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等温扩增荧光法快速鉴定猪肉掺假
1
作者 姜仁普 梁振瑞 +2 位作者 张薇 段真文 许绍坤 《现代食品》 2025年第4期210-212,219,共4页
本研究为建立快速鉴定猪肉掺假的等温扩增荧光法,实现对猪肉的快速检测,利用PG1引物组结合其他必需的试剂,建立一种等温扩增荧光检测方法。结果表明,本研究设计建立的针对猪肉掺假检测方法,具有特异性和灵敏度好,能够用于猪肉掺假的快... 本研究为建立快速鉴定猪肉掺假的等温扩增荧光法,实现对猪肉的快速检测,利用PG1引物组结合其他必需的试剂,建立一种等温扩增荧光检测方法。结果表明,本研究设计建立的针对猪肉掺假检测方法,具有特异性和灵敏度好,能够用于猪肉掺假的快速鉴别。 展开更多
关键词 等温扩增荧光法 肉掺假 特异性 灵敏度
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等温扩增荧光技术用于检测阪崎肠杆菌的研究
2
作者 段真文 许绍坤 +2 位作者 姜仁普 梁振瑞 张薇 《现代食品》 2025年第5期161-164,共4页
目的:针对阪崎肠杆菌建立一种快速简便的检测方法。方法:通过对阪崎肠杆菌Esa16S基因序列保守区设计引物,建立阪崎肠杆菌的检测方法;采用直扩法提取核酸,通过引物筛选、最佳反应体系、反应条件的优化、特异性验证与常规普通聚合酶链式反... 目的:针对阪崎肠杆菌建立一种快速简便的检测方法。方法:通过对阪崎肠杆菌Esa16S基因序列保守区设计引物,建立阪崎肠杆菌的检测方法;采用直扩法提取核酸,通过引物筛选、最佳反应体系、反应条件的优化、特异性验证与常规普通聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)进行灵敏度对比实验。结果:EBSZ-2为最佳引物组;最佳反应体系配比为15∶6∶4;最佳反应温度为65℃。与常规PCR检测法比较,等温扩增荧光技术的灵敏度为5.76×10^(-4)ng·μL^(-1),是常规方法的1000倍且具有良好的特异性。结论:等温扩增荧光技术可以用来检测阪崎肠杆菌,该技术具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优点,能实现快速检测和现场检测。 展开更多
关键词 ∶等温扩增荧光技术 阪崎肠杆菌 特异性 灵敏度
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鸭坦布苏病毒快速实时荧光RT-LAMP方法的建立及初步应用 被引量：4
3
作者 王巧萍 粟柯衡 +4 位作者 元正菊 常志顺 张薇 张以芳 信爱国 《中国动物检疫》 CAS 2022年第5期103-109,共7页
为建立检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)的荧光逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法,根据DTMUV NS5基因保守序列设计1套特异性引物,对反应时间和温度进行优化,并评价该方法的... 为建立检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)的荧光逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法,根据DTMUV NS5基因保守序列设计1套特异性引物,对反应时间和温度进行优化,并评价该方法的特异性、敏感性、重复性和临床适用性。结果显示:建立的荧光RT-LAMP最优反应条件为65℃25 min;只特异性扩增DTMUV,而不扩增其他几种禽类病毒;最低检测限为4×10^(2)copies/μL,与qRT-PCR方法敏感性一致,是普通RT-PCR的100倍;批内和批间重复性高;应用该方法检测DTMUV不同剂量人工感染鸭肝脏样品,对接毒剂量为10^(3-7)TCID_(50)和10^(2-7)TCID_(50)组的阳性检出率均为100%,对接毒量10^(1.7)TCID_(50)组的阳性检出率为90%(9/10)。结果表明,本研究建立的荧光RT-LAMP检测方法特异性强、重复性好、敏感性高,可成为快速诊断DTMUV的方法之一。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 实时荧光 环介导等温扩增技术 NS5基因
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鸭细小病毒实时荧光LAMP检测方法的建立与应用 被引量：1
4
作者 王耕 田克恭 +4 位作者 张薇 许绍坤 粟柯衡 邓均华 张冲 《畜禽业》 2022年第3期6-8,共3页
