胚胎角膜干细胞移植治疗翼状胬肉的远期临床观察 被引量：20

1

作者 齐虹 刘卫华 +1 位作者 杜仪琴 张纯 《眼外伤职业眼病杂志》 北大核心 2005年第3期180-182,共3页

目的　探讨体外培养的异体人胚胎角膜干细胞移植治疗原发性翼状胬肉的远期临床疗效。方法　原发性进行期翼状胬肉 3 2例 (3 2眼 ) ,随机分为两组 ,每组 16例 (16眼 )。实验组行翼状胬肉切除 +以羊膜为载体的体外培养的异体人胚胎角膜干... 目的　探讨体外培养的异体人胚胎角膜干细胞移植治疗原发性翼状胬肉的远期临床疗效。方法　原发性进行期翼状胬肉 3 2例 (3 2眼 ) ,随机分为两组 ,每组 16例 (16眼 )。实验组行翼状胬肉切除 +以羊膜为载体的体外培养的异体人胚胎角膜干细胞移植术 ;对照组行翼状胬肉切除巩膜暴露术。术后随访 3年。手术由同一人操作。结果　实验组较对照组角膜上皮愈合快。实验组 1眼术后 3月内翼状胬肉复发 (复发率 6.2 5 %)。对照组 7眼术后不等时间翼状胬肉复发 (复发率43 .75 %)。实验组复发率低于对照组 (Fisher精确概率检验法检验结果P =0 .0 186<0 .0 5 )。实验组所有病例均未见其它并发症的发生。结论　应用以保存羊膜为载体的体外培养的异体人胚胎角膜干细胞移植治疗原发性翼状胬肉安全、有效。 展开更多

关键词 翼状胬肉 胚胎 角膜 干细胞 羊膜

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端粒酶永生化的人单克隆神经前体细胞系诱导表达多巴胺D_2受体 被引量：4

2

作者 扈启宽 林昌盛 +4 位作者 白云 白洁 何其华 沈丽 李凌松 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期271-273,共3页

目的 :检测人神经前体细胞系HNG12 10 E能否诱导表达多巴胺D2 受体mRNA和受体蛋白 ,表达的受体是否有生理功能。方法 :细胞因子诱导分化 ,RT PCR和免疫荧光染色检测D2 的表达 ;Fluo 3测定多巴胺刺激产生的胞浆Ca2 + 。结果 :RT PCR显示... 目的 :检测人神经前体细胞系HNG12 10 E能否诱导表达多巴胺D2 受体mRNA和受体蛋白 ,表达的受体是否有生理功能。方法 :细胞因子诱导分化 ,RT PCR和免疫荧光染色检测D2 的表达 ;Fluo 3测定多巴胺刺激产生的胞浆Ca2 + 。结果 :RT PCR显示D2 mRNA诱导后阳性 ,免疫荧光结果显示诱导后D2 受体蛋白在细胞膜表面阳性 ,Fluo3法测定胞浆Ca2 + ,结果显示诱导后的细胞对 5mmol·L-1多巴胺递质反应使胞浆Ca2 + 快速上升。结论 :从mRNA、蛋白和生理功能 3个层次均证明HNG12 10 E细胞系诱导后表达D2 。 展开更多

关键词 神经前体细胞 端粒酶永生化 多巴胺D2受体 细胞分化

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筛选后的巢蛋白阳性细胞流式鉴定及诱导分化 被引量：3

3

作者 王宏 胡江 +2 位作者 李凌松 洪天配 李丽英 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期683-687,i0010,共6页

目的观察胎儿胰腺来源的巢蛋白阳性细胞(符合医学伦理学)是否具有与间充质干细胞类似的表面标志以及多向分化的潜能。方法从胎儿胰腺中分离的巢蛋白阳性细胞筛选后进行扩增,用流式细胞仪分析表面标志,并探讨这类细胞的成脂和成骨的分化... 目的观察胎儿胰腺来源的巢蛋白阳性细胞(符合医学伦理学)是否具有与间充质干细胞类似的表面标志以及多向分化的潜能。方法从胎儿胰腺中分离的巢蛋白阳性细胞筛选后进行扩增,用流式细胞仪分析表面标志,并探讨这类细胞的成脂和成骨的分化潜能。结果筛选纯化后的巢蛋白阳性细胞的表面标志与骨髓间充质干细胞表面标志相似;此类细胞可在体外诱导为脂肪细胞或骨细胞。结论筛选纯化的胎儿胰腺来源的巢蛋白阳性细胞具有一定间充质干细胞的特性。 展开更多

