锰超氧化物岐化酶模拟化合物诱导K562细胞凋亡的机制研究 被引量：8

1

作者 范临兰 魏虎来 +2 位作者 窦伟 刘伟生 张慧芳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1363-1366,共4页

目的观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物（mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm）对人白血病K562细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制。方法以人白血病K562细胞为靶细胞,四氮唑蓝比色法（MTT法）测定细胞增殖活性;Annexin V/P... 目的观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物（mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm）对人白血病K562细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制。方法以人白血病K562细胞为靶细胞,四氮唑蓝比色法（MTT法）测定细胞增殖活性;Annexin V/PI双标记和细胞形态学法检测细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2和bax基因mRNA的表达水平;流式细胞术（FCM）测定Bcl-2和Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位（Δψm）、细胞色素C（Cyt C）释放和Caspase-3活性变化。结果0.5~10mg·mL-1MnSODm明显抑制K562细胞增殖（P〈0.01）,Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增多,光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;bcl-2基因mRNA和蛋白表达下调,bax基因mRNA和蛋白表达上调,线粒体Δψm降低,Cyt C释放增多,Caspase-3活性增强。结论MnSODm调控Bax/Bcl-2表达,通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡。 展开更多

关键词 MnSOD模拟化合物 K562细胞 凋亡 Bcl-2 BAX 膜电位 细胞色素C CASPASE-3

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siRNA逆转白血病K562/ADM细胞对抗癌药物耐受性的研究 被引量：5

2

作者 祁萍 安娴 +1 位作者 高丽萍 魏虎来 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2008年第9期648-651,共4页

目的:研究小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)对多药耐药细胞K562/ADM耐药性的逆转效应。方法:以K562/ADM细胞为靶细胞,针对mdr1基因mRNA不同靶点设计合成4对siRNA分子,脂质体介导转染K562/ADM细胞,RT-PCR和实时荧光定量PCR检测mdr... 目的:研究小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)对多药耐药细胞K562/ADM耐药性的逆转效应。方法:以K562/ADM细胞为靶细胞,针对mdr1基因mRNA不同靶点设计合成4对siRNA分子,脂质体介导转染K562/ADM细胞,RT-PCR和实时荧光定量PCR检测mdr1基因mRNA的表达水平,流式细胞术(FCM)测定P-糖蛋白(P-gp)表达;MTT比色法检测K562/ADM细胞对多柔比星(ADM)、柔红霉素(DNR)和依托泊苷(Vp-16)的敏感性。结果:选择mdr1mRNA的4个靶点设计合成的siRNA中,针对333靶点的siRNA(simdr1/333)对mdr1基因的表达具有较好的沉默效果,RT-PCR和实时定量PCR检测,mdr1 mRNA表达分别降低69%和63%;FCM检测P-gp的表达强度(MFI)降低约50%。si-mdr1/333可提高K562/ADM细胞对ADM、DNR和Vp-16的敏感性,耐药逆转倍数分别为3.45、1.70和2.91倍。结论:siRNA能特异性地阻抑白血病多药耐药细胞K562/ADM细胞mdr1基因的表达,逆转其对抗癌药物的耐受性。 展开更多

