利用套式PCR法检测内蒙古部分地区奶牛隐孢子虫感染情况及其虫种鉴定 被引量：1

1

作者 尹相吉 聂福贵 +9 位作者 郭少平 钱英红 陈湘江 徐跃峰 王新芳 郭宏年 梁萌 王文蕊 杨晓野 王瑞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第16期92-96,共5页

为了调查内蒙古部分地区规模化牛场奶牛隐孢子虫的感染情况及其虫种类型,试验在4个牛场采集了295份奶牛的粪样,从粪便样品中直接提取DNA进行套式PCR法检测,之后将其目的片段克隆至p GM-T载体上进行测序和同源性分析以鉴定虫种。结果表... 为了调查内蒙古部分地区规模化牛场奶牛隐孢子虫的感染情况及其虫种类型,试验在4个牛场采集了295份奶牛的粪样,从粪便样品中直接提取DNA进行套式PCR法检测,之后将其目的片段克隆至p GM-T载体上进行测序和同源性分析以鉴定虫种。结果表明：可通过套式PCR法从阳性粪便的DNA抽提物中扩增出目的条带,大小分别为800 bp和505 bp;对测得的序列和NCBI上已发表的安氏隐孢子虫（C.andersoni）18S rRNA基因序列进行BLAST比对分析,相似度为100%;采集样品的阳性率为14.9%（44/295）。说明套式PCR法可用于检测奶牛粪便样品中的隐孢子虫,且在一定程度上能够很好地反映出奶牛隐孢子虫的感染情况,并能有效鉴别其虫种。 展开更多

关键词 隐孢子虫 套式PCR 奶牛粪便 内蒙古 同源性分析 18S RRNA基因

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猪疾病预防兽医学分类及其针对性有效防治措施的思考 被引量：8

2

作者 汤君宇 智宇 《现代农业》 2019年第2期75-77,共3页

随着我国社会经济的快速发展,人民生活质量不断提高,对于猪肉的需求也在不断扩大,但是由于当前我国食品卫生安全问题形势严峻,各种病死猪肉在市场上广为流通,很容易给消费者带来安全隐患,为此必须要加强对于猪病的预防、兽医学分类,并... 随着我国社会经济的快速发展,人民生活质量不断提高,对于猪肉的需求也在不断扩大,但是由于当前我国食品卫生安全问题形势严峻,各种病死猪肉在市场上广为流通,很容易给消费者带来安全隐患,为此必须要加强对于猪病的预防、兽医学分类,并且通过针对性的有效防治措施,提高猪肉质量,保障人民群众的健康安全。 展开更多

关键词 猪疾病 预防兽医学 分类 防治措施

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片形吸虫病诊断技术研究概况 被引量：1

3

作者 乌日力格 李娜 +4 位作者 海鹰 哈斯毕力格 侯斌 格日勒格拉巴 哈斯苏荣 《动物医学进展》 北大核心 2024年第10期101-104,共4页

片形吸虫病是由肝片吸虫、大片吸虫及其中间型感染引起的全球性人兽共患寄生虫病,不仅对养殖业造成巨大经济损失,还威胁着人类的健康。目前在家畜片形吸虫病的诊断、药物防治方面虽然取得了一定的进展,但尚未有效控制该病的广泛流行,并... 片形吸虫病是由肝片吸虫、大片吸虫及其中间型感染引起的全球性人兽共患寄生虫病,不仅对养殖业造成巨大经济损失,还威胁着人类的健康。目前在家畜片形吸虫病的诊断、药物防治方面虽然取得了一定的进展,但尚未有效控制该病的广泛流行,并已认识到控制该病的关键在于实现早期诊断。因此,亟待建立特异性强、灵敏度高的早期诊断技术和检测方法。论文综述了片形吸虫病的病原学诊断、免疫学诊断及分子生物学诊断技术的最新研究进展,为系统了解家畜片形吸虫病的诊断方法及进一步研究开发准确率更高、特异性更强的新型诊断方法提供线索。 展开更多

