结核病免疫机制及疫苗研究进展 被引量：9

1

作者 达泽蛟 祝秉东 张颖 《微生物与感染》 2011年第3期169-178,共10页

结核病是一种棘手的重大传染病。虽然存在一些有一定疗效的治疗药物,亦有预防性疫苗———卡介苗(BCG);但结核病仍在世界范围流行,且发病率和病死率居高不下。结核病的免疫病理机制及疫苗研究近年来取得了一定的进展。结核分枝杆菌通过T... 结核病是一种棘手的重大传染病。虽然存在一些有一定疗效的治疗药物,亦有预防性疫苗———卡介苗(BCG);但结核病仍在世界范围流行,且发病率和病死率居高不下。结核病的免疫病理机制及疫苗研究近年来取得了一定的进展。结核分枝杆菌通过Toll样受体(TLR)等模式识别受体,激活巨噬细胞的天然免疫反应,清除细菌和调节获得性免疫反应。包括主要组织相容性复合物(MHC)限制的CD4+和CD8+T细胞,以及CD1限制的T细胞和γδT细胞参与抗结核获得性免疫反应,其中记忆性T细胞与调节性T细胞具有重要的免疫调节作用。但是,人们对结核病发生机制的认识仍然不足,限制了对结核病治疗药物和新型疫苗的研发。由于BCG对成人缺乏有效的保护力,故研制新型的结核疫苗是预防结核病的当务之急。当前处于实验阶段的候选疫苗包括重组BCG、减毒结核分枝杆菌和可用于加强BCG的亚单位疫苗,后者又包括痘苗病毒载体疫苗、核酸疫苗、新型佐剂辅助的蛋白疫苗。目前可行的疫苗免疫策略主要是使用BCG或其他疫苗初次免疫,然后选择亚单位疫苗加强免疫。然而,疫苗的免疫策略、免疫剂量、免疫途径、强化免疫次数和免疫时机都有待研究。反映疫苗保护力的免疫指标不明确、很难确定哪类疫苗进入临床试验、缺乏临床试验场地、疫苗效果评价需要很长时间及耗资巨大,增加了结核疫苗研究的难度和风险。 展开更多

关键词 结核病 免疫学 疫苗

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结核分枝杆菌ESAT6-RpfE亚单位疫苗的构建与免疫原性研究 被引量：3

2

作者 李志 达泽蛟 +5 位作者 章国平 李瑞营 刘万波 苏娟 张颖 祝秉东 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期154-160,共7页

目的构建Mtb ESAT6-RpfE(早期分泌抗原靶6-复活促进因子E)的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。方法分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表... 目的构建Mtb ESAT6-RpfE(早期分泌抗原靶6-复活促进因子E)的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。方法分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表达纯化ESAT6-RpfE蛋白。采用完全随机的方法将C57BL/6小鼠分组,每组6只,共进行了两次实验,第一次实验分为ESAT6、RpfE、ESAT6-RpfE、PBS、BCG五组,佐剂为二甲基三十六烷基胺(dimethyl-dioctyldecyl ammonium bromide,DDA);第二次实验有ESAT6-RpfE、PBS、BCG三组,佐剂为DPG[DDA+poly(I:C)+明胶]。分别于0、3、6周皮下免疫C57BL/6小鼠。末次免疫8周后,用特异性抗原ESAT6及RpfE刺激,检测其分泌IFN-γ的水平;ELISA检测血清特异性抗体IgG2b、IgG1。结果PCR扩增的esat6、rpfE基因序列与GenBank报道一致;融合蛋白主要以包涵体形式表达;亚单位疫苗免疫动物能够分泌RpfE特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(427.13±100.46)]显著高于PBS组(26.13±22.34;q=7.924,P<0.001);分泌ESAT6刺激特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(506.50±140.40)]明显高于PBS组(19.25±14.75;q=11.36,P<0.001)和BCG组(125.5±46.41;q=8.882,P<0.001)。ESAT6-RpfE免疫组能诱导产生特异性抗体。结论成功构建并表达ESAT6-RpfE融合蛋白。此融合蛋白可在C57BL/6小鼠中诱导抗原特异性的免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究。 展开更多