关键词 巢蛋白 细胞筛选 间充质干细胞

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慢病毒介导的调节因子XⅠ过表达及其对胶质瘤细胞增殖的抑制作用 被引量：2

4

作者 程凯 孙浩杰 +1 位作者 张明智 沈丽 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1117-1123,共7页

目的:构建调节因子X1(regulatory factor X1,RFX1)过表达慢病毒载体,并观察其对F98细胞增殖的影响。方法:运用PCR技术扩增RFX1,并将其插入慢病毒空载体质粒p ITA,构建p ITA-RFX1慢病毒质粒,经琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定正确。将包装慢病... 目的:构建调节因子X1(regulatory factor X1,RFX1)过表达慢病毒载体,并观察其对F98细胞增殖的影响。方法:运用PCR技术扩增RFX1,并将其插入慢病毒空载体质粒p ITA,构建p ITA-RFX1慢病毒质粒,经琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定正确。将包装慢病毒共转染293T细胞,然后感染F98细胞。利用Western印迹和激光共聚焦验证RFX1过表达情况,用流式细胞仪和CCK-8试剂盒观察转染前后细胞增殖情况。结果:电泳和测序显示慢病毒载体p ITA-RFX1构建成功,将其感染F98细胞后过表达RFX1蛋白,同时可以明显抑制细胞的增殖。结论:过表达慢病毒载体构建成功,上调RFX1可以降低恶性胶质瘤细胞的增殖。 展开更多

关键词 调节因子X1 慢病毒 过表达 恶性胶质瘤

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胎儿胰腺巢蛋白阳性细胞具有间充质表型特征

5

作者 王宏 胡江 +3 位作者 吴永华 李凌松 李丽英 洪天配 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期168-170,共3页

目的研究巢蛋白阳性细胞在胎儿胰腺中的分布以及其表面标志。方法采用免疫荧光染色法对巢蛋白阳性细胞在胎儿胰腺组织中的分布进行定位。分离和培养胎儿胰腺细胞,利用免疫荧光染色和流式细胞分析进行鉴定,并与骨髓间充质干细胞的表面标... 目的研究巢蛋白阳性细胞在胎儿胰腺中的分布以及其表面标志。方法采用免疫荧光染色法对巢蛋白阳性细胞在胎儿胰腺组织中的分布进行定位。分离和培养胎儿胰腺细胞,利用免疫荧光染色和流式细胞分析进行鉴定,并与骨髓间充质干细胞的表面标志比较。结果巢蛋白阳性细胞在胎儿胰腺间质中广泛分布;胎儿胰腺来源的巢蛋白阳性细胞的表面标志与骨髓间充质干细胞基本一致。结论从胎儿胰腺中分离的巢蛋白阳性细胞具有骨髓间充质干细胞表型特征。 展开更多

关键词 胎儿 间充质干细胞 巢蛋白 胰腺

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低剂量力达霉素诱导P19细胞分化可能与Oct4下调相关

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作者 周娟 李映 +3 位作者 王畅 谭业辉 甄红英 姚程 《中国实验诊断学》 2013年第2期222-225,F0003,共5页

目的确定低剂量力达霉素可诱导小鼠胚胎癌P19细胞分化,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养P19细胞,分别加入力达霉素和维甲酸(retinoiacid,RA),观察细胞形态,并分别行PCR和免疫荧光染色检测巢蛋白(Nestin)和微管相关蛋白2(MAP2)的表... 目的确定低剂量力达霉素可诱导小鼠胚胎癌P19细胞分化,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养P19细胞,分别加入力达霉素和维甲酸(retinoiacid,RA),观察细胞形态,并分别行PCR和免疫荧光染色检测巢蛋白(Nestin)和微管相关蛋白2(MAP2)的表达。Western blot检测低剂量力达霉素和维甲酸处理该细胞后Oct4的表达。分别用慢病毒Oct4和si-Oct4感染P19细胞,使其过表达和下调Oct4,观察细胞形态,并行PCR和免疫荧光染色观察Nestin和MAP2的变化。结果 P19细胞经低剂量力达霉素和维甲酸处理后,形态上出现神经细胞样突起,且PCR和免疫荧光染色均示Nestin和MAP2的表达增强。应用低剂量力达霉素和维甲酸处理P19细胞后,Oct4的表达下降。过表达Oct4的P19细胞经低剂量力达霉素处理后未出现神经细胞样突起,且Nestin和MAP2的表达未增强,下调Oct4的P19细胞未经低剂量力达霉素处理,出现与其相反的结果。结论低剂量力达霉素可以诱导P19细胞分化,并且该分化可能与转录因子Oct4下调相关。 展开更多

