 鸡白细胞介素-10 信号肽 真核表达 CHO-K1细胞

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自然杀伤细胞受体与功能的研究进展 被引量：4

6

作者 杨超 韩凌霞 陈洪岩 《实验动物科学》 2013年第5期55-58,共4页

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是由多种亚类组成的淋巴细胞,具有多种不同受体,表现出多种功能,同时具有先天性免疫细胞和后天免疫细胞,特别是杀伤性T细胞的特性,在免疫记忆、自然杀伤、抗病毒和抗肿瘤方面都有重要作用。本文综述了N... 自然杀伤(natural killer,NK)细胞是由多种亚类组成的淋巴细胞,具有多种不同受体,表现出多种功能,同时具有先天性免疫细胞和后天免疫细胞,特别是杀伤性T细胞的特性,在免疫记忆、自然杀伤、抗病毒和抗肿瘤方面都有重要作用。本文综述了NK细胞的分类、受体和功能的研究进展。 展开更多

关键词 自然杀伤细胞 受体 功能

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断奶仔猪源小肠结肠炎耶尔森氏菌的分离鉴定及其致病性研究 被引量：12

7

作者 关乃瑜 夏爽 +5 位作者 赵丽丽 罗继龙 谷珊珊 崔文 葛俊伟 陈洪岩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期679-682,共4页

为研究小肠结肠炎耶尔森氏菌（Y．enterocolitica）在断奶仔猪腹泻发生中可能的致病作用，本研究采集黑龙江地区58份断奶仔猪腹泻粪便样品，经细菌分离鉴定，共分离到18株Y.enterocolitica，命名为Y1～Y18；对其6种毒力基因（all、ystA... 为研究小肠结肠炎耶尔森氏菌（Y．enterocolitica）在断奶仔猪腹泻发生中可能的致病作用，本研究采集黑龙江地区58份断奶仔猪腹泻粪便样品，经细菌分离鉴定，共分离到18株Y.enterocolitica，命名为Y1～Y18；对其6种毒力基因（all、ystA、ystB、virF、yadA和册0进行检测，结果显示，其中10株携带ystB基因，3株携带ail基因，其余5株分离株未检测到任何毒力基因。致病性试验结果显示，这些分离株的致病性存在很大差异，含有ail基因的致病性分离株Y7对小鼠和猪均具有致病性，而Y17分离株则无致病性；含有ystB基因的Y11分离株对小鼠具有致病性对猪无致病性，Y18分离株则对小鼠也无致病性；不含毒力基因的分离株Y9和Y16则可以引起小鼠和猪不同程度发病。各分离株除引起腹泻的程度、持续时间和粪便带茵天数不同以外，在肺、后肢关节液、肠系膜淋巴结和小肠内容物中的分离情况也存在差异。本研究结果表明菌株携带毒力基因的情况与其致病性并不具有明确的相关性，并且初步证明Y．enterocolitica在断奶仔猪腹泻发生过程中起到了一定的作用。 展开更多

关键词 断奶仔猪腹泻 小肠结肠炎耶尔森氏菌 毒力基因 致病性

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鸡NK细胞相关C型凝集素样编码基因研究进展

8

作者 吴少莲 韩凌霞 《动物医学进展》 北大核心 2015年第6期134-137,共4页

鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,... 鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,在NKC区为CD69和CD94/NKG2,在MHC区为相邻的B-NK和B-Lec基因。B-NK是目前唯一已证明表达于NK细胞上的凝集素样受体,其配体尚不清楚,但是已经证明B-NK能够和活化的细胞上的配体结合。论文主要讨论CD69、CD94/NKG、B-NK和BLec 4个基因的系统发育比较和蛋白质结构的研究进展。 展开更多

关键词 鸡 NK细胞 C型凝集素样受体

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鸭不同MHC单倍型对禽流感重组疫苗免疫效果的影响 被引量：6

