荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物的制备 被引量：3

1

作者 陈保文 沈小兵 +1 位作者 苏城 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期617-618,622,共3页

目的研制荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物。方法采用液体表面膜培养方法培养荚膜组织胞浆菌,培养液经盐析和弱酸沉淀法纯化,再经透析和除菌,制成荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物原液,并进行豚鼠的皮肤反应试验和安全性检测。结果荚膜组织胞... 目的研制荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物。方法采用液体表面膜培养方法培养荚膜组织胞浆菌,培养液经盐析和弱酸沉淀法纯化,再经透析和除菌,制成荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物原液,并进行豚鼠的皮肤反应试验和安全性检测。结果荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物的蛋白纯度达80%以上,其1μg/ml的浓度诱导的豚鼠皮肤反应与国外同类制品等效,且具有良好的安全性。结论荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物可作为体内诊断制品,用于检查人体荚膜组织胞浆菌的感染以及荚膜组织胞浆菌病的临床诊断。 展开更多

关键词 荚膜组织胞浆菌素 纯蛋白衍生物 皮肤反应

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分枝杆菌噬菌体生物学特性探讨 被引量：5

2

作者 彭丽 罗永艾 +1 位作者 沈小兵 王国治 《微生物学免疫学进展》 2005年第1期19-23,共5页

为了确定不同分枝杆菌噬菌体的宿主菌以及扩增方法和最佳保存方法,观察了七种分枝杆菌噬菌体对结核分枝杆菌、耻垢分枝杆菌的裂解情况,并分别于感染后 24、48小时采用离心 过滤、孵育 过滤方法收集噬菌体比较扩增效率,采用不同稳定剂对... 为了确定不同分枝杆菌噬菌体的宿主菌以及扩增方法和最佳保存方法,观察了七种分枝杆菌噬菌体对结核分枝杆菌、耻垢分枝杆菌的裂解情况,并分别于感染后 24、48小时采用离心 过滤、孵育 过滤方法收集噬菌体比较扩增效率,采用不同稳定剂对分枝杆菌噬菌体进行液体和冻干保存,在不同时间段采用琼脂双层法检测其效价。结果显示:①D29分枝杆菌噬菌体能同时较高效地裂解结核分枝杆菌和耻垢分枝杆菌;②感染 48小时后采用孵育 过滤方法收集的噬菌体效价高,方法简单;③液体 4℃保存的噬菌体稳定性好, 70℃液体保存和冻干后 4℃、室温、37℃保存依据不同稳定剂而相差较大。因此,在 48小时后采用孵育 过滤方法收集噬菌体具有高效率特性并且简单易行,噬菌体液体 4℃保存简单、有效,值得推荐。 展开更多

关键词 噬菌体 稳定剂 结核分枝杆菌 耻垢分枝杆菌

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BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用 被引量：16

3

作者 赵爱华 乔来艳 +2 位作者 贾淑珍 寇丽杰 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期356-358,361,共4页

目的研究BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用。方法以BCG-CpG-DNA与重组HBsAg混合免疫小鼠,以铝佐剂疫苗为对照,采用放射免疫法检测抗-HBs中和抗体水平,ELISA法分析抗体亚类,酶联免疫斑点试验(ELIS-POT)检测CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL... 目的研究BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用。方法以BCG-CpG-DNA与重组HBsAg混合免疫小鼠,以铝佐剂疫苗为对照,采用放射免疫法检测抗-HBs中和抗体水平,ELISA法分析抗体亚类,酶联免疫斑点试验(ELIS-POT)检测CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)功能。结果BCG-CpG-DNA能提高抗-HBs中和抗体水平,促进抗原特异性IgG2a的产生,诱导Th1型免疫应答,与铝佐剂协同作用能部分逆转Th2反应。同时能增强抗原特异性CD8+T淋巴细胞的杀伤作用,实验组与对照组比较差异有显著意义。结论BCG-CpG-DNA对HBsAg有较好的免疫佐剂作用,有可能成为一种新型的免疫佐剂。 展开更多

关键词 BCG—CpG-DNA 免疫佐剂 HBSAG

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BCG-CpG-DNA免疫活性作用的初步研究 被引量：13

4

作者 赵爱华 寇丽杰 +2 位作者 乔来艳 贾淑珍 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期574-577,共4页

