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玉米粗缩病毒基因组第七组份的cDNA克隆及序列分析 被引量：6
1
作者 邓文生 杨希才 +2 位作者 张玉满 刘玉乐 康良仪 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期488-494,共7页
从采自中国河北滦城感病的玉米材料中提取玉米粗缩病毒 (MRDV)的双链RNA。根据已知MRDV的部分序列设计引物 ,反转录、PCR扩增 ,克隆并测序分析了MRDV的第七片段 (S7)cDNA序列。结果表明 ,S7cDNA序列全长为 1 936bp ,与国外所测的MRDVS7... 从采自中国河北滦城感病的玉米材料中提取玉米粗缩病毒 (MRDV)的双链RNA。根据已知MRDV的部分序列设计引物 ,反转录、PCR扩增 ,克隆并测序分析了MRDV的第七片段 (S7)cDNA序列。结果表明 ,S7cDNA序列全长为 1 936bp ,与国外所测的MRDVS7的序列长度相等 ,而且S7包含的两个阅读框 (ORF1和ORF2 )位置无变化。它们的核苷酸和最大开放阅读框 (ORF1 )同源性分别为 87 7%和 91 6% ,然而 ,MRDVS7的片段与水稻黑条矮缩病毒 (RBSDV)S8片段的核苷酸和最大开放阅读框 (ORF1 )有更高的同源性 ,分别为 95 5%和93 5%。 展开更多
关键词 玉米粗缩病毒 S7 基因克隆 序列同源性
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人源抗HBsAg抗体Fd段和L链高效表达菌株的筛选 被引量：2
2
作者 刘顺爱 王学 +2 位作者 何玉先 田波 徐道振 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期289-291,共3页
目的 :选用高效表达载体分别高效表达人源抗HBsAg抗体的Fd段和L链 ,经包涵体纯化和变性复性使Fd段和L链之间形成二硫键 ,最终制备有活性、高产量的人源抗HBsAg基因工程抗体Fab。方法 :用PCR法从可溶性表达重组质粒抗HBsAgFadComb3扩增F... 目的 :选用高效表达载体分别高效表达人源抗HBsAg抗体的Fd段和L链 ,经包涵体纯化和变性复性使Fd段和L链之间形成二硫键 ,最终制备有活性、高产量的人源抗HBsAg基因工程抗体Fab。方法 :用PCR法从可溶性表达重组质粒抗HBsAgFadComb3扩增Fd段和L链后分别构建高效表达载体PQE32 Fd和PQE32 L ,并分别导入大肠杆菌M15中进行表达 ,用SDS PAGE筛选出高效表达克隆。结果 :SDS PAGE筛选的高效表达克隆M15 PQE32 Fd和M15 PQE32 L经IPTG诱导后以包涵体形式表达 ,其表达量很高。从高效表达克隆重新扩增Fd段和L链后进行测序鉴定发现所得的序列与已报道的抗HBsAg抗体Fab基因吻合率为 97%。结论 :虽然已有表达可溶性人源抗HBsAg基因工程抗体Fab的报道 ,但因其表达量低而不能实际应用。筛选出高效表达人源抗HBsAg抗体Fd段和L链的克隆 ,因为包涵体形式表达需经变性复性 ,虽然变性复性后其产量会受影响 ,但因表达量很高 ,所以还是有很高的实际应用价值。其包涵体变性复性条件仍需进一步探讨。 展开更多
关键词 HBSAG 人源抗体Fab 高效表达 乙肝 抗体工程技术
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