9

作者 赵丽丽 杨超 +6 位作者 张晓娜 廉传江 文辉强 柳金雄 陈洪岩 陈化兰 韩凌霞 《实验动物科学》 2014年第3期30-32,共3页

目的不同品系的鸭对禽流感(AI)疫苗诱导的效价有差异,分析这种差异是否与主要组织相容性复合体(MHC)有关。方法用表达H5亚型禽流感HA基因重组鸭瘟活载体疫苗免疫抗原提呈相关转运体TAP基因等位基因型不同的4种SPF鸭,比较其血清HI动态变... 目的不同品系的鸭对禽流感(AI)疫苗诱导的效价有差异,分析这种差异是否与主要组织相容性复合体(MHC)有关。方法用表达H5亚型禽流感HA基因重组鸭瘟活载体疫苗免疫抗原提呈相关转运体TAP基因等位基因型不同的4种SPF鸭,比较其血清HI动态变化。结果免疫后连续观察的9周中,B3群SPF鸭HI抗体效价始终显著高于另外3个群。结论鸭的不同MHC单倍型可能与AI疫苗的不同免疫效力相关。 展开更多

关键词 禽流感疫苗 主要组织相容性复合体 SPF鸭 HI效价

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无特定病原体麻鸭种群的建立 被引量：2

10

作者 韩凌霞 赵丽丽 +3 位作者 于海波 张伟 张圆圆 陈洪岩 《实验动物科学》 2018年第2期56-59,64,共5页

目的建立无特定病原体麻鸭种群。方法以优质培育品种绍兴麻鸭白壳I号和金定鸭种卵为基础,通过疫病监测淘汰抗体抗原阳性个体、灭活疫苗免疫、整个生命周期应用鸭正压隔离器饲养、60Co射线辐照饲料、酸化饮用水、严格控制人流、物流等净... 目的建立无特定病原体麻鸭种群。方法以优质培育品种绍兴麻鸭白壳I号和金定鸭种卵为基础,通过疫病监测淘汰抗体抗原阳性个体、灭活疫苗免疫、整个生命周期应用鸭正压隔离器饲养、60Co射线辐照饲料、酸化饮用水、严格控制人流、物流等净化措施,同时开展了多种分子遗传学检测、生物学特性数据测定和疫病敏感性试验,以实现实验动物化。结果成功建立了无特定病原、遗传学背景清晰、疫病敏感的HBK-SPF和SPF-JD鸭种群。结论 SPF麻鸭种群丰富了我国实验动物资源,为生命科学研究和生物制品研发提供了重要条件支撑。 展开更多

关键词 麻鸭 无特定病原体 种群

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猪圆环病毒2型重组病毒分离株的鉴定 被引量：2

11

作者 李海超 韩凌霞 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第6期26-31,共6页

为了解某猪场猪圆环病毒2型（PCV-2）的流行及毒株基因组变异情况，应用 PCR 方法从6个疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）病死猪的心脏、淋巴结、脾脏和肺脏等病料中进行猪圆环2型病毒的检测，并对阳性病料进行 PCV-2全基因组的扩... 为了解某猪场猪圆环病毒2型（PCV-2）的流行及毒株基因组变异情况，应用 PCR 方法从6个疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）病死猪的心脏、淋巴结、脾脏和肺脏等病料中进行猪圆环2型病毒的检测，并对阳性病料进行 PCV-2全基因组的扩增，将成功扩增到的6株 PCV-2全基因组克隆到 pMD-18T Simple Vector，构建重组质粒。对全基因组进行测序，然后对全基因组进行同源性、遗传进化、重组以及毒力分析。结果表明，6株 PCV-2基因组长度均为1767 bp，与参考序列的同源性在88．1％～99．6％之间，并且 LNF3、HEBF5和 HEN65为 PCV-2b1C 基因型，LN51为 PCV-2b1B 基因型，HEN60株为 PCV-2b1A 基因型，HEBF7属于 PCV-2a，但不属于任何亚型，可能为 PCV-2a 向 PCV-2b 的过渡株。利用重组分析软件RDP4．25和 SIMPLOT3．5．1分析，表明 LN51株可能来自 PCV-2a2A 和 PCV-2b1A 基因型的重组。根据PCV-2 Cap 的76位和131位氨基酸残基，有5株符合强毒特征（76I、131T），而 HEBF7株存在强、弱毒的特征。本研究为我国 PCV-2流行株的分子特征研究提供了参考。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 毒力 重组 基因型