目的研究BCG-CpG-DNA的免疫学活性。方法通过淋巴细胞增殖、T细胞亚群分析、细胞因子产生、对NK细胞杀伤功能影响等试验,检测BCG-CpG-DNA的免疫活性。结果BCG-CpG-DNA能促进小鼠T、B淋巴细胞增殖,活化巨噬细胞分泌IL-12,并能增强ConA诱... 目的研究BCG-CpG-DNA的免疫学活性。方法通过淋巴细胞增殖、T细胞亚群分析、细胞因子产生、对NK细胞杀伤功能影响等试验,检测BCG-CpG-DNA的免疫活性。结果BCG-CpG-DNA能促进小鼠T、B淋巴细胞增殖,活化巨噬细胞分泌IL-12,并能增强ConA诱导IFN-γ产生,提高小鼠脾细胞中CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群的含量,同时增强小鼠NK细胞的杀伤活性。实验组与对照组所有结果差异均有显著意义(P<0.05)。结论BCG-CpG-DNA能活化抗原呈递细胞(APC),并具有较好的免疫活性。 展开更多

关键词 BCG-CPG-DNA 佐剂 免疫活性

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噬菌体D29对耐药结核病豚鼠的治疗作用 被引量：13

5

作者 彭丽 陈保文 +4 位作者 罗永艾 沈小兵 黎友伦 苏城 王国治 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第17期1576-1579,共4页

目的:观察噬菌体D29对患耐药结核病豚鼠的治疗作用.方法:采用皮下攻击法建立耐药结核病豚鼠模型,建模成功后随机将动物分为对照组、利福平(RFP)组、联合化疗组、噬菌体组4组.分别给予生理盐水、RFP单独、多种抗结核药物联合灌胃、噬菌体... 目的:观察噬菌体D29对患耐药结核病豚鼠的治疗作用.方法:采用皮下攻击法建立耐药结核病豚鼠模型,建模成功后随机将动物分为对照组、利福平(RFP)组、联合化疗组、噬菌体组4组.分别给予生理盐水、RFP单独、多种抗结核药物联合灌胃、噬菌体D29滴鼻,3次/wk,隔日给药.于治疗4,7wk后观察各组动物的一般情况、脏器质量指数(WI)、脏器病理组织学改变.脾脏结核分枝杆菌定量培养,并用ELISA方法检测血液中IL-2,IL-4,IFN-γ含量.结果:RFP组、联合化疗组在给药4wk内,体质量增长量明显小于对照组(P<0.05),而噬菌体组的体质量增长正常,与对照组相比较差异不显著.治疗4wk时各治疗组的病变指数均低于对照组,其中噬菌体组病变程度最轻,荷菌量(CFU)最低,差异具有统计学意义(P<0.05).7wk时动物的均一性对照组、RFP组较差,噬菌体组、联合化疗组较好.病理组织学改变噬菌体组、联合化疗组肺脏以纤维化、增生结节为主,脾脏很少有干酪样坏死;对照组肺脏可见大量Langhans细胞,以增生结节为主,脾脏较多干酪样坏死;IL-2含量RFP组、噬菌体组、联合化疗组均高于对照组,其中以噬菌体组含量最高,差异具有统计学意义(P<0.05).各组IL-4,IFN-γ均无显著性差异.结论:噬菌体D29可减轻耐药结核病豚鼠的脏器病变程度和脏器CFU,可改善机体细胞免疫功能,协同噬菌体杀灭机体内的结核菌,对豚鼠无副作用,有望作为新型抗结核药物的开发对象. 展开更多

关键词 分枝杆菌噬菌体 结核 抗药性 微生物 药效学 免疫

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冻干血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品的制备及标定 被引量：7

6

作者 辛晓芳 朱荫昌 +7 位作者 何伟 张谨 王国柱 梁幼生 徐明 薄淑英 曹国群 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期400-401,共2页

目的建立血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品。方法收集血吸虫病疫区粪检筛查阳性病人血清和非疫区正常人血清,经标定和验证合格,制成冻干参考品。结果冻干参考品血清效价符合要求,2家协作单位用3种免疫学方法标定,结果一致。结论... 目的建立血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品。方法收集血吸虫病疫区粪检筛查阳性病人血清和非疫区正常人血清,经标定和验证合格,制成冻干参考品。结果冻干参考品血清效价符合要求,2家协作单位用3种免疫学方法标定,结果一致。结论所制备的冻干参考品可以用于血吸虫病抗体诊断试剂的检定。 展开更多