关键词 低剂量力达霉素 分化 P19 OCT4

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一种新的肿瘤标志物LyGDI在卵巢癌中的表达 被引量：4

7

作者 甄红英 王淑玲 +1 位作者 吴后男 张小为 《中国生育健康杂志》 2009年第1期6-8,11,共4页

目的确定LyGDI是一种新的卵巢恶性肿瘤标志物。方法将受试人群分为卵巢癌、良性卵巢疾病和正常人群组,ELISA技术检测各组人群血清中LyGDI的蛋白表达水平,并通过组织免疫化学技术验证lyGDI的表达。结果血清中lyGDI水平的平均值和中位数... 目的确定LyGDI是一种新的卵巢恶性肿瘤标志物。方法将受试人群分为卵巢癌、良性卵巢疾病和正常人群组,ELISA技术检测各组人群血清中LyGDI的蛋白表达水平,并通过组织免疫化学技术验证lyGDI的表达。结果血清中lyGDI水平的平均值和中位数在卵巢癌患者为3.10mg/L和2.31mg/L,明显高于良性卵巢疾病人群1.10mg/L和0.97mg/L(P<0.05)及正常人1.17mg/L和0.55mg/L(P<0.001),良性卵巢疾病和正常人群组比较,差异无统计学意义;组织化学染色,lyGDI在卵巢癌组织中高表达,在良性卵巢组织中不表达。结论lyGDI在卵巢癌中可作为一种新的肿瘤标志物。 展开更多

关键词 肿瘤标志物 卵巢癌 LYGDI

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利用RNA干扰技术抑制单胺氧化酶B基因的表达 被引量：2

8

作者 扈启宽 李美育 徐方 《宁夏医科大学学报》 2009年第2期154-157,共4页

目的确定并筛选用于特异静默单胺氧化酶B(Monoamine Oxidase B,MAOB)基因的干扰小RNA(siRNA)片段,建立RNA干扰技术平台。方法构建含单胺氧化酶B基因siRNA片段的pSilencer 1.0-U6 siRNA表达质粒,转染Hela细胞,用RT-PCR和定量PCR方法检测... 目的确定并筛选用于特异静默单胺氧化酶B(Monoamine Oxidase B,MAOB)基因的干扰小RNA(siRNA)片段,建立RNA干扰技术平台。方法构建含单胺氧化酶B基因siRNA片段的pSilencer 1.0-U6 siRNA表达质粒,转染Hela细胞,用RT-PCR和定量PCR方法检测单氨氧化酶B mRNA的水平。结果所设计的两段siRNA片段均有干扰MAOB mRNA水平的作用,片段2的作用优于片段1,两个片段之间有一定的协同作用。结论选择的siRNA片段可以抑制Hela细胞单胺氧化酶B的表达。 展开更多

关键词 RNA干扰 单氨氧化酶B 基因

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切实加强干细胞的研究和管理

9

作者 李凌松 汤健 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第22期1345-1345,共1页

关键词 干细胞 研究 管理 胚胎干细胞 成体干细胞

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干细胞的临床应用研究进展 被引量：3

10

作者 夏修金 张浣清 +1 位作者 杜仪琴 李凌松 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期638-639,共2页

关键词 干细胞 临床应用

原文传递

羊膜为载体的人角膜缘上皮细胞移植治疗大鼠角膜碱烧伤的研究 被引量：5

11

作者 杨威 顾国贞 +4 位作者 宋鄂 崔治华 董宇 隋东明 马艳玲 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期134-141,共8页