关键词 片形吸虫病 病原学诊断 免疫学诊断 分子生物学诊断

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浅谈兽医微生物学实验课程改革思路及策略

4

作者 温靖 刘大程 《中文科技期刊数据库（全文版）教育科学》 2023年第9期147-151,共5页

兽医微生物学作为重要的动物医学专业基础课,实验是理论教学的重要支撑。如何优化实验各环节操作、深化实验教学内容改革,即成为兽医微生物学实验教学中的关键点。本文作者凭借多年兽医微生物本科实验教学经验的积累,提出了对兽医微生... 兽医微生物学作为重要的动物医学专业基础课,实验是理论教学的重要支撑。如何优化实验各环节操作、深化实验教学内容改革,即成为兽医微生物学实验教学中的关键点。本文作者凭借多年兽医微生物本科实验教学经验的积累,提出了对兽医微生物实验课程内容改革的建议。实践证明,这些建议能够在实际教学中得到有效实施,进而改善学生对兽医微生物实验的理解和学习兴趣。通过本次实验教学改革,学生设计实验的能力得到有效提升,且兽医微生物学实验更符合兽医教学对本科生的培养目标。具体来说,教学改革主要包括以下几个方面:首先,实验教学大纲的更新,使实验内容更加贴近兽医微生物学前沿研究。其次,创新实验教学方式,增加学生实践机会,让学生更好地理解实验原理与应用。再者,将实验教学和理论教学相互结合,使学生在实验中能够更好地理解前期理论知识。最后,加强实验室管理,提高实验安全意识,确保实验工作的顺利进行。通过这些改革,兽医微生物学实验教学的质量得到有效提升,有利于培养出更多具备扎实理论基础和实践操作能力的优秀兽医专业人才。 展开更多

关键词 兽医微生物学 本科教学 课程改革 课程内容 实践教学

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麝科动物的起源进化与遗传多样性研究进展 被引量：5

5

作者 肖宇辰 伊丽 +1 位作者 孟根达来 哈斯苏荣 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第8期8-13,共6页

对麝科动物的分子遗传学研究不仅可加深人们对麝科起源及物种形成的认识,而且对麝科动物群体遗传多样性的保护具有重要意义。随着现代高通量测序技术及分子遗传学、生物信息学的迅速发展,人们对麝科起源与进化进行了较为系统的研究,取... 对麝科动物的分子遗传学研究不仅可加深人们对麝科起源及物种形成的认识,而且对麝科动物群体遗传多样性的保护具有重要意义。随着现代高通量测序技术及分子遗传学、生物信息学的迅速发展,人们对麝科起源与进化进行了较为系统的研究,取得了可喜成果。文章就近年来国内外对麝科动物的起源进化和遗传多样性研究进展进行回顾,揭示麝科动物的演化史,利用分子遗传标记、基因组学、转录组学等先进技术,研究麝科动物的遗传多样性以及麝香分泌相关机制或功能基因,并对未来麝科动物起源进化以及遗传多样性研究趋势进行了展望。 展开更多

关键词 麝 起源 进化 遗传多样性 转录组 基因组

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影像技术辅助针灸穴位取穴施针方法的探讨 被引量：3

6

作者 董晓峰 胡格吉乐图 +1 位作者 院树刚 巴音吉日嘎拉 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第6期98-103,共6页

为了对一些用传统方法难以取穴的穴位进行定位,试验采用B型超声波和X射线分别对以骨骼、血管、肌肉、肌腱为参照标志的穴位进行定位施针。结果表明:对一些用传统方法难以取穴的穴位,借助B型超声波、X射线等,能对大多数穴位进行准确定位... 为了对一些用传统方法难以取穴的穴位进行定位,试验采用B型超声波和X射线分别对以骨骼、血管、肌肉、肌腱为参照标志的穴位进行定位施针。结果表明:对一些用传统方法难以取穴的穴位,借助B型超声波、X射线等,能对大多数穴位进行准确定位,对于某些穴位还能辨别进针的路径、角度与深度。 展开更多

关键词 影像诊断技术 穴位 定位 施针 针灸

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捕食动物线虫性真菌相关研究进展 被引量：1

7

作者 侯斌 母晓佳 +5 位作者 牛杰康 尚世杰 樊雅茹 丁玉林 王瑞 杜山 《动物医学进展》 北大核心 2021年第7期80-85,共6页

畜禽线虫病是由线形动物门中多种线虫引起的一类寄生虫病,给养殖业带来了严重的经济损失。长久以来,采用化学药物驱虫进行防治产生的耐药性、环境污染及动物源性食品药物残留等问题愈发严重,迫切需要寻找能替代化学药物驱虫的防治手段... 畜禽线虫病是由线形动物门中多种线虫引起的一类寄生虫病,给养殖业带来了严重的经济损失。长久以来,采用化学药物驱虫进行防治产生的耐药性、环境污染及动物源性食品药物残留等问题愈发严重,迫切需要寻找能替代化学药物驱虫的防治手段。利用捕食线虫性真菌进行动物寄生性线虫的生物防治对建立可持续发展战略和无公害农业具有重要意义。通过综述捕食线虫性真菌的捕食活性、捕食器形成、真菌基因组学及相关捕食机制到应用模式的研究现状,以期为捕食线虫性真菌的后续深入研究和应用提供参考。 展开更多