关键词 疫苗 亚单位 重组融合蛋白质类 细菌蛋白质类 细胞因子类 免疫活性

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分枝杆菌所致家兔皮肤液化病理模型研究 被引量：9

3

作者 王明珠 史大中 +3 位作者 杨爱军 焦志刚 祝秉东 张颖 《微生物与感染》 2008年第4期208-211,218,共5页

目的建立卡介苗(BCG)、H37Ra和耻垢分枝杆菌感染的新西兰兔皮肤模型,为肺结核干酪样坏死和继而发生的液化提供研究模型。方法新西兰兔皮内分别注射BCG、H37Ra和耻垢分枝杆菌的5×106CFU、5×104CFU、5×102CFU/ml菌液,6周... 目的建立卡介苗(BCG)、H37Ra和耻垢分枝杆菌感染的新西兰兔皮肤模型,为肺结核干酪样坏死和继而发生的液化提供研究模型。方法新西兰兔皮内分别注射BCG、H37Ra和耻垢分枝杆菌的5×106CFU、5×104CFU、5×102CFU/ml菌液,6周后在病灶周围再次以相同剂量皮内注射,14d后病变明显时取材,制作切片,行HE染色,显微镜下观察。结果新西兰兔分别经皮内接种BCG、H37Ra或耻垢分枝杆菌后,高剂量组观察到明显的炎症反应和脓肿液化、破溃等改变。再次免疫可观察到郭霍现象。引起病变的严重程度依次为BCG强于H37Ra,后者又强于耻垢分枝杆菌。显微改变可具典型的结核结节样病灶。皮肤模型处取材,行细菌抗酸染色,结果阳性。BCG中、低剂量组再次免疫可诱导小结节样病变,但不发生液化溃疡,其余中剂量组及低剂量组没有观察到明显改变。结论BCG、H37Ra和耻垢分枝杆菌均可引起皮肤干酪样坏死和液化,病理损伤与感染细菌剂量密切相关,5×106CFU/ml浓度的分枝杆菌可有效诱导液化和坏死,其中BCG引起的病理改变最明显。 展开更多

关键词 结核病 分枝杆菌 病理 新西兰兔 动物模型

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二甲基三十六烷基铵及卡介苗多糖核酸佐剂在结核亚单位疫苗加强BCG免疫中的效应研究 被引量：6

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作者 达泽蛟 胡丽娜 +5 位作者 王秉翔 姜雯雯 傅林锋 于红娟 雒彧 祝秉东 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期555-559,共5页

目的 探讨二甲基三十六烷基铵（dimo-thylidioctyl ammonium bromide,DDA）和卡介苗多糖核酸（BCC-PSN）佐剂在结核融合蛋白疫苗加强卡介苗（BCG）免疫中的不同免疫辅助效应.方法 选择DDA、BCG-PSN作为融合蛋白AMM（Ag85B-MPT64190-198-... 目的 探讨二甲基三十六烷基铵（dimo-thylidioctyl ammonium bromide,DDA）和卡介苗多糖核酸（BCC-PSN）佐剂在结核融合蛋白疫苗加强卡介苗（BCG）免疫中的不同免疫辅助效应.方法 选择DDA、BCG-PSN作为融合蛋白AMM（Ag85B-MPT64190-198-Mtb8.4）的佐剂,在BCG初免小鼠后,AMM疫苗加强免疫两次,其中一组联合使用两种佐剂（DDA/BCG-PSN）,另一组单独以DDA作为佐剂,同时设立BCG或磷酸缓冲液（PBS）免疫组为对照.应用ELISA及ELISPOT检测免疫小鼠的体液与细胞免疫反应,最后一次加强免疫后第12周,以H37Rv尾静脉攻毒并检测小鼠肺脾组织细菌载量和病理改变,评价不同佐剂疫苗的保护效果.结果 在BCG初免基础上,联合佐剂组（AMM/DDA/BCG-PSN）和单独佐剂组（AMM/DDA）加强免疫两次后,脾脏淋巴细胞经抗原Ag85B和PPD（purified protein derivative）刺激后,皆可产生分泌较BCG组高的IFN-γ.毒力株攻击后菌落形成单位（colony-forming unit,CFU）计数显示,联合佐剂组（AMM/DDA/BCG-PSN）脾脏荷菌量少于PBS组和BCG组（P〈0.05）;而单独佐剂组（AMM/DDA）肺部荷菌量少于PBS组和BCG组（P〈0.05）.组织病理分析结果 表明AMM/DDA/BCG-PSN组肺组织病理损伤较轻,而AMM/DDA组病理损伤个体差异较大.结论 DDA是较为理想的结核亚单位疫苗佐剂,能诱导较强的细胞免疫和免疫保护作用;BCG-PSN可能具有免疫调节作用,可以减轻免疫病理损伤. 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 亚单位疫苗 佐剂