关键词 RNA 小分子干扰 基因 mdr1 基因沉默 抗药性 肿瘤 白血病

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三氧化二砷对淋巴细胞的毒性作用及机制研究 被引量：7

3

作者 李彩丽 魏虎来 +1 位作者 易娟 苏海翔 《兰州大学学报（医学版）》 CAS 2006年第2期4-6,11,共4页

目的研究As2O3对人外周血淋巴细胞的毒性作用,探讨As2O3损伤淋巴细胞的机制。方法从正常人外周血中分离淋巴细胞,台盼蓝染色检测细胞活性;FITG-Annexin-V／PI染色检测细胞凋亡;电镜观察形态学改变;流式细胞术观察细胞bcl-2表达水平。结... 目的研究As2O3对人外周血淋巴细胞的毒性作用,探讨As2O3损伤淋巴细胞的机制。方法从正常人外周血中分离淋巴细胞,台盼蓝染色检测细胞活性;FITG-Annexin-V／PI染色检测细胞凋亡;电镜观察形态学改变;流式细胞术观察细胞bcl-2表达水平。结果 1-50 μmol／L As2O3对正常人外周血淋巴细胞的生长有明显的抑制作用,其抑制效应随着As2O3浓度的增高和作用时间的延长而增强,24、48、72 h的半数抑制浓度分别为7．74、4．81和3．19μmol／L。经10μmol／L As2O3处理的淋巴细胞出现细胞体积缩小、胞质浓缩、染色质聚集、固缩、沿核膜内侧分布呈新月形等典型的凋亡细胞特征性形态改变;2．0—10．0μmol／L As2O3可显著降低淋巴细胞bcl-2蛋白的表达水平。结论 As2O3对人外周血淋巴细胞有明显的毒性效应,主要作用机制为通过抑制bcl-2表达而诱发细胞凋亡。 展开更多

关键词 三氧化二砷 淋巴细胞 细胞凋亡 BCL-2

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三氧化二砷诱导K562/ADM细胞凋亡中mdr1和Survivin基因的表达 被引量：10

4

作者 张亚莉 魏虎来 郭璐 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2006年第8期577-581,共5页

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)诱导白血病多药耐药K562/ADM细胞凋亡过程中mdr1和Sur vivin基因的表达变化。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,细胞形态学、DNA片段化和细胞周期改变观察K562/ADM细胞凋亡;流式... 目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)诱导白血病多药耐药K562/ADM细胞凋亡过程中mdr1和Sur vivin基因的表达变化。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,细胞形态学、DNA片段化和细胞周期改变观察K562/ADM细胞凋亡;流式细胞术(FCM)测定Caspase3活性;RT PCR检测Sur vivin和mdr1mRNA的表达。结果:ATO可抑制K562/ADM细胞增殖,并出现典型凋亡形态改变,DNA电泳出现梯状条带(DNAladder);细胞周期分析显示,2～5μmol/LATO作用24h,细胞被阻滞在G2/M期,G1期细胞减少;72h时Sub G1期细胞分别为25.6%和52.9%。2～5μmol/LATO作用24～48h,mdr1mRNA和SurvivinmRNA表达水平明显下降,48h时mdr1mRNA的抑制率分别为83.4%和87.8%,SurvivinmRNA为21.6%和68.6%。ATO作用后,Caspase3活性明显增强,活化Caspase3由17.9%增加到47.4%。结论:ATO降低K562/ADM细胞mdr1和Survivin基因表达,解除P gp和Survivin对Caspases的抑制效应而促进耐药细胞凋亡。 展开更多

关键词 三氧化二砷 多药耐药 凋亡 mdr1 SURVIVIN CASPASE-3

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MnSOD模拟化合物通过线粒体途径诱导K562/ADM细胞凋亡 被引量：8

5

作者 范临兰 魏虎来 +1 位作者 窦伟 刘伟生 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第24期2248-2251,共4页

目的:观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(Mn-SODm)对人白血病K562/ADM耐药细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制.方法:采用AnnexinV/PI双标记和细胞形态学法检测K562/ADM细胞凋亡;流式细胞术(FCM)检测细胞Bcl-2,Bax蛋白表达水平、线粒体跨... 目的:观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(Mn-SODm)对人白血病K562/ADM耐药细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制.方法:采用AnnexinV/PI双标记和细胞形态学法检测K562/ADM细胞凋亡;流式细胞术(FCM)检测细胞Bcl-2,Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位(Δψm),细胞色素C(Cytc)含量和释放Caspase-3活性变化.结果:10,50mg/LMnSODm处理K562/ADM细胞后,AnnexinV/PI染色显示凋亡细胞明显增多,凋亡率分别为85.1%,96.8%;光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;FCM检测发现Bcl-2蛋白表达下调32%～73%,Bax蛋白表达增高4～10倍;线粒体Δψm释放降低35%～52%;Cytc含量增高28%～75%;Caspase-3活性增强5.1～6.4倍.结论:MnSODmke可抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达,并通过线粒体途径诱发K562/ADM耐药细胞凋亡. 展开更多