关键词 畜禽线虫病 捕食线虫性真菌 捕食器形成 捕食机制 应用模式

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本科生导师制在动物病理学教学实施的初探 被引量：2

8

作者 丁玉林 吉林台 +3 位作者 董俊斌 么宏强 王金玲 王凤龙 《现代农业》 2018年第5期99-100,共2页

本科生导师制是一项创新的学生教育管理制度,采用思想教育方式与专业教育方式相结合,以个性化教育为基本手段,以专业教育为重点。动物医学专业教育归根结底是实践性教育,本科生导师制能够促进动物医学专业的发展和人才培养。本文就动物... 本科生导师制是一项创新的学生教育管理制度,采用思想教育方式与专业教育方式相结合,以个性化教育为基本手段,以专业教育为重点。动物医学专业教育归根结底是实践性教育,本科生导师制能够促进动物医学专业的发展和人才培养。本文就动物病理学教研室实施本科生导师制以来,对其实施的重要性、成效做一下总结,并对未来教学实施本科生导师制提出一点建议和期望。 展开更多

关键词 本科生 导师制 动物医学 动物病理学

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《兽医公共卫生学》课程英汉双语教学探讨

9

作者 周伟光 《畜牧与饲料科学》 2017年第11期78-80,共3页

为进一步推进英汉双语教学的改革和提高教学质量,探讨了内蒙古农业大学动植物检疫专业《兽医公共卫生学》课程英汉双语教学模式。对英汉双语教师培养、教学内容的选择、教材选用、教学方法等方面进行了分析,并提出了具体措施和可行性方法。

关键词 兽医公共卫生学 双语教学 教学效果

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捻转血矛线虫对伊维菌素的耐药机制 被引量：1

10

作者 张艳敏 赵东旭 王文龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1511-1520,共10页

捻转血矛线虫病作为反刍动物最常见的消化道线虫疾病,已经给养殖业带来了重大经济损失,该寄生虫对伊维菌素早已经产生严重的耐药性,为该病的防治带来了一定的阻碍。在捻转血矛线虫对伊维菌素产生耐药性的研究进展中,已报道了3种可能耐... 捻转血矛线虫病作为反刍动物最常见的消化道线虫疾病,已经给养殖业带来了重大经济损失,该寄生虫对伊维菌素早已经产生严重的耐药性,为该病的防治带来了一定的阻碍。在捻转血矛线虫对伊维菌素产生耐药性的研究进展中,已报道了3种可能耐药机制,分别为靶向GABA门控Cl~-通道、降低谷氨酸门控Cl^(-)开放频率和结合外排转运蛋白。调控型非编码RNA(miRNA和lncRNA)在不同病原耐药性研究中相继报道,发现miRNA和lncRNA与P糖转运蛋白、细胞色素P450和GABA门控Cl^(-)通道等耐药机制相关。但是该非编码RNA在捻转血矛线虫对伊维菌素耐药性的研究中鲜有报道,所以要突破耐药性的问题,要将非编码RNA与已报道的可能耐药机制相关联,进行深入研究,找出关键的耐药靶点。本文主要总结了该病对伊维菌素耐药性机制的相关研究进展,为耐药性后续深入研究提供新的思路。 展开更多

关键词 捻转血矛线虫 伊维菌素 耐药性 非编码RNA

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酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)基因表达的影响 被引量：12

11

作者 金鑫 张曼 +2 位作者 范燕茹 王佩 杨银凤 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第19期3910-3918,共9页