关键词 血吸虫病 诊断试剂 参考血清

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噬菌体对结核病模型豚鼠免疫功能的影响 被引量：5

7

作者 彭丽 罗永艾 +3 位作者 陈保文 黎友伦 沈小兵 王国治 《医药导报》 CAS 2006年第8期767-770,共4页

目的观察噬菌体D29对结核病模型豚鼠体液免疫功能与细胞免疫功能的影响。方法采用皮下攻击法建立敏感和耐药结核分枝杆菌感染的结核病豚鼠模型，分别将感染敏感菌和耐药菌的豚鼠随机分为对照组、噬菌体组、利福平（RFP）组和联合化疗组... 目的观察噬菌体D29对结核病模型豚鼠体液免疫功能与细胞免疫功能的影响。方法采用皮下攻击法建立敏感和耐药结核分枝杆菌感染的结核病豚鼠模型，分别将感染敏感菌和耐药菌的豚鼠随机分为对照组、噬菌体组、利福平（RFP）组和联合化疗组。对照组给予0．9％氯化钠溶液隔日灌胃；RFP组给予RFP溶液隔日灌胃，每次给药剂量为15mg·kg^-1，每周3次；联合化疗组采用RFP＋乙胺丁醇＋吡嗪酰胺＋左氧氟沙星隔日灌胃，4种药物的剂量分别为15，25，25，6mg·kg^-1，每周3次；噬菌体组采用滴鼻的方式隔日给予噬菌体，每次1×10^8PFU（0．5mL），每周3次。均共治疗4～7周。观察治疗期间豚鼠血清中噬菌体中和抗体的动态变化，以及实验开始4周后豚鼠血清中白细胞介素．2（IL-2）、IL-4、γ干扰素（IFN-γ）的变化，并在电镜下观察巨噬细胞对噬菌体的吞噬情况。结果结核病模型豚鼠采用噬菌体治疗18d后，血清中均开始出现噬菌体中和抗体，抗体滴度与时间呈正相关。电镜观察发现巨噬细胞可以吞噬、消化部分噬菌体。敏感结核分枝杆菌感染模型采用利福平或噬菌体治疗4周后，血清中IL-2含量高于对照组；耐药结核分枝杆菌感染模型中RFP组、噬菌体组和联合化疗组的IL-2含量均高于对照组，其中噬菌体组血清IL-2含量最高，与对照组比较，差异有显著性（P〈0．05）。各组IL-4、IFN-γ均差异无显著性。结论噬菌体具有抗原的特性，可刺激机体产生中和抗体，同时可改善机体的细胞免疫功能，协同噬菌体杀灭机体内的结核分枝杆菌。 展开更多

关键词 噬菌体 结核分枝杆菌 豚鼠 免疫功能

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结核分枝杆菌噬菌体试剂盒的研制与初步评价 被引量：6

8

作者 彭丽 沈小兵 +1 位作者 罗永艾 王国治 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期389-392,共4页

目的:研制能快速检测标本中结核分枝杆菌的噬菌体试剂盒,并对之在临床上的应用做出初步评价。方法:采用不同方法对噬菌体的生产和保存工艺进行探讨,并且观察该方法中所用试剂的稳定性。建立噬菌体快速检测结核分枝杆菌的方法,分别用噬... 目的:研制能快速检测标本中结核分枝杆菌的噬菌体试剂盒,并对之在临床上的应用做出初步评价。方法:采用不同方法对噬菌体的生产和保存工艺进行探讨,并且观察该方法中所用试剂的稳定性。建立噬菌体快速检测结核分枝杆菌的方法,分别用噬菌体法与传统培养法检测34份临床标本中的结核分枝杆菌,以培养法作为金标准观察噬菌体法的敏感度、特异度和符合率。结果:①在37℃环境中采用琼脂双层法进行噬菌体扩增生产,48h后采用孵育-过滤法收集,可以获得较为理想的产量且简单易行。②噬菌体以液体形式4℃保存或以噬菌体宿主菌的无细胞菌苗作为保护剂进行真空冻干后4℃保存,28周后效价下降不足10的一个数量级。③噬菌体法中的重要试剂:辅助细菌和杀病毒剂,4℃保存40周均具有良好的稳定性。④34份痰标本培养4周,其中2份污染,29份阳性,3份阴性;噬菌体法检测标本中结核分枝杆菌的敏感度、特异度和符合率分别为86.2%(25/29)、66.7%(2/3)、84.4%(27/32)。结论:噬菌体法在48h内可以快速检测标本中的结核分枝杆菌活菌,并且具有以试剂盒形式进行商业化生产的可行性,将有助于临床结核病的快速诊断。 展开更多