关键词 锰超氧化物岐化酶模拟化合物 K562/ADM细胞 细胞凋亡 基因 bcl-2 bax 膜电位 细胞色素C类 半胱氨酶天冬氨酸蛋白酶

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锰超氧化物歧化酶模拟化合物通过Fas途径诱导白血病K562细胞凋亡 被引量：6

6

作者 范临兰 李娟 +2 位作者 魏虎来 窦伟 刘伟生 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2010年第8期847-850,共4页

目的:探讨锰超氧化物歧化酶模拟化合物(mi mics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)对人白血病K562细胞的凋亡诱导效应及作用机制。方法:应用MTT比色法、An-nexin V/PI双标记和细胞形态学法观察细胞凋亡;流式细胞术(FCM)测定Fa... 目的:探讨锰超氧化物歧化酶模拟化合物(mi mics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)对人白血病K562细胞的凋亡诱导效应及作用机制。方法:应用MTT比色法、An-nexin V/PI双标记和细胞形态学法观察细胞凋亡;流式细胞术(FCM)测定Fas蛋白表达水平;RT-PCR检测Caspase-3mRNA的表达水平,比色法测定Caspase-3活性变化。结果:MnSODm作用后K562细胞的增殖受到抑制,Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增多,透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变。同时,Fas蛋白表达水平显著增高,Caspase-3mRNA表达水平明显升高,活性显著增强。结论:MnSODm可能通过Fas途径诱导白血病K562细胞凋亡。 展开更多

关键词 锰超氧化物歧化酶模拟化合物 白血病 细胞凋亡 FAS蛋白 CASPASE-3

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维生素E琥珀酸酯诱导K562/ADM细胞凋亡过程中线粒体结构和功能的改变 被引量：6

7

作者 郭璐 魏虎来 张亚莉 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期997-1001,共5页

目的：观察维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导K562/ADM耐药细胞凋亡过程中线粒体形态及功能的改变。方法：采用annexin V/PI双标记法和透射电镜检测K562/ADM细胞凋亡；电镜观察凋亡细胞线粒体形态结构变化；流式细胞仪(FCM... 目的：观察维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导K562/ADM耐药细胞凋亡过程中线粒体形态及功能的改变。方法：采用annexin V/PI双标记法和透射电镜检测K562/ADM细胞凋亡；电镜观察凋亡细胞线粒体形态结构变化；流式细胞仪(FCM)检测线粒体跨膜电位(△(?)m)和caspase-3活性变化；激光共聚焦显微镜分析细胞色素c(cytochrome c,Cyt c)的释放。结果：20μmol/L和40μmol/L VES处理K562/ADM细胞12～24 h,annexin V/PI染色检测发现早期凋亡细胞明显增加,并呈现典型的凋亡形态改变。线粒体内外膜融合、缩小、碎片化,嵴减少且紊乱；线粒体△(?)m降低,细胞质内Cyt c释放增多；caspase-3活性显著增强。结论：VES可能通过改变线粒体的形态结构和稳定性,导致线粒体膜电位降低,Cytc释放,caspase-3激活而诱发K562/ADM耐药细胞凋亡。 展开更多

关键词 细胞凋亡 线粒体 膜电位 IL-1β转换酶类 细胞色素C 维生素E琥珀酸酯

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siRNA抑制K562/ADM细胞mdr1基因表达并逆转其耐药性 被引量：4

8

作者 高丽萍 魏虎来 +5 位作者 景涛 吴勇杰 陈静 孙静 易娟 赵怀顺 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2007年第1期58-61,共4页