【目的】探索益生性酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)表达的调节作用,为在分子水平上揭示益生菌对防御素的调控机理提供一定的理论基础及依据。【方法】首先将新鲜的绵羊瘤胃组织用PBS和抗生素处... 【目的】探索益生性酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)表达的调节作用,为在分子水平上揭示益生菌对防御素的调控机理提供一定的理论基础及依据。【方法】首先将新鲜的绵羊瘤胃组织用PBS和抗生素处理后进行瘤胃上皮细胞原代培养,当原代细胞数量长到细胞培养瓶的85%以上时,将细胞传于12孔板用于细胞刺激试验。同时将活化并纯化后的酿酒酵母菌25℃、180 r/min有氧培养48 h后,进行5次平行平板计数试验,根据平板计数的数据处理方法,得到浓度为5.2×108CFU·m L-1的酿酒酵母菌液,再通过倍比稀释把所得菌液依次稀释成浓度为5.2×107、5.2×106、5.2×105、5.2×104CFU·m L-1的菌液,用以上不同浓度(5.2×104—5.2×108CFU·m L-1)的酿酒酵母菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞分别进行不同时间(2、4、8、12、24 h)的刺激,并设置对照组用DMEM/F12培养基代替酿酒酵母菌。然后提取总RNA,逆转录为c DNA后,利用实时荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测瘤胃上皮细胞中SBD-1表达差异。最后用SAS 9.2软件对数据进行相关差异性分析。【结果】荧光定量PCR结果表明,在各时间组内SBD-1 m RNA的表达量随着菌液浓度的增加均呈先升高后降低的趋势,当菌液浓度为5.2×107CFU·m L-1时表达量达到最大,并与对照组和其他浓度组相比差异极显著(P<0.01)。当菌液浓度一定时,SBD-1 m RNA的表达量先是随着刺激时间的延长而呈上升趋势,刺激时间为12 h时SBD-1 m RNA表达量达到峰值,之后呈下降趋势。因此,当浓度为5.2×107CFU·m L-1的菌液刺激瘤胃上皮细胞12 h后,SBD-1基因的表达量达到最高,且与此浓度下其他时间组的表达量相比差异极显著(P<0.01)。ELISA检测结果显示,SBD-1蛋白表达趋势与SBD-1 m RNA检测结果基本一致。不同浓度的菌液分别刺激绵羊瘤胃上皮细胞2、4、8、12、24 h后均能提高共培养上清中SBD-1蛋白的表达,且与对照组相比存在极显著差异(P<0.01)。在菌液浓度为5.2×107CFU·m L-1刺激瘤胃上皮细胞12 h后SBD-1蛋白分泌水平达到最高,与此浓度下各时间组相比差异极显著(P<0.01)。【结论】酿酒酵母菌能够提高绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1的表达,且菌液浓度为5.2×107CFU·m L-1刺激瘤胃上皮细胞12 h后,SBD-1的表达量达到最高。 展开更多

关键词 β-防御素-1 瘤胃上皮细胞 酿酒酵母菌 实时荧光定量PCR 酶联免疫吸附测定 绵羊

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绵羊肺炎支原体P71蛋白分段表达及其间接ELISA方法的建立 被引量：9

12

作者 黄海碧 郑佳琪 +5 位作者 王仁超 王晓晖 陈德浩 王灵芮 郭逸贤 郝永清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期623-627,共5页

为研究绵羊肺炎支原体(MO)P71蛋白免疫学相关功能及建立MO的快速检测方法,本研究采用PCR扩增MO P71基因片段,测序后利用生物学软件分析P71蛋白的抗原表位,选取抗原表位富集的3个基因片段P71-1(1 bp^516 bp)、P71-2(505 bp^1 338 bp)和P7... 为研究绵羊肺炎支原体(MO)P71蛋白免疫学相关功能及建立MO的快速检测方法,本研究采用PCR扩增MO P71基因片段,测序后利用生物学软件分析P71蛋白的抗原表位,选取抗原表位富集的3个基因片段P71-1(1 bp^516 bp)、P71-2(505 bp^1 338 bp)和P71-3(1 327 bp^1 905 bp)分别克隆至原核表达载体p ET-32a中进行表达。分别利用western blot和间接ELISA方法对表达产物的免疫原性、反应原性进行鉴定,以筛选的优势抗原蛋白为诊断抗原,通过对反应条件的优化,建立检测MO抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组蛋白P71-3产生的抗体效价最高,与MO阳性血清的结合能力最强,阴阳性临界值为:OD450nm值=0.292。该方法与口蹄疫、小反刍兽疫、副结核、羊布鲁菌病、结核阳性血清均无交叉反应,具有极强的特异性。组内组间变异系数均小于10%,重复性较好。利用该方法与间接血凝试验对150份临床血清样品进行检测,结果显示,两者符合率为96.67%。本研究为进一步研制MO ELISA检测试剂盒奠定了基础。 展开更多

关键词 绵羊肺炎支原体 黏附基因 表达 抗原性分析 ELISA

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牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检测方法的建立 被引量：8

13

作者 李新培 朱洪伟 +3 位作者 周伟光 关平原 程世鹏 温永俊 《动物医学进展》 北大核心 2018年第10期6-12,共7页

旨在建立一种特异性检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的RT-PCR方法,并且可以实现在同一体系中对BVDV进行分型。根据GenBank中公布的BVDV基因组序列,针对高度保守的5′UTR区域分别设计鉴定及分型引物,建立牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检... 旨在建立一种特异性检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的RT-PCR方法,并且可以实现在同一体系中对BVDV进行分型。根据GenBank中公布的BVDV基因组序列,针对高度保守的5′UTR区域分别设计鉴定及分型引物,建立牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检测方法。应用鉴定RT-PCR检测方法可从BVDV阳性毒株中扩增出288bp的特异性片段;而分型RT-PCR检测方法可在同一体系中从BVDV1型和2型毒株中扩增出大小分别为316bp和110bp的特异性片段,但对猪瘟病毒、牛副流感3型病毒及牛传染性鼻气管炎病毒等均为阴性,最低可检测出的病毒量分别为1TCID50/mL和10TCID50/mL。临床试验证明,建立的鉴定及分型RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,具有很高的实用价值,为进一步开展流行病学调查、病毒分离等提供可靠的技术手段。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 鉴定 分型 反转录-聚合酶链反应