原文传递

1例L型支气管戈登菌肺部感染的报道 被引量：2

5

作者 陈玉芊 同重湘 +4 位作者 姜元 水永珍 田丽丽 张颖 祝秉东 《微生物与感染》 2010年第2期93-99,共7页

放线菌目戈登菌属支气管戈登菌存在于环境中,在机体免疫力下降时可感染致病。从1例肺部感染4年的78岁患者痰标本中分离出1株菌株,经聚合酶链反应(PCR)扩增16SrRNADNA,序列比对分析证实为支气管戈登菌。该菌株在含蔗糖的Middlebrook7H9(7... 放线菌目戈登菌属支气管戈登菌存在于环境中,在机体免疫力下降时可感染致病。从1例肺部感染4年的78岁患者痰标本中分离出1株菌株,经聚合酶链反应(PCR)扩增16SrRNADNA,序列比对分析证实为支气管戈登菌。该菌株在含蔗糖的Middlebrook7H9(7H9-L)半固体培养基上呈煎蛋样嵌入性生长,在含氯化钠的92-3TB(92-3TB-L)液体培养基也生长,而在罗氏培养基、BACTECMGIT-960、不含氯化钠的92-3TB(92-3TB-B)液体培养基及不含蔗糖的Middlebrook7H9(7H9-B)半固体培养基不生长。涂片抗酸染色显微镜下可见大小不等的抗酸染色阴性球状或短杆状菌。传代培养2代后可见橘红色菌落,涂片抗酸染色可见少量抗酸染色弱阳性杆状菌,革兰染色及扫描电子显微镜观察菌体为杆状。结果表明,从患者痰液中分离的菌株为L型支气管戈登菌,提示肺部感染迁延不愈的免疫力低下患者需考虑感染L型支气管戈登菌的可能。 展开更多

关键词 支气管戈登菌 L型 感染

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两株鼻疽诺卡菌临床分离株的鉴定

6

作者 李文杰 同重湘 +1 位作者 姜元 高娃 《分子诊断与治疗杂志》 2012年第6期389-392,共4页

目的应用基因测序方法对2株疑似非结核分枝杆菌的菌株进行初步菌种鉴定,指导临床用药治疗。方法将2株临床分离菌株1520、4108分别接种于罗氏培养基,观察其菌落生长状况;取生长对数期菌落,抽提菌株DNA;PCR扩增16SrDNA基因序列,对其PCR产... 目的应用基因测序方法对2株疑似非结核分枝杆菌的菌株进行初步菌种鉴定,指导临床用药治疗。方法将2株临床分离菌株1520、4108分别接种于罗氏培养基,观察其菌落生长状况;取生长对数期菌落,抽提菌株DNA;PCR扩增16SrDNA基因序列,对其PCR产物进行测序和NCBI网站Blast同源性比对,以进行菌株的初步鉴定。结果编号为1520、4108两株菌株,在罗氏培养基上生长迅速,均可见淡黄色粗颗粒样小菌落,疑似非结核分枝杆菌;以PCR扩增两株菌的16SrDNA基因序列,结果与鼻疽诺卡菌(Nocardia farcinica)同源性极高,比例均达到99%。结论从肺科急诊患者体内分离到的菌株1520、4108为鼻疽诺卡菌,而不是非结核分枝杆菌,为临床在治疗方案上提供了有力的证据。同时,DNA测序分析能够快速、简便、准确地鉴定到菌种,为实验室疑难菌型鉴定提供了技术保障。 展开更多