背景与目的白血病耐药性是白血病治疗中的难点,RNAi技术具有特异、高效、毒性小的特点,可高效、特异地抑制特定基因的过度表达。本文研究小干扰RNA分子(siRNA)对白血病多药耐药K562/ADM细胞mdr1基因表达和耐药性的影响。方法设计、筛选... 背景与目的白血病耐药性是白血病治疗中的难点,RNAi技术具有特异、高效、毒性小的特点,可高效、特异地抑制特定基因的过度表达。本文研究小干扰RNA分子(siRNA)对白血病多药耐药K562/ADM细胞mdr1基因表达和耐药性的影响。方法设计、筛选和合成针对mdr1基因的siRNAs(si-mdr1-1,si-mdr1-2),脂质体介导转染K562/ADM细胞;RT-PCR法检测mdr1mRNA的转录;流式细胞术测定P-糖蛋白(P-gp)表达水平;MTT法检测K562/ADM细胞对多柔比星(阿霉素,ADM)的敏感性。结果si-mdr1-1、si-mdr1-2转染24h和48h,si-mdr1-1的抑制率分别为55.5%和22.5%,而si-mdr1-2则分别为16.0%和57.6%。si-mdr1-1和si-mdr1-2作用72h时,P-gp的表达强度分别下降74%和85%。si-mdr1-1和si-mdr1-2均可提高K562/ADM细胞对多柔比星的敏感性、逆转其耐药性,逆转倍数分别为2.52倍和1.96倍。结论siRNA可特异性地沉默mdr1基因的表达,逆转P-gp介导的白血病细胞耐药性。 展开更多

关键词 SIRNA MDR1基因 白血病 耐药性

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三氧化二砷诱导K562／ADM细胞凋亡过程中对bcl-2、survivin、ROS表达的影响 被引量：9

9

作者 张亚莉 魏虎来 孙利军 《中国肿瘤》 CAS 2008年第6期495-498,共4页

[目的]探讨As2O3诱导白血病K562/ADM耐药细胞凋亡的分子机制。[方法]采用MTT比色法检测K562/ADM增殖活性;细胞形态学和AnnexinⅤ/PI双染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2、survivin和caspase-3基因mRNA的表达水平;流式细胞法(FCM)测定bc... [目的]探讨As2O3诱导白血病K562/ADM耐药细胞凋亡的分子机制。[方法]采用MTT比色法检测K562/ADM增殖活性;细胞形态学和AnnexinⅤ/PI双染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2、survivin和caspase-3基因mRNA的表达水平;流式细胞法(FCM)测定bcl-2、caspase-3蛋白表达。激光共聚焦显微镜(LCSM)观察细胞内活性氧(ROS)产生情况。[结果]As2O3显著抑制K562/ADM细胞的增殖;经As2O3处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,AnnexinⅤ/PI双染显示凋亡细胞明显增加;凋亡抑制基因bcl-2、survivinmRNA及bcl-2蛋白表达下调,caspase-3 mRNA表达和caspase-3活性显著增强,ROS活性下降。[结论]As2O3诱导K562/ADM耐药细胞凋亡,与bcl-2和survivin表达下调,caspase-3活化有关,而与活性氧的氧化损伤无关。 展开更多

关键词 三氧化二砷 BCL-2 SURVIVIN CASPASE-3 活性氧 细胞凋亡

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三氧化二砷对K562/ADM耐药细胞凋亡抑制的逆转作用 被引量：3

10

作者 张亚莉 魏虎来 孙利军 《实用医学杂志》 CAS 2007年第23期3651-3654,共4页

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导白血病K562/ADM耐药细胞凋亡的分子机制。方法:采用MTT比色法检测K562/ADM耐药细胞增殖活性,细胞形态学和annexinV /PI双染色检测细胞凋亡,RT-PCR检测mdr1、bcl-2和caspase-3基因mRNA的表达水平,流式细胞... 目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导白血病K562/ADM耐药细胞凋亡的分子机制。方法:采用MTT比色法检测K562/ADM耐药细胞增殖活性,细胞形态学和annexinV /PI双染色检测细胞凋亡,RT-PCR检测mdr1、bcl-2和caspase-3基因mRNA的表达水平,流式细胞法(FCM)测定P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和bcl-2蛋白表达及caspase-3活性。结果:As2O3显著抑制K562/ADM耐药细胞的增殖;经As2O3处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,annexinV /PI双染显示凋亡细胞明显增加;mdr1mRNA表达和P-gp合成明显降低,凋亡抑制基因bcl-2mRNA及其蛋白bcl-2表达下调,caspase-3mRNA表达和caspase-3活性显著增强。结论:As2O3诱导K562/ADM耐药细胞凋亡,其主要机制可能为As2O3抑制mdr1和bcl-2基因表达,逆转耐药白血病细胞因bcl-2和P-gp高表达所介导的凋亡抑制。 展开更多