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采用特异性探针药物法测定双峰驼CYP3A酶活性 被引量：6

14

作者 裴乐 张文彬 哈斯苏荣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第16期3266-3274,共9页

【目的】探究双峰驼CYP3A酶体外活性及其对外源性药物代谢的影响。【方法】将双峰驼禁食过夜12 h,颈静脉放血处死后,立即于肝门静脉处采集块状肝脏组织,洗去血污称重匀浆后,采用Ca2+沉淀法制备双峰驼肝微粒体,并通过BCA法测定其蛋白含... 【目的】探究双峰驼CYP3A酶体外活性及其对外源性药物代谢的影响。【方法】将双峰驼禁食过夜12 h,颈静脉放血处死后,立即于肝门静脉处采集块状肝脏组织,洗去血污称重匀浆后,采用Ca2+沉淀法制备双峰驼肝微粒体,并通过BCA法测定其蛋白含量。同时优化双峰驼肝微粒孵育体系,取不同浓度的双峰驼肝微粒体蛋白悬液(0.016、0.031、0.063、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mg·m L-1)、不同浓度的探针药物咪达唑仑(MDZ)(7.813、15.625、31.250、62.500、125、250、500、1 000μg·m L-1)分别加入到孵育体系中,37℃预孵育5 min后,加入NADPH溶液后再孵育不同时间(0、2、5、10、15、20、25、30 min)。待反应完全后加入冰冷的甲醇和地西泮(DZP)溶液,涡旋混匀,800μL全部混合液体经14 500 r/min离心20 min后,取20μL上清液进行高效液相色谱紫外检测(HPLC-UV),确定最适底物浓度、最适酶浓度以及最适孵育时间。分别取浓度为7.813、15.625、31.250、62.500、125、250、500、1 000μg·m L-1 MDZ探针药物溶液20μL与双峰驼肝微粒体共同孵育15 min后,以混有内标DZP的冰冷甲醇终止反应,采用高效液相色谱紫外检测法测定反应产物1'-羟基咪达唑仑(1'-OHMDZ)的动态含量,计算出部分药物动力学参数。色谱条件:Sigma-Aldrich/Supelco Discovery C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为V(乙腈)﹕V(0.01 mol·L-1 PBS缓冲液)=40﹕60;等浓度洗脱20 min;检测波长为254 nm;流速为0.8 m L·min-1;柱温为30℃;进样量为20μL。【结果】使用Ca2+沉淀法制备的双峰驼肝微粒体保持了酶的良好活性,能满足后续体外药物代谢试验的基本要求,经BCA法测定其蛋白含量为(1.936±0.052)mg·m L-1。双峰驼肝微粒体蛋白悬液、探针药物MDZ、PBS缓冲液、Mg Cl2溶液以及NADPH溶液构成双峰驼肝微粒体孵育体系,随着孵育时间的延长,酶和底物进一步反应,当MDZ浓度为125μg·m L-1(终浓度为7.073 nmol·m L-1),肝微粒体浓度为2.000 mg·m L-1(终浓度为0.050 mg·m L-1)时,孵育15 min,酶和底物的结合最紧密,并呈现出饱和的状态,故确定其终浓度和时间为最适浓度和最佳孵育时间。经HPLC-UV法测定,1'-OHMDZ、MDZ和DZP的出峰保留时间分别为6.710、11.383和15.263 min,各成分色谱峰分离良好,且不受肝微粒体孵育体系中其他干扰峰的影响。HPLC检测方法的精密度、稳定性及回收率的试验结果均符合色谱测定的基本要求,即成功建立了准确、灵敏、可靠、重现性好的双峰驼CYP3A酶特异性探针药物的检测方法。以底物MDZ浓度和反应产物1'-OHMDZ生成速率进行Lineweaver-Burk双倒数作图,分别计算出最大反应速度Vmax和米氏常数Km。经Origin Pro8.6软件进行线性回归分析得到最大反应速度Vmax为(0.380±0.028)nmol·mg-1·min-1,米氏常数Km为(9.603±3.229)nmol·m L-1,以此体现酶和底物的反应情况,并对双峰驼CYP3A酶的活性进行了间接测定。【结论】成功建立了跟踪检测CYP3A酶的特异性探针药物MDZ及其代谢产物浓度的高效液相色谱紫外检测方法。MDZ在体内经CYP3A酶的特异性氧化代谢后主要生成1'-OHMDZ,本文以MDZ的代谢产物1'-OHMDZ的生成速率为检测指标,首次对双峰驼CYP3A酶的体外活性及酶与底物的相互作用特点进行了研究。 展开更多