关键词 非结核分枝杆菌 菌种鉴定 16SrDNA 鼻疽诺卡菌

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二甲基三十六烷基铵-卡介苗多糖核酸在结核亚单位疫苗中的佐剂效应 被引量：2

7

作者 宋楠楠 王秉翔 +9 位作者 史大中 傅林锋 雒彧 于红娟 韩少波 焦磊 郄亚卿 王洪海 张颖 祝秉东 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期513-516,共4页

目的探讨二甲基三十六烷基铵（DDA）、卡介苗多糖核酸（BCG—PSN）作为结核病融合蛋白疫苗佐剂的免疫效应。方法采用热酚法制备BCG—PSN，与DDA联合作为融合蛋白AMM（Ag85B—MPT64 190-196-Mtb8．4）佐剂免疫小鼠，设卡介苗、生理盐水... 目的探讨二甲基三十六烷基铵（DDA）、卡介苗多糖核酸（BCG—PSN）作为结核病融合蛋白疫苗佐剂的免疫效应。方法采用热酚法制备BCG—PSN，与DDA联合作为融合蛋白AMM（Ag85B—MPT64 190-196-Mtb8．4）佐剂免疫小鼠，设卡介苗、生理盐水、弗氏不完全佐剂（IFA）及单独应用DDA或BCG—PSN一种佐剂的各组作为对照。应用ELISA和酶联免疫斑点法检测免疫小鼠的体液与细胞免疫反应。结果分离培养疫苗免疫小鼠的脾脏淋巴细胞，用特异性抗原Ag85B刺激后，AMM＋DDA＋BCG—PSN疫苗组、AMM＋DDA组和卡介苗组小鼠每1×10^6个脾淋巴细胞分泌γ-干扰素的细胞数分别为222±79、259±85和230±64，均明显高于AMM＋PBS组（40±4）、AMM＋IFA组（10±3）、AMM＋BCG．PSN组（132±18）和生理盐水组（8±4），差异有统计学意义（t值为2．923—7．118，均P〈0．05）；与单用DDA组比较，添加DDA和BCG—PSN两种佐剂的疫苗组小鼠血清抗体滴度Ig2／IgG，较高（0．125和0．025），但γ-干扰素分泌水平没有增高。结论AMM＋DDA＋BCG—PSN结核病亚单位疫苗能够引起较强的Th1细胞免疫为主的免疫反应，DDA＋BCG—PSN（尤其是DDA）具有增强结核病亚单位疫苗Th1细胞免疫应答的佐剂效应。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 疫苗 亚单位 卡介苗

原文传递

变性高效液相色谱法检测结核分枝杆菌利福平耐药基因突变的初步探索 被引量：2

8

作者 李苗 司红艳 +5 位作者 郭璐 李培强 祝秉东 杨克虎 张颖 景涛 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期128-131,共4页

目的探讨变性高效液相色谱（DHPLC）技术在MTB的利福平耐药菌株rpoB基因突变检测中的应用价值。方法PCR扩增MTB的rpoB基因利福平耐药决定区，扩增产物与野生型DNA链形成异源双链，在65．4℃柱温下进行DHPLC分析。对DHPLC不同峰型菌株的r... 目的探讨变性高效液相色谱（DHPLC）技术在MTB的利福平耐药菌株rpoB基因突变检测中的应用价值。方法PCR扩增MTB的rpoB基因利福平耐药决定区，扩增产物与野生型DNA链形成异源双链，在65．4℃柱温下进行DHPLC分析。对DHPLC不同峰型菌株的rpoB基因片段进行测序，评价DHPLC技术的敏感度和特异度。结果共分析46株MTB菌株，其中42株对利福平耐药，4株对利福平敏感。经DHPLC分析，产生15种不同图谱。测序结果表明，各图谱菌株突变特征不同。除D108和D24菌株的DHPLC峰形相同而突变特征不同外，其他菌株均为DHPLC峰型与基因多态性相一致，即DHPLC峰型相同则基因多态性相同，DHPLC峰型不同则基因多态性不同。结论DHPLC具有简便快捷、高通量和自动化的特点，敏感度和特异度高，可用于快速检测耐药MTB的基因突变。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 抗药性 突变 色谱法 高压液相