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CAV-1感染MDCK中各IFN及受体分子表达谱的差异 被引量：1

12

作者 孟兴 佟相慧 +1 位作者 陈洪岩 韩凌霞 《实验动物科学》 2020年第3期1-5,共5页

目的分析犬肾细胞系(MDCK)感染犬腺病毒1型(CAV-1)后各种干扰素(IFN)亚型及其受体分子转录水平的表达情况。方法建立犬IFN-β、IFN-β受体(IFNAR1)、IFN-λ1、IFN-λ1受体(IFN-λ1R)、IFN-λ3和IFN-λ3受体(IFN-λ3R)的染料法定量PCR方... 目的分析犬肾细胞系(MDCK)感染犬腺病毒1型(CAV-1)后各种干扰素(IFN)亚型及其受体分子转录水平的表达情况。方法建立犬IFN-β、IFN-β受体(IFNAR1)、IFN-λ1、IFN-λ1受体(IFN-λ1R)、IFN-λ3和IFN-λ3受体(IFN-λ3R)的染料法定量PCR方法,分析了MDCK在PolyⅠ∶C处理和接种CAV-1后细胞内各IFN及受体分子转录水平的相对含量。结果正常MDCK细胞内存在较高含量的IFN-λ3R且含量显著高于其他IFN及受体分子的转录水平;用PolyⅠ∶C处理MDCK细胞24 h后,IFN-λ1R、IFN-λ3和IFN-λ3R的表达量均显著性上调,而IFN-β、IFN-λ1和IFNAR1几乎没变化;接种CAV-1后,IFN-α的含量急剧上升至6倍。结论MDCK细胞存在不同水平浓度的IFN分子及其受体转录产物,且在PolyⅠ∶C刺激和腺病毒感染时受体分子的表达谱不同。 展开更多

关键词 犬肾细胞系 干扰素受体 转录表达水平

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主要组织相容性复合体单倍型鸭抗原处理相关转运体单抗的制备 被引量：1

13

作者 王兴童 孟兴 +2 位作者 佟相慧 陈洪岩 韩凌霞 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期200-207,共8页

目的制备鸭抗原处理相关转运体(TAP)特异性单抗,为深入利用实验鸭开展免疫学研究提供实验材料。方法利用大肠埃希菌诱导表达主要组织相容性复合体(MHC)单倍型HBW-SPF鸭TAP蛋白肽结合区片段,表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,采用ELIS... 目的制备鸭抗原处理相关转运体(TAP)特异性单抗,为深入利用实验鸭开展免疫学研究提供实验材料。方法利用大肠埃希菌诱导表达主要组织相容性复合体(MHC)单倍型HBW-SPF鸭TAP蛋白肽结合区片段,表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,采用ELISA技术筛选特异性单抗分泌杂交瘤细胞株。将阳性细胞株制备小鼠腹水,作为一抗,与多次截短表达TAP蛋白肽结合区进行蛋白免疫印迹试验,鉴定单抗针对的抗原表位。通过间接免疫荧光试验比较该单抗对实验鸭和鸡外周血淋巴细胞的反应性,利用免疫组织化学技术检测对SPF鸡、SPF鸭、鹌鹑、鹅和SPF猪的特异性。结果获得一株鸭TAP单抗1A6,抗原表位位于^(297)NARHQMLQQAVLDATAGTGMVVQEAI^(322),对鸡和鸭外周血淋巴细胞具有免疫荧光反应性;在鸡和鸭的肠黏膜固有层检测到大量特异性信号,在猪、鹌鹑和鹅没有检测到信号。结论获得了一株具有鸡和鸭反应性的抗原转运相关体特异性的单抗,可运用于禽类实验动物在禽病学和禽免疫学方面的研究。 展开更多