关键词 双峰驼 CYP3A酶 高效液相色谱法 探针药物

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马动脉炎病毒Eva Green荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：3

15

作者 胡月 戚亭 +2 位作者 胡哲 关平原 王晓钧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期943-947,共5页

为建立马动脉炎病毒(EAV)的快速检测方法,本研究设计了一对针对EAV Bucyrus株ORF7基因序列的特异性引物,建立了检测EAV的Eva Green荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)方法。结果表明,该方法在102拷贝/μL^107拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;... 为建立马动脉炎病毒(EAV)的快速检测方法,本研究设计了一对针对EAV Bucyrus株ORF7基因序列的特异性引物,建立了检测EAV的Eva Green荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)方法。结果表明,该方法在102拷贝/μL^107拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;最低检出量为101.5TCID50/m L病毒,敏感性为常规RT-PCR的100倍,与其他马常见病毒无交叉反应;组内及组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有较好的重复性。此外,采用该方法测定了EAV Bucyrus株及其拯救病毒ic EAV感染RK-13细胞后的复制动态,并与TCID50方法进行了比较。结果显示ic EAV与其亲本病毒接种RK-13细胞后,0 h测定病毒TCID50及拷贝数分别为103.33TCID50/m L(104.65拷贝/2μL)和103.50TCID50/m L(104.70拷贝/2μL);60 h时,细胞病变达到100%,ic EAV及其亲本病毒的TCID50及拷贝数分别为105.67TCID50/m L(107.0拷贝/2μL)和105.57TCID50/m L(106.98拷贝/2μL),两株病毒在RK-13细胞内的复制效率相似。本研究建立的Eva Green q RT-PCR方法可以为细胞培养物中EAV的检测提供有效的技术手段。 展开更多

关键词 马动脉炎病毒 QRT-PCR EVA Green 病毒含量

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双峰驼CYP2D6酶体外孵育体系的建立与优化 被引量：4

16

作者 王艳 高飞 哈斯苏荣 《动物医学进展》 北大核心 2016年第4期58-62,共5页

为了研究双峰驼CYP2D6酶体外活性,建立双峰驼肝微粒体孵育体系并对孵育体系中探针底物浓度、肝微粒体蛋白浓度和孵育时间等进行优化研究。首先采用改良差速离心法制备双峰驼肝微粒体、BCA法测定双峰驼肝微粒体蛋白浓度、CO还原差示光谱... 为了研究双峰驼CYP2D6酶体外活性,建立双峰驼肝微粒体孵育体系并对孵育体系中探针底物浓度、肝微粒体蛋白浓度和孵育时间等进行优化研究。首先采用改良差速离心法制备双峰驼肝微粒体、BCA法测定双峰驼肝微粒体蛋白浓度、CO还原差示光谱法检测CYP总酶含量,然后采用HPLC法跟踪检测孵育体系中CYP2D6酶特异性底物的主要代谢产物去甲右美沙芬含量进而优化孵育条件。结果表明,双峰驼肝微粒体蛋白浓度为5.565 0mg/mL±0.519 7mg/mL,CYP总酶含量为0.177 7nmol/mg±0.050 3nmol/mg;肝微粒体孵育体系的最适底物浓度为250μg/mL,肝微粒体蛋白浓度为5.565 0mg/mL,最适孵育时间为40min。所制备的双峰驼肝微粒体各项指标和优化后的肝微粒体孵育条件均能满足后续对双峰驼CYP2D6酶体外活性研究的基本要求。 展开更多

关键词 双峰驼 CYP2D6酶 肝微粒体孵育体系 氢溴酸右美沙芬

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黑龙江省一株马流感病毒的全基因组测序及同源性分析 被引量：2

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作者 赵钊 郭巍 +3 位作者 关平原 王晓钧 吕洋 安茹 《中国动物检疫》 CAS 2015年第12期69-72,共4页