关键词 噬菌体 分枝杆菌 结核 诊断

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结核杆菌利福平与异烟肼耐药基因快速检测用参考品的制备 被引量：3

9

作者 陈保文 沈小兵 +2 位作者 苏城 王国治 景奉香 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期402-404,406,共4页

目的建立结核杆菌利福平与异烟肼耐药基因快速检测用国家参考品。方法收集分枝杆菌菌株,用经典的药敏试验及培养基鉴别试验进行鉴定;用分子生物学技术对耐药菌株的耐药基因进行核苷酸序列分析,并进行突变位点的筛选;选取完全耐药菌株,... 目的建立结核杆菌利福平与异烟肼耐药基因快速检测用国家参考品。方法收集分枝杆菌菌株,用经典的药敏试验及培养基鉴别试验进行鉴定;用分子生物学技术对耐药菌株的耐药基因进行核苷酸序列分析,并进行突变位点的筛选;选取完全耐药菌株,用膜过滤法制备单细胞菌液,进行显微计数。结果选出阳性参考品符合率检测用、含不同突变位点的结核分枝杆菌耐药菌株20株;阴性参考品符合率检测用菌株10株,其中敏感菌株5株,致病性非结核分枝杆菌菌株5株;最低检出量检测用结核分枝杆菌耐药菌株5株,制备浓度为1×106个/ml的单细胞菌液。结论该参考品可以用作结核菌利福平与异烟肼耐药基因快速检测试剂质量的标准。 展开更多

关键词 结核杆菌 药敏试验 耐药基因 参考品

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ELISA检测抗荚膜组织胞浆菌抗体方法的建立 被引量：5

10

作者 王璞 陈保文 +2 位作者 罗永艾 徐苗 王国治 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期87-89,共3页

目的建立检测小鼠血清中抗荚膜组织胞浆菌抗体的ELISA方法。方法制备荚膜组织胞浆菌(HC)抗原和结核分枝杆菌(MTB)抗原免疫小鼠,通过不同免疫次数获得不同效价的小鼠抗HC血清。以荚膜组织胞浆菌蛋白提取物(P-HTPM)为包被抗原,“方阵滴定... 目的建立检测小鼠血清中抗荚膜组织胞浆菌抗体的ELISA方法。方法制备荚膜组织胞浆菌(HC)抗原和结核分枝杆菌(MTB)抗原免疫小鼠,通过不同免疫次数获得不同效价的小鼠抗HC血清。以荚膜组织胞浆菌蛋白提取物(P-HTPM)为包被抗原,“方阵滴定法”确定包被抗原和抗血清的最适工作浓度,建立检测抗HC抗体ELISA法。结果HC抗原免疫小鼠3次获得4份低效价抗血清,平均A值为0.345,免疫4次获得8份高效价血清,平均A值为0.991。ELISA方法中包被抗原和抗血清的最佳工作浓度为1μg?孔及1∶1000。P-HTPM和TB-PPD与各自免疫血清均呈阳性反应,A值分别为0.993±0.216和1.606±0.263,但二者之间无交叉反应。结论本文建立的ELISA方法将成为荚膜组织胞浆菌病和结核病的一种鉴别诊断方法。 展开更多

关键词 荚膜组织胞浆菌 ELISA 结核分枝杆菌

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斑点免疫金渗滤法检测抗荚膜组织胞浆菌抗体的研究 被引量：2

11

作者 王璞 陈保文 +1 位作者 徐苗 王国治 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第20期1979-1981,共3页