关键词 白血病 三氧化二砷 细胞凋亡 多药耐药抗药性 多药 凋亡抑制 P-糖蛋白 bcl-2 Caspase-3

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维生素E琥珀酸酯下调mdr1/P-gp表达逆转K562/ADM耐药细胞的凋亡抑制

11

作者 郭璐 魏虎来 +1 位作者 张亚莉 刘建民 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期638-641,F0003,共5页

目的研究维生素E琥珀酸酯(VitaminEsuccinate,VES)诱导多药耐药K562/ADM细胞凋亡的分子机制。方法采用四氮唑蓝比色法(MTT)检测K562/ADM增殖活性;细胞形态学和AnnexinV/PI双标记法检测细胞凋亡;RT-PCR检测mdr1基因和Caspase-3基因mRNA... 目的研究维生素E琥珀酸酯(VitaminEsuccinate,VES)诱导多药耐药K562/ADM细胞凋亡的分子机制。方法采用四氮唑蓝比色法(MTT)检测K562/ADM增殖活性;细胞形态学和AnnexinV/PI双标记法检测细胞凋亡;RT-PCR检测mdr1基因和Caspase-3基因mRNA的表达;流式细胞法(FCM)测定P-gp蛋白表达水平和Caspase-3活性。结果VES显著抑制K562/ADM细胞的增殖;经VES处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变;AnnexinⅤ/PI双染检测凋亡细胞明显增加;mdr1mRNA表达和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)合成明显降低,Caspase-3mRNA表达和Caspase-3活性显著增强;VES增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性。结论VES诱导mdr1/P-gp高表达的K562/ADM耐药细胞凋亡,其主要机制为下调mdr1/P-gp表达而逆转P-gp介导的细胞凋亡抑制和耐药性。 展开更多

关键词 维生素 E琥珀酸酯 多药耐药 凋亡抑制 P-糖蛋白 Caspase-3 白血病

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靶向siRNA沉默mdr1基因表达及对白血病耐药细胞系K562/ADM的耐药逆转作用 被引量：5

12

作者 魏虎来 高丽萍 +4 位作者 景涛 赵怀顺 易娟 孙静 韩俭 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期388-390,共3页

目的研究小干扰 RNA(siRNA)对白血病多药耐药细胞系 K562/ADM 细胞 mdr1基因表达的沉默作用和凋亡抑制的逆转效应。方法 K562/ADM 为靶细胞,设汁、筛选和合成2对针对mdr1基因 mRNA 的 siRNA(mdr1 siRNA-1和 mdr1 siRNA-2),用脂质体介导... 目的研究小干扰 RNA(siRNA)对白血病多药耐药细胞系 K562/ADM 细胞 mdr1基因表达的沉默作用和凋亡抑制的逆转效应。方法 K562/ADM 为靶细胞,设汁、筛选和合成2对针对mdr1基因 mRNA 的 siRNA(mdr1 siRNA-1和 mdr1 siRNA-2),用脂质体介导转染 K562/ADM 细胞;实时荧光定量 PCR(real-tMe PCR)法检测 mdr1 mRNA 的表达;流式细胞术测定 P-糖蛋白(P-gp)水平和caspase-3活性;细胞形态学和 FITC 标记的膜联蛋白 V/碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)双染色法检测细胞的凋亡。结果筛选出的 mdr1 siRNA-1和 mdr1 siRNA-2显著抑制 K562/ADM 细胞 mdr1的表达,mdr1 mRNA 的表达分别降低91.2%和82.0%,P-gp 水平下降74.1%和84.4%;增强 caspase-3活性,活化 caspase-3增加约40%;K562/ADM 耐药细胞对阿霉素诱导凋亡的敏感性增强,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡率提高约60%。结论 siRNA 通过沉默 mdr1/P-gp 表达而逆转 K562/ADM 多药耐药细胞的凋亡抑制现象。 展开更多

关键词 RNA干扰 基因 mdr1 抗药性 多药 细胞凋亡

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