通过采集一匹患病马的病料及后续的病毒分离、病毒核酸提取、RT-PCR、连接T载体等一系列分子生物学技术,对病毒核酸进行测序,经NCBI比对分析,获得一株H3N8亚型马流感病毒。将获得的毒株与我国分离的A/equine/Jilin/1/1989禽源性毒株、2... 通过采集一匹患病马的病料及后续的病毒分离、病毒核酸提取、RT-PCR、连接T载体等一系列分子生物学技术,对病毒核酸进行测序,经NCBI比对分析,获得一株H3N8亚型马流感病毒。将获得的毒株与我国分离的A/equine/Jilin/1/1989禽源性毒株、2002年美国肯塔基分离株A/equine/Kentucky/1/02(美洲谱系Florida亚型)、A/equine/Argentine/77(美洲谱系Argentine亚型)等有代表性毒株进行同源性分析,发现该毒株与Florida-2型马流感病毒基因片段的同源率最高。根据马流感病毒的命名规则,将这毒株命名为A/equine/Heilongjiang/1/2010。本次所分离到的黑龙江株马流感病毒,丰富了我国马流感病毒资源库,为我国马流感流行病学研究、诊断技术及疫苗研究提供了重要基础。 展开更多

关键词 马流感病毒 基因组 同源性 分子生物学技术

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伊维菌素和三氯苯达唑在羊体内的药动学相互作用 被引量：2

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作者 高妍妍 巴雅尔 哈斯苏荣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1438-1444,共7页

【目的】研究联合应用伊维菌素和三氯苯达唑在蠕虫感染绵羊体内的药代动力学特征及相互影响,【方法】借助经典麦克麦斯特法定量检查羊群消化道蠕虫感染基础上选取每克粪便虫卵数大于1500个,且感染强度相近的泌乳期鄂尔多斯细毛羊15只,... 【目的】研究联合应用伊维菌素和三氯苯达唑在蠕虫感染绵羊体内的药代动力学特征及相互影响,【方法】借助经典麦克麦斯特法定量检查羊群消化道蠕虫感染基础上选取每克粪便虫卵数大于1500个,且感染强度相近的泌乳期鄂尔多斯细毛羊15只,平均体重为(39.3±3.2)kg,年龄为4周岁。将15只受试羊禁食8 h后随机分成3组,按照预定试验设计给予不同药物:第1组皮下注射伊维菌素(0.2 mg·kg^(-1)),第2组灌服三氯苯达唑混悬液(12 mg·kg^(-1)),第3组皮下注射伊维菌素(0.2 mg·kg^(-1))的同时灌服三氯苯达唑混悬液(12 mg·kg^(-1))。分别于给药后第0.75、2、4、8、16、24、36、48、72、120、192和336 h,由颈静脉采集5 mL血样,离心分离血浆,冷冻保存待测。建立检测血浆伊维菌素(IVM)、三氯苯达唑(TCBZ)及其主要活性代谢产物三氯苯达唑亚砜(TCBZSO)浓度的高效液相色谱(HPLC)荧光检测法和紫外检测法,并对每个样品进行甲醇沉淀蛋白,经ODS C18固相萃取柱进行纯化处理后,分别测定各组血浆样品中的IVM、TCBZ及其主要代谢产物TCBZSO的浓度。色谱条件:反相C18柱,Inertsi10DS—SP(5μm,4.6×150mm,I.D.);流动相为V(甲醇+乙腈):V(水)=95:5;激发波长364 nm,发射波长470 nm;流速为1.0 mL.min^(-1);柱温为室温;进样量为20μL。最后将测定血药浓度数据用Phoenix WinNonlin药动学软件按非房室模型方法处理,计算出各试验组每只羊的相关药动学参数,并进行统计学分析。【结果】血浆样品色谱图中IWM和内标物AVM色谱峰分离良好,保留时间分别为8.73 min和6.16 min,且不受血浆其他干扰峰的影响;TCBZ和TCBZSO以及内标物甲苯咪唑的保留时间分别为10.04、5.53和3.42 min,且在试验分析条件下具有良好的分离度,血浆内源性物质对目标峰没有干扰。对HPLC检测方法的绝对回收率、精密度和准确度等的考证结果均达到色谱测定要求。因此,本试验所建立的方法切实可行,能满足测定血浆样品各目标物的检测要求。联合应用IVM和TCBZ后,IVM的血浆峰浓度(C_(max))和药时曲线下面积(AUC)极显著下降,表观分布容积(V_d)、消除半衰期(T_(1/2ke))和体清除率(CL_b)反而极显著增加;联合用药后TCBZSO的V_d、MRT和T_(max)显著高于单独用药组,T_(1/2ke)则极显著高于单独用药组。【结论】为蠕虫感染绵羊联合应用伊维菌素和三氯苯达唑后,在药代动力学方面相互产生了负面影响,未达到联合用药的真正目的。由此可见,在临床实践中联合用药时应考虑它们的药动学相互作用问题,应避免只根据体外药效学协同作用进行盲目配伍和联合用药,从而保证充分发挥各药物的原有药效和协同作用的目的。 展开更多