目的研究快速检测荚膜组织胞浆菌抗体的方法。方法荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物(P-HTPM)为包被抗原,以葡萄球菌A蛋白(SPA)标记的免疫胶体金为检测标记物,采用斑点免疫金渗滤试验(DIGFA)检测荚膜组织胞浆菌(HC)免疫小鼠血清中抗HC抗体... 目的研究快速检测荚膜组织胞浆菌抗体的方法。方法荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物(P-HTPM)为包被抗原,以葡萄球菌A蛋白(SPA)标记的免疫胶体金为检测标记物,采用斑点免疫金渗滤试验(DIGFA)检测荚膜组织胞浆菌(HC)免疫小鼠血清中抗HC抗体以及其他真菌免疫血清中抗体。结果DIGFA检测20份HC小鼠免疫血清,结果全为阳性,与ELISA检测结果一致,敏感性为100%。检测8份正常小鼠血清出现1份假阳性,特异性为87.5%。检测其他真菌免疫血清结果为:念珠菌属和马尔尼菲青霉菌免疫血清结果全为阴性;8份皮炎芽生菌血清出现1份阳性,9份副球孢子菌血清出现2份阳性。结论斑点免疫金渗滤法检测抗HC抗体有较高的敏感性和特异性,快速简便。经临床标本扩大验证后将对荚膜组织胞浆菌病的快速诊断有应用价值。 展开更多

关键词 荚膜组织胞浆菌 斑点免疫金渗滤法 荚膜组织胞浆菌抗体

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结核分枝杆菌CFP10的基因克隆及表达 被引量：2

12

作者 周丽蓉 徐敬华 +1 位作者 罗永艾 王国治 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期703-705,共3页

目的克隆结核分枝杆菌CFP10基因,在大肠杆菌中进行表达,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR方法对CFP10的基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,将重组质粒先转化入... 目的克隆结核分枝杆菌CFP10基因,在大肠杆菌中进行表达,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR方法对CFP10的基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,将重组质粒先转化入大肠杆菌DH5α中,抽提质粒,进行双酶切鉴定,再转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达形式。结果构建了具有正确基因序列的CFP10重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,为深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 CFP10 基因克隆

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结核分枝杆菌脂多糖的提取及其检测血清结核抗体的研究 被引量：3

13

作者 周丽蓉 罗永艾 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2007年第3期235-237,共3页

目的提取结核分枝杆菌(MTB)脂多糖抗原,检测结核血清参考品,评价其在血清学诊断中的价值。方法将MTB菌体冰浴超声破碎,用酚/氯仿、氯仿/甲醇抽提除去蛋白和脂质,再用DNase I酶和RNase酶作用除去DNA和RNA,得到初步纯化的脂多糖即LPS-1,LP... 目的提取结核分枝杆菌(MTB)脂多糖抗原,检测结核血清参考品,评价其在血清学诊断中的价值。方法将MTB菌体冰浴超声破碎,用酚/氯仿、氯仿/甲醇抽提除去蛋白和脂质,再用DNase I酶和RNase酶作用除去DNA和RNA,得到初步纯化的脂多糖即LPS-1,LPS-1在去污剂Triton-X114作用后,分成含有阿拉伯甘露糖(AM)的水相即LPS-2和含有脂阿拉伯甘露糖(LAM)和脂甘露糖(LM)的有机相即LPS-3,以三种多糖作为抗原,通过ELISA方法检测结核阳性和阴性血清参考品。结果LPS-1对结核血清参考品检测的敏感性为71.7%,特异性为96%,LPS-3的敏感性为43.9%(18/41),而特异性达到100%。结论脂多糖抗原检测血清结核抗体显示出较强的特异性,可望成为结核病血清学的诊断组合抗原之一。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 脂多糖 抗原

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结核分支杆菌14KDa蛋白的基因克隆、表达、纯化及其抗原性的研究 被引量：1

14

作者 周丽蓉 徐敬华 +1 位作者 罗永艾 王国治 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期535-538,共4页