关键词 主要组织相容性复合体单倍型鸭 抗原处理相关转运体 单克隆抗体 特异性

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MHC单倍体型无特定病原体鸭的培育 被引量：2

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作者 王兴童 孟兴 +2 位作者 佟相慧 陈洪岩 韩凌霞 《实验动物科学》 2018年第4期14-20,共7页

目的培育MHC单倍型无特定病原体单倍型鸭。方法以国家禽类实验动物种子中心培育并保存的无特定病原体(SPF)麻鸭为基础,根据位于主要组织相容性复合体(MHC)核心区域的鸭抗原处理相关转运体分子(TAP)双拷贝基因(Tap1和Tap2)的多态性,分别... 目的培育MHC单倍型无特定病原体单倍型鸭。方法以国家禽类实验动物种子中心培育并保存的无特定病原体(SPF)麻鸭为基础,根据位于主要组织相容性复合体(MHC)核心区域的鸭抗原处理相关转运体分子(TAP)双拷贝基因(Tap1和Tap2)的多态性,分别利用Tap1基因组短串联重复序列(STR)、TAP2的肽结合区序列以及Tap2全基因组序列的基因型分型,连续选育主要组织相容性复合体(MHC)单倍型SPF鸭。结果 F0代和F1代鸭的STR结果完全一致;F2和F3代鸭的Tap1和Tap2基因组序列完全纯合。连续6个世代的Tap2基因组序列分析,B3群鸭有2个位点发生突变,B1、B2和B4遗传学稳定。结论成功建立了4个MHC单倍体型SPF鸭群B1、B2、B3和B4,为深入开展鸭的免疫遗传学研究提供了实验动物支撑条件。 展开更多

关键词 鸭 主要组织相容性复合体 无特定病原体 单倍体型 抗原处理相关转运体

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MDV感染B19、B21单倍型SPF鸡免疫器官中miR-146b-5p的变化规律 被引量：1

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作者 易诚 陈洪岩 +3 位作者 韩凌霞 王瑞琪 杨春文 廉传江 《实验动物科学》 2017年第3期24-27,共4页

目的分析miR-146b-5p在B19(MD易感)与B21(MD抗性)单倍型鸡感染MDV后的表达变化规律,并探讨其可能与MD抗性/易感性相关的分子机制。方法我们在MDV超强毒株Md5攻毒实验和前期高通量测序分析发现,miR-146b-5p表达量有明显差异,为此进一步... 目的分析miR-146b-5p在B19(MD易感)与B21(MD抗性)单倍型鸡感染MDV后的表达变化规律,并探讨其可能与MD抗性/易感性相关的分子机制。方法我们在MDV超强毒株Md5攻毒实验和前期高通量测序分析发现,miR-146b-5p表达量有明显差异,为此进一步利用实时荧光定量PCR技术,检测MD感染B19和B21单倍型鸡5dpi、10dpi和21dpi,miR-146b-5p在法氏囊、胸腺和脾脏组织中的表达量变化情况。结果 miR-146b-5p在5dpi、10dpi和21dpi实验组和对照组的表达量明显不同,miR-146b-5p在B21实验组中的表达量要远高于对照组,且差异显著;而miR-146b-5p在B19实验组中的表达量高于对照组但差异不显著。结论 MD感染后,在不同免疫器官中miR-146b-5p的表达量可能存在组织特异性,不同鸡系之间在感染后也存在一定的差异,但具体机制尚需进一步深入研究。 展开更多

