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人重组蛋白酶3的cDNA克隆化及其在真核细胞的表达
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作者 于净 章友康 +2 位作者 赵明辉 狄春辉 马大龙 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期37-40,共4页
目的 应用真核表达系统表达人重组蛋日酶３（ＰＲ３），并用于检测患者血清中的抗蛋日酶３抗体（ａｎｔｉ－ＰＲ３）。方法 利用聚合酶链反应（ＰＣＲ ）技术获得蛋白酶３的ｃＤＮＡ．并克隆至真核表达载体ｐｃＤＩ。将其瞬时转染至Ｃ... 目的 应用真核表达系统表达人重组蛋日酶３（ＰＲ３），并用于检测患者血清中的抗蛋日酶３抗体（ａｎｔｉ－ＰＲ３）。方法 利用聚合酶链反应（ＰＣＲ ）技术获得蛋白酶３的ｃＤＮＡ．并克隆至真核表达载体ｐｃＤＩ。将其瞬时转染至ＣＯＳ－７细胞，应用夹心ＥＬＩＳＡ法检测细胞上清中重组蛋白酶３（ｒＰＲ３）的表达，并以表达上清作为抗原检测患者血清中的ａｎｔｉ－ＰＲ３。同时转染ＣＨ０细胞，建立ＣＨ０／ＰＲ３稳定表达株。 结果 转染后的ＣＯＳ－７细胞和ＣＨＯ细胞均可以表达ｒＰＲ３，且ＣＯＳ－７细胞表达的ｒＰＲ３可以被多数ａｎｔｉ－ＰＲ３阳性患者血清识别。结论 用真核细胞表达的ｒＰＲ３具有抗原活性，为重组ＰＲ３替代天然ＰＲ３用于临床检测和实验研究提供了新的途径。 展开更多
关键词 抗中性白细胞胞质抗体 蛋白酶类 真核表达系统 人重组蛋白酶3 cDNA克隆化 原发性小血管炎
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