关键词 伊维菌素 三氯苯达唑 联合用药 药动学相互作用

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捻转血矛线虫伊维菌素敏感虫株与耐药虫株差异miRNA的转录组学分析 被引量：7

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作者 温海峰 张艳敏 +10 位作者 张海龙 石雅琴 毛晓伟 寇慧琳 于宇 李峥 陈昕迪 王腾宇 高娃 王文龙 刘春霞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期245-252,共8页

为探究捻转血矛线虫的伊维菌素(IVM)敏感虫株与耐药虫株显著差异的microRNA(miRNA)转录谱,发掘其耐药相关的miRNA,本实验采用Illumina Hiseq2000平台分别对捻转血矛线虫IVM敏感虫株与耐药虫株测序,构建cDNA文库,通过质控后采用生物信息... 为探究捻转血矛线虫的伊维菌素(IVM)敏感虫株与耐药虫株显著差异的microRNA(miRNA)转录谱,发掘其耐药相关的miRNA,本实验采用Illumina Hiseq2000平台分别对捻转血矛线虫IVM敏感虫株与耐药虫株测序,构建cDNA文库,通过质控后采用生物信息学软件筛选捻转血矛线虫IVM敏感与耐药虫株的差异mi RNA。结果显示,捻转血矛线虫的IVM敏感与耐药虫株筛选出转录显著差异的miRNA共375个,其中253个转录上调,122个转录下调。利用RNAhybrid(V6.01)、Miranda(V3.3a)、TargetScan(V7.0)软件对筛选到的mi RNA靶基因进行预测,并取交集作为mi RNA靶基因预测结果,将筛选出显著差异的靶基因通过perl脚本与显著差异的miRNA进行关联分析,结果显示共关联到2106对miRNA-mRNA为负调控关系,其中涉及到477个差异的m RNA和603个差异的miRNA。对显著差异的miRNA靶基因进行GO富集分析,结果显示其中有492个GO terms,包括生物过程(BP)322个、细胞组分(CC)47个、分子功能(MF)123个。按照q值由小到大的顺序排列,被显著富集的有肌细胞发育分化及内肽酶活性等功能;按照富集基因数目由多到少排列,被显著富集的为有机物代谢、细胞代谢等功能。对显著差异的miRNA靶基因进行KEGG信号通路富集分析,按照q值由小到大的顺序排列,被显著富集到的有抗原处理与递呈等信号通路,其中显著差异靶基因也被富集到药物代谢-其他酶等与药物代谢相关的信号通路,以及一些在捻转血矛线虫耐IVM中起重要作用的通路,如:药物代谢细胞色素P450、细胞色素P450对外源药物代谢通路、ABC转运蛋白等。随机从差异miRNA中选10个进行RT-q PCR的验证,结果显示,相对转录水平结果与测序结果一致。本研究上述结果首次证实,捻转血矛线虫对IVM耐药性的产生与其代谢过程、肌细胞的分化发育过程及免疫过程中的某个或多个环节有一定的联系,本研究为进一步探究捻转血矛线虫耐药机制提供了科学依据。 展开更多

关键词 捻转血矛线虫 伊维菌素 耐药性 转录组 mi RNA

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捕食性真菌Duddingtoniaflagrans捕食马圆线虫幼虫动态观察 被引量：2

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作者 李军燕 罗宏亮 +6 位作者 王瑞 杨莲茹 赵治国 张伟 李斌 杨晓野 罗晓平 《动物医学进展》 北大核心 2018年第10期122-125,共4页

为探讨捕食性真菌Duddingtonia flagrans在捕食线虫的过程中产生的细微变化,如捕食器的形成过程,捕获虫体前后的变化等,利用线虫三期幼虫作为诱导物,在玻片培养基中刺激捕食性真菌产生捕食器,然后对其捕食线虫过程进行了适时动态的观察... 为探讨捕食性真菌Duddingtonia flagrans在捕食线虫的过程中产生的细微变化,如捕食器的形成过程,捕获虫体前后的变化等,利用线虫三期幼虫作为诱导物,在玻片培养基中刺激捕食性真菌产生捕食器,然后对其捕食线虫过程进行了适时动态的观察。结果显示,接种有较强活力的线虫三期幼虫2h后捕食器,即菌环开始形成,而后联合形成菌网;4h后虫体被捕食器捕获,24h后线虫即被完全致死;5d后,虫体发生皱缩直至完全消解。D.flagrans还可以自发产生捕食器(菌环),显示了其较强的捕食线虫的效率和能力。本研究为阐明捕食性真菌捕食机制提供了重要的参考依据。 展开更多

关键词 捕食线虫真菌 Duddingtoniaflagrans 马圆线虫3期幼虫 生物防治 捕食器

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