关键词 microRNA MDV 法氏囊 脾脏 胸腺

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B19单倍型鸡BNK蛋白单克隆抗体的制备 被引量：1

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作者 吴少莲 彭蔚宇 +4 位作者 王兴童 文辉强 廉传江 陈洪岩 韩凌霞 《实验动物科学》 2015年第3期1-5,共5页

目的体外构建稳定表达鸡自然杀伤细胞(Natural killer,NK)BNK蛋白的细胞系,制备BNK蛋白的单克隆抗体,为鸡BNK蛋白及NK细胞的研究提供便利。方法利用BNK19原核表达产物免疫BALB/c小鼠,体外稳定表达疫病敏感性B19单倍型鸡BNK蛋白(BNK19)... 目的体外构建稳定表达鸡自然杀伤细胞(Natural killer,NK)BNK蛋白的细胞系,制备BNK蛋白的单克隆抗体,为鸡BNK蛋白及NK细胞的研究提供便利。方法利用BNK19原核表达产物免疫BALB/c小鼠,体外稳定表达疫病敏感性B19单倍型鸡BNK蛋白(BNK19)的真核细胞系筛选单克隆抗体。结果用稳定表达BNK蛋白的真核细胞系筛选到2株BNK19特异性单克隆抗体。结论获得的单克隆抗体经鉴定具有免疫学活性,为鸡BNK蛋白及NK细胞的作用机制研究提供了条件。 展开更多

关键词 B19单倍型鸡 BNK 单克隆抗体

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犬腺病毒1型感染普通级比格犬中Ⅰ和Ⅲ型干扰素及其受体分子表达量的比较

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作者 孟兴 问婉欣 +2 位作者 佟相慧 陈洪岩 韩凌霞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期552-561,共10页

比较普通级比格犬感染犬腺病毒1型(CAV-1)后外周血和肝内Ⅰ型和Ⅲ型干扰素(IFN)及其受体分子的转录水平,同时评估CAV-2疫苗免疫对CAV-1感染试验的影响。对3只2月龄普通级比格犬后肢肌肉注射105.7TCID50CAV-1纯化病毒,在攻毒后12 d内记... 比较普通级比格犬感染犬腺病毒1型(CAV-1)后外周血和肝内Ⅰ型和Ⅲ型干扰素(IFN)及其受体分子的转录水平,同时评估CAV-2疫苗免疫对CAV-1感染试验的影响。对3只2月龄普通级比格犬后肢肌肉注射105.7TCID50CAV-1纯化病毒,在攻毒后12 d内记录体温变化,每日采集咽拭子和肛拭子,于攻毒后第3、6、9、12天采集前腔静脉血,利用常规PCR检测CAV-1和CAV-2核酸,利用间接免疫荧光试验(IFA)检测血清抗体效价。攻毒后第12天进行安乐死,采集心脏血和肝,利用定量PCR法检测血液和肝中IFN-α、IFN-β、IFNβR、IFN-λ1、IFNλ1R、IFNλ3和IFNλ3R等的转录水平。结果显示,31#犬的体温次日即升至39.7℃,出现便血和轻度腹泻,攻毒后第3天外周血中病毒核酸拷贝数达到峰值,随后在胸腺、腹股沟淋巴结、颌下淋巴结、肠系膜淋巴结和肝等组织中检测到CAV-1核酸,攻毒后第12天肝中IFN-λ1R的转录水平显著高于其他分子,IFA效价为1∶320。34#犬和35#犬的体温变化、临床症状、病毒血症、血清抗体效价和干扰素表达量均低于31#犬。实验早期犬的咽拭子和肛拭子中均检测到不同含量的CAV-2核酸。结果表明,CAV-1感染犬血液中的Ⅰ型和Ⅲ型干扰素表达规律不明显,肝是IFN-λ1主要的效应器官,同时CAV-2疫苗免疫对普通级实验犬的CAV-1感染研究具有一定的干扰。 展开更多