鸭细小病毒(Duck parvovirus,MDPV)是细小病毒科依赖病毒属成员。为建立鸭细小病毒(MDPV)快速、便捷、准确、灵敏度高的实时荧光LAMP检测方法,针对鸭细小病毒基因组中相对保守的特异区域设计LAMP引物组,用灭活后的病毒血清样本直接扩增... 鸭细小病毒(Duck parvovirus,MDPV)是细小病毒科依赖病毒属成员。为建立鸭细小病毒(MDPV)快速、便捷、准确、灵敏度高的实时荧光LAMP检测方法,针对鸭细小病毒基因组中相对保守的特异区域设计LAMP引物组,用灭活后的病毒血清样本直接扩增,筛选出一套最优引物组并做特异性和灵敏度实验。结果表明,该引物组特异性扩增鸭细小病毒,对相似的其他病毒和衣原体检测结果为阴性;将模板10倍比例稀释后检测结果限线性范围达6个数量级,检测下限为2 copies,证明该技术方法可应用于鸭细小病毒现场快速检测。 展开更多
关键词 鸭细小病毒 LAMP 快速检测 灵敏 准确 特异
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等温扩增荧光技术快速检测沙门氏菌的研究
5
作者 梁振瑞 张薇 +3 位作者 许绍坤 李鲜鲜 冯红 自武全 《食品安全导刊》 2023年第12期121-123,共3页
本文研究并建立等温扩增荧光技术快速检测沙门氏菌的方法。通过对沙门氏菌的SSAQ基因序列保守区设计引物,采用最佳引物组搭配其他配套试剂建立一种针对沙门氏菌的等温扩增荧光技术快速检测方法;采用直扩法提取DNA,通过等温扩增荧光技术... 本文研究并建立等温扩增荧光技术快速检测沙门氏菌的方法。通过对沙门氏菌的SSAQ基因序列保守区设计引物,采用最佳引物组搭配其他配套试剂建立一种针对沙门氏菌的等温扩增荧光技术快速检测方法;采用直扩法提取DNA,通过等温扩增荧光技术与常规PCR法对不同浓度沙门氏菌进行扩增检测,检测最低检测限,对其灵敏度进行评价。结果表明,所建立的针对沙门氏菌等温扩增荧光检测的方法与常规PCR法相比,等温扩增荧光检测的方法灵敏度更高,且根据干扰实验结果可知该方法对沙门氏菌具有良好的特异性,所建立的针对沙门氏菌的等温扩增荧光技术检测方法具有操作快捷、简便、反应时间较短、良好的特异性和较高的灵敏度的特点,能够用于沙门氏菌的快速检测。 展开更多
关键词 等温扩增荧光技术 沙门氏菌 特异性 灵敏度
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等温扩增荧光法快速鉴定羊肉掺假
6
作者 段真文 许绍坤 +2 位作者 张薇 李鲜鲜 董文玥 《食品安全导刊》 2023年第9期62-64,共3页
本文建立了快速鉴定羊肉掺假的等温扩增荧光检测方法。针对羊的线粒体Cytb基因设计两套引物,在恒温下,以直扩法处理的样本为模板进行扩增,通过特异性、灵敏度实验对该方法体系进行验证和分析。结果表明,最佳反应温度为65℃,最低检测限为... 本文建立了快速鉴定羊肉掺假的等温扩增荧光检测方法。针对羊的线粒体Cytb基因设计两套引物,在恒温下,以直扩法处理的样本为模板进行扩增,通过特异性、灵敏度实验对该方法体系进行验证和分析。结果表明,最佳反应温度为65℃,最低检测限为5.54×10^(-5) ng·μL^(-1)。本研究建立的等温扩增荧光法快速鉴定羊肉掺假结果准确可靠、反应快速,具有良好的特异性和灵敏度,可以同时满足实验室和现场检测要求,为快速鉴定羊肉种属提供了一种新的检测方法,为其他肉类种属快速鉴定提供理论依据。 展开更多
关键词 等温扩增荧光检测方法 羊肉掺假 现场检测
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虎α干扰素与虎白蛋白融合蛋白的表达与鉴定 被引量：1
7
作者 陈明涛 赵永坤 +7 位作者 李元果 孙伟洋 冯娜 高玉伟 任志广 王铁成 邱薇 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第7期783-786,791,共5页
目的通过杆状病毒表达系统表达虎干扰素蛋白及其融合白蛋白后的长效干扰素蛋白。方法合成虎α干扰素基因IFN-α和融合虎白蛋白的长效干扰素基因IFN-α+ALB,经双酶切和酶连后转化大肠埃希菌DH5α获得重组质粒,鉴定正确后转化DH10Bac感受... 目的通过杆状病毒表达系统表达虎干扰素蛋白及其融合白蛋白后的长效干扰素蛋白。方法合成虎α干扰素基因IFN-α和融合虎白蛋白的长效干扰素基因IFN-α+ALB,经双酶切和酶连后转化大肠埃希菌DH5α获得重组质粒,鉴定正确后转化DH10Bac感受态,经蓝白斑筛选获得重组杆状病毒质粒,测序验证后转染昆虫细胞Sf9,并进行盲传。提取P3代细胞的上清基因组,检测目的基因表达情况并大量培养。收集细胞,超声破碎,取上清,经镍柱纯化后获得蛋白IFN-α和IFN-α+ALB,用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白的表达。并通过MDCK-H5N1系统进行重组蛋白的体外活性验证试验。结果构建的重组杆状病毒质粒测序验证正确,转染昆虫细胞Sf9后表达分子质量与预期相一致的两种蛋白,其体外活性试验显示长效干扰素抗病毒效果更好。结论成功构建了虎长效干扰素重组质粒,表达的IFN-α融合虎白蛋白具有长效干扰素作用,为进一步研究对比其与干扰素蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 长效干扰素 干扰素 杆状病毒表达系统
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