原文传递

结核分枝杆菌抗原Ag85B-Mpt64 190-198-HspX融合蛋白免疫原性的初步观察 被引量：2

9

作者 李青 姜雯雯 +6 位作者 雒彧 于红娟 宋楠楠 王秉翔 刘昕 张颖 祝秉东 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期103-107,共5页

目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答，本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190～198位的氨基酸多肽（CD8^＋T细胞表位）及Ag85B，构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX（AMH），并对其... 目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答，本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190～198位的氨基酸多肽（CD8^＋T细胞表位）及Ag85B，构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX（AMH），并对其免疫原性进行研究。方法PCR分别扩增Ag85B、Mpt64 190-198-HspX基因，并依次插入pET-28a质粒中，在大肠杆菌BL21中表达纯化AMH蛋白。将该蛋白和佐剂二甲基三十六烷基铵和卡介苗多糖核酸（DDA＋BCG—PSN）混合构建亚单位疫苗，分别于1、4、7周皮下免疫C57BL／6小鼠3次，最后一次免疫5周后检测体液免疫与细胞免疫反应。结果该融合蛋白以包涵体形式能在大肠杆菌中稳定表达，经Ni—NTA层析柱纯化得到纯度较高的蛋白；构建的亚单位疫苗免疫动物能产生针对结核杆菌特定抗原（PPD、Ag85B、Mpt64 190-198和HspX）的特异性的细胞免疫和体液免疫应答，具有较强的免疫原性。结论融合蛋白AMH作为结核亚单位疫苗候选的融合蛋白抗原有必要进一步研究。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 亚单位疫苗 融合蛋白 AG85B HSPX

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结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力 被引量：1

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作者 李青 傅林锋 +5 位作者 王秉翔 姜雯雯 于红娟 雒彧 张颖 祝秉东 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期280-285,共6页

目的探讨结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力。方法将Ag85B、Ag85B-Mpt64190-198-HspX(AMH)、Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4(AMM)以及AMH+AMM蛋白分别与佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和卡介苗多糖核酸(BCG-P... 目的探讨结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力。方法将Ag85B、Ag85B-Mpt64190-198-HspX(AMH)、Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4(AMM)以及AMH+AMM蛋白分别与佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)混合,制备亚单位疫苗。第0周用BCG皮下免疫C57BL/6小鼠,第8、10周分别用各蛋白疫苗皮下加强免疫,以PBS和BCG(仅免疫1次)作为对照。末次免疫后4周,采血检测血清抗体水平,并分离脾淋巴细胞,检测分泌IFNγ的水平;末次免疫后12周,经尾静脉注射H37Rv株,6周后取肺,进行菌落计数,抗酸及HE染色观察。结果各亚单位疫苗加强组诱导产生的特异性抗Ag85BIgG抗体水平均明显高于BCG组;融合蛋白疫苗加强组免疫小鼠脾细胞经Ag85B和PPD刺激后,产生分泌IFNγ的淋巴细胞数明显多于BCG组;融合蛋白加强组免疫小鼠肺组织结核结节面积与BCG组比较,差异无统计学意义;仅AMM+AMH加强组免疫小鼠肺组织菌落计数明显低于BCG组,其抗酸染色阳性细菌数明显低于PBS、BCG及AMH、Ag85B加强组。结论AMH和AMM疫苗联合加强BCG免疫,能诱导小鼠特异性的细胞免疫和体液免疫应答,具有较强的免疫原性,可增强BCG的保护效力。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 融合蛋白 亚单位疫苗 初始-强化免疫策略

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甘肃省甘南、定西两地耐异烟肼、利福平结核分枝杆菌散在分布重复单位基因分型 被引量：3

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作者 司红艳 李苗 +7 位作者 甘培尚 田丽丽 姜维民 杨枢敏 景涛 张文宏 张颖 祝秉东 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期76-81,共6页

结核病是当今全球范围内对人类最具威胁的传染性疾病之一。针对其致病菌——结核分枝杆菌的分子流行病学，目前已建立多种基因分型技术，如IS6110-限制性片段长度多态性分析（RFLP），

关键词 结核分枝杆菌 基因分型技术 耐异烟肼 限制性片段长度多态性分析 甘肃省 利福平 分子流行病学 传染性疾病

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