目的基因克隆、表达、纯化结核分枝杆菌14KDa蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增14KDa蛋白基因片断,将其插入到高效表达载体PET-22b(+)上,构建重组质粒PET-22b(+)/... 目的基因克隆、表达、纯化结核分枝杆菌14KDa蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增14KDa蛋白基因片断,将其插入到高效表达载体PET-22b(+)上,构建重组质粒PET-22b(+)/14KDa,重组质粒在大肠杆菌中由IPTG诱导表达,表达产物经金属离子鳌合亲和层析方法纯化,免疫印迹和酶联免疫吸附(ELISA)试验分析重组蛋白的抗原性。结果构建了具有正确基因序列的14KDa蛋白重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶性蛋白形式表达,重组蛋白的表达量占菌体蛋白的40.8%,经过一步金属离子鳌合亲和层析后得到纯度为94.3%的目的蛋白。免疫印迹试验结果表明该蛋白能与羊抗结核血清发生特异免疫结合反应。应用ELISA方法对结核血清参考品进行检测,敏感性和特异性分别为75.6%和96.0%。结论获得了能高效表达14KDa蛋白的大肠杆菌工程菌,目的蛋白以可溶性形式表达,该重组蛋白具有良好的免疫原性,可望成为结核血清学的诊断抗原之一。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 14KDa蛋白 基因表达 抗原性 酶联免疫吸附测定

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一种新的大肠埃希菌O157∶H7 vero细胞毒素的纯化及特性分析 被引量：2

15

作者 张瑾 杨正时 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期343-345,347,共4页

目的研究出血性大肠埃希菌的vero细胞毒素。方法通过超声破碎,硫酸铵沉淀及两次离子交换层析,再经过凝胶过滤,最终从大肠埃希菌O157∶H7 882364菌株获得了一种新的vero细胞毒素。对此毒素进行细胞毒性测定和分子量及等电点的测定,并对... 目的研究出血性大肠埃希菌的vero细胞毒素。方法通过超声破碎,硫酸铵沉淀及两次离子交换层析,再经过凝胶过滤,最终从大肠埃希菌O157∶H7 882364菌株获得了一种新的vero细胞毒素。对此毒素进行细胞毒性测定和分子量及等电点的测定,并对毒素的N端15个氨基酸序列进行了检测。结果用凝较过滤层析测定纯化的vero细胞毒素分子量为43KD,等电点为3.8,蛋白N端15个氨基酸序列为SFELPALPYAKDALA,其对vero细胞的CD50为4bg。结论这种毒素与VT1毒素和VT2毒素明显不同,因此初步确定为新毒素,称之为VT3。通过实验将推动我国对出血性大肠埃希菌O157∶H7的致病性研究和对VT类毒素和抗毒素的进一步研制和应用。 展开更多

关键词 出血性大肠埃希菌O157:H7 Veto细胞毒素 纯化 特性

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培养温度对冻干分枝杆菌菌种复苏的影响 被引量：1

16

作者 闫李侠 居军 +2 位作者 陈保文 刘裕田 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2008年第3期248-250,共3页

关键词 分枝杆菌 菌种 培养温度 冻干

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鲍曼不动杆菌对小鼠致死剂量的研究 被引量：2

17

作者 黄至澄 闫李侠 +2 位作者 王伟平 李恪梅 王国治 《江西医药》 CAS 2011年第11期986-987,共2页

目的探讨鲍曼不动杆菌对小鼠的致死剂量,建立重症感染模型。方法以SPF级昆明小鼠为实验动物,将鲍曼不动杆菌按一定菌液浓度注射入小鼠腹腔,造成小鼠感染。结果经过反复试验,一般情况下5×1010cfu/ml及更高浓度的菌液可导致小鼠死亡... 目的探讨鲍曼不动杆菌对小鼠的致死剂量,建立重症感染模型。方法以SPF级昆明小鼠为实验动物,将鲍曼不动杆菌按一定菌液浓度注射入小鼠腹腔,造成小鼠感染。结果经过反复试验,一般情况下5×1010cfu/ml及更高浓度的菌液可导致小鼠死亡,但经过多次实验后,发现极个别小鼠仍可以生存,死亡时间多数在12h之内。结论为了进一步进行鲍曼不动杆菌的重症感染治疗研究,必须弄清楚不动杆菌感染的致死剂量,建立感染动物模型,才能进行噬菌体治疗的研究,本研究为此提供了基础资料。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 感染 模型