关键词 比格犬 犬腺病毒1型 干扰素 干扰素受体 转录表达水平

原文传递

常州市金坛区畜禽免疫抗体监测的情况分析

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作者 蔡文博 吴少莲 +5 位作者 徐荣军 陆则基 周娟 杨文卫 韩凌霞 陈洪岩 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 北大核心 2016年第12期130-132,共3页

为检验春防畜禽免疫效果,查找目前免疫工作中存在的问题,为开展疫病综合防控提供依据,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对采集的726份猪血清样品进行猪瘟(CSF)、高致病性猪蓝耳病(HP-PRRS)、O型口蹄疫(FMD)的抗体检测,对采集的135份羊血清... 为检验春防畜禽免疫效果,查找目前免疫工作中存在的问题,为开展疫病综合防控提供依据,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对采集的726份猪血清样品进行猪瘟(CSF)、高致病性猪蓝耳病(HP-PRRS)、O型口蹄疫(FMD)的抗体检测,对采集的135份羊血清样品进行O型、亚洲Ⅰ型FMD和小反刍兽疫(PPR)的抗体检测;利用血凝抑制试验(HI)对采集的933份鸡血清样品进行高致病性禽流感(HPAI)、新城疫(ND)的抗体检测。结果表明:HPAI、ND、HP-PRRS免疫效果最好,平均免疫抗体合格率基本达到100%;HP-PRRS平均免疫抗体合格率超过99%;PPR、CSF、猪FMD免疫效果较好,平均免疫抗体合格率分别为93.33%、88.84%、88.84%;羊FMD免疫效果良好,O型和亚洲Ⅰ型FMD平均免疫抗体合格率分别为80.00%和82.22%。说明常州市金坛区2015年度春防畜禽免疫情况总体良好,但在免疫程序、动物饲养管理以及免疫技术等方面仍需改进。 展开更多

关键词 免疫 猪瘟 高致病性猪蓝耳病 口蹄疫 小反刍兽疫 高致病性禽流感 新城疫 抗体检测 酶联免疫吸附试验(ELISA)

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适合鸭瘟病毒弱毒增殖的MHC单倍型鸭胚肝间充质干细胞的建立

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作者 佟相慧 问婉欣 +1 位作者 陈洪岩 韩凌霞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期183-188,共6页

为了建立适于鸭瘟病毒(DPV)弱毒增殖的细胞系,利用4个主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭品系,体外分离鸭胚肝细胞,在干细胞因子、白细胞抑制因子和成纤维细胞生长因子诱导下,获得鸭胚肝间充质干细胞(DuLMSC)。接种DPV疫苗株C-KCE后,结... 为了建立适于鸭瘟病毒(DPV)弱毒增殖的细胞系,利用4个主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭品系,体外分离鸭胚肝细胞,在干细胞因子、白细胞抑制因子和成纤维细胞生长因子诱导下,获得鸭胚肝间充质干细胞(DuLMSC)。接种DPV疫苗株C-KCE后,结果显示:F1~F10代均能稳定出现CPE;将F10病毒接种细胞24 h后,通过扫描电镜在胞质、胞核及细胞间隙均能够观察到典型的疱疹病毒粒子;F1至F10代均能扩增出DPV UL2基因片段,序列测定结果表明F1、F5、F10代的扩增产物与NCBI中公布的DPV株(EU082088)的核苷酸同源性为100%;组织培养半数感染量和一步生长曲线结果表明,源自B4系单倍型鸭的DuLMSC细胞系增殖DPV的病毒含量明显高于B1、B2和B3系。本研究为稳定培养鸭瘟病毒提供了优良稳定的实验材料。 展开更多

关键词 鸭瘟病毒 鸭胚肝间充质干细胞 主要组织相容性复合体单倍型

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