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利用噬菌体快速诊断结核病的研究进展 被引量：3

18

作者 彭丽 罗永艾 王国治 《国外医学（内科学分册）》 2005年第4期139-141,153,共4页

结核病是目前世界单一致病菌中病死率最高的传染病之一。据报道,全球已有三分之一的人感染结核杆菌,每年有200～300万患者死于结核病,这主要归因于愈来愈多的耐药患者。快速诊断和检测药敏来正确指导临床用药成为控制结核病的重要环节... 结核病是目前世界单一致病菌中病死率最高的传染病之一。据报道,全球已有三分之一的人感染结核杆菌,每年有200～300万患者死于结核病,这主要归因于愈来愈多的耐药患者。快速诊断和检测药敏来正确指导临床用药成为控制结核病的重要环节。噬菌体生物扩增法是一种新型的表型技术,可以快速诊断结核病和检测结核菌的药物敏感性。国外研究表明这是一种敏感度和特异度均较高的方法,一般不超过4d就可得知药敏结果,可以与昂贵的分子生物学方法媲美,不需特殊仪器,费用低。 展开更多

关键词 诊断 分枝杆菌 结核 噬菌体

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噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌标准化研究 被引量：23

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作者 彭丽 罗永艾 王国治 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期806-810,共5页

目的　对噬菌体生物扩增法快速检测和鉴别标本中分枝杆菌的方法学进行探讨。方法　对噬菌体生物扩增法的条件 :感染时间、杀灭胞外噬菌体的药物浓度和时间进行探讨和比较 ;观察不同分枝杆菌应用此法的检测灵敏度和特异性 ,以及对呼吸道... 目的　对噬菌体生物扩增法快速检测和鉴别标本中分枝杆菌的方法学进行探讨。方法　对噬菌体生物扩增法的条件 :感染时间、杀灭胞外噬菌体的药物浓度和时间进行探讨和比较 ;观察不同分枝杆菌应用此法的检测灵敏度和特异性 ,以及对呼吸道常见细菌的特异度 ;观察实验中所用噬菌体、杀菌剂、辅助细菌在 2 8～ 4 0周内的稳定性。结果　 (1)结核分枝杆菌与噬菌体感染 3～ 4h时感染效率较高 ,4 %硫酸亚铁胺 10 0 μl作用 5min能全部杀灭 1 1ml中 1× 10 9噬菌斑形成单位(PFU)的噬菌体 ;(2 ) 80～ 2 0 0集落形成单位 (CFU) /ml的结核分枝杆菌活菌能用此法检测出阳性结果 ,非结核分枝杆菌≤ 1× 10 3 CFU/ml时仅耻垢分枝杆菌出现阳性结果 ,特异性为 95 % ,而≥ 1× 10 4CFU/ml时结果依据不同的菌株而不同 ,呼吸道常见的非分枝杆菌细菌用此法的检测特异性为 10 0 % ;(3)液体 4℃保存实验中的主要成分 ,稳定性均较好。结论　应用噬菌体方法可以快速检测和鉴别结核分枝杆菌 ,所需试剂的稳定性较好 ,为广泛应用于临床检测提供了依据。 展开更多

关键词 噬菌体 结核分枝杆菌 扩增 快速检测 阳性结果 特异性 呼吸道 生物 标准化研究 观察实验

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回复严舒俊医师关于结核菌素纯蛋白衍生物的剂量单位问题 被引量：2

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作者 王国治 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期574-574,共1页

最早应用于结核病临床诊断的结核菌素为结核杆菌培养滤液浓缩液稀释的旧结核菌素（OT），其剂量单位采用浓缩液的稀释度，由于不同厂家制备的OT效价常不一致，1931年，由英国制备旧结核菌素参考品，1938年建立了以其活性为指标的结核菌... 最早应用于结核病临床诊断的结核菌素为结核杆菌培养滤液浓缩液稀释的旧结核菌素（OT），其剂量单位采用浓缩液的稀释度，由于不同厂家制备的OT效价常不一致，1931年，由英国制备旧结核菌素参考品，1938年建立了以其活性为指标的结核菌素单位（tuberculin unit，TU）。 展开更多

关键词 结核菌素纯蛋白衍生物 剂量单位 旧结核菌素 医师 回复 结核杆菌培养 临床诊断 不同厂家 浓缩液 稀释度

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