目的研究人角膜缘上皮细胞的生物学特性，探讨体外培养的人角膜缘上皮细胞移植进行眼表重建的临床应用价值及前景。方法体外培养人角膜缘上皮细胞，通过免疫荧光染色法和逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）法分析表型，Brdu掺入法检测慢周期... 目的研究人角膜缘上皮细胞的生物学特性，探讨体外培养的人角膜缘上皮细胞移植进行眼表重建的临床应用价值及前景。方法体外培养人角膜缘上皮细胞，通过免疫荧光染色法和逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）法分析表型，Brdu掺入法检测慢周期（slow—cycling）细胞。建立大鼠角膜碱烧伤模型，随机分为单纯对照组、羊膜移植（AMT）组及羊膜为载体的角膜缘上皮细胞移植（LSAT）组，术后通过裂隙灯显微镜观察、角膜切片HE染色及免疫荧光染色等方法对各组大鼠眼表恢复情况进行评价。结果培养早期大多数角膜缘上皮细胞p63和K19染色阳性，仅少数细胞K3染色阳性；随培养时间的延长，K3阳性细胞增多，部分细胞同时表达p63和K3。RT—PCR示培养的角膜缘上皮细胞中p63和K12均有阳性表达，而角膜上皮细胞仅表达K12。Brdu掺入法检测到慢周期细胞。动物实验表明，LSAT可以显著减轻角膜病变，使角膜恢复完整性和透明性，眼表评分各项指标与AMT组和对照组比较差异均有统计学意义。LSAT组大鼠角膜切片染色示大部分上皮细胞抗人核和K3染色阳性。结论体外培养的人角膜缘上皮细胞中p63不仅表达于角膜缘干细胞，在短暂扩充细胞中也有一定量的表达；慢周期细胞的存在证实了培养的角膜缘上皮细胞中角膜缘干细胞的存在，p63和K19阳性、K3阴性的细胞为角膜缘干细胞；羊膜为载体的体外培养的人角膜缘上皮细胞移植可有效重建眼表，具有较高的临床应用价值与发展前景。 展开更多

关键词 角膜缘 眼烧伤 烧伤 化学 羊膜 角膜移植

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帕金森病大鼠模型细胞移植的PET在体显像研究 被引量：2

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作者 王瑞民 郭喆 +6 位作者 张锦明 沈丽 尚爱加 陈英茂 姚树林 尹大一 田嘉禾 《中华核医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期113-116,共4页

目的探讨PET在体显示移植于帕金森病（PD）大鼠模型脑内的视网膜色素上皮（RPE）细胞分化结果及治疗效果。方法将RPE细胞移植于治疗组PD模型大鼠（12只，其中1只用于组织化学染色）纹状体内，对照组（11只）移植相同体积的生理盐水。移... 目的探讨PET在体显示移植于帕金森病（PD）大鼠模型脑内的视网膜色素上皮（RPE）细胞分化结果及治疗效果。方法将RPE细胞移植于治疗组PD模型大鼠（12只，其中1只用于组织化学染色）纹状体内，对照组（11只）移植相同体积的生理盐水。移植前后分别进行^11C-雷氯必利（raclopride）、^11C-N-甲基-2β-甲基酯-3β-（4-F-苯基）托烷（β-CFF）PET显像，并用感兴趣区（ROI）法分析2组移植前后显像变化。移植后观察大鼠行为学改善情况及分析细胞免疫组织化学染色结果。结果移植前PET显像示大鼠模型损伤侧纹状体^11C-raclopride摄取增高，而^11C-13-CFF摄取下降。移植RPE细胞后，治疗组大鼠损伤侧纹状体^11C-raclopride摄取降低，^11C-β-CFF摄取上升。ROI分析纹状体/小脑放射性比值^11C-raclopride由1．870±0．465（移植前）降至1．601±0．257（移植后）；^11C-13．CFF由1．827±0．347（移植前）升至2．336±0．326（移植后）。大鼠旋转行为有所改善。免疫组织化学染色显示移植的RPE细胞可分化为多巴胺神经元。结论PET显像可为监测移植细胞存活、分化及转归提供一种在体、无创、可视化评价工具。 展开更多

关键词 帕金森病 移植 色素上皮 眼 体层摄影术 发射型计算机 大鼠

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γ刀照射三叉神经的剂量-效应关系研究

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作者 陈樵 张曼 +5 位作者 李立东 扈启宽 李美育 杜吉祥 郭裕天 刘晓冬 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期904-909,共6页

目的 探讨伽玛刀不同剂量照射大鼠三叉神经（感觉根）后对照射范围内三叉神经组织的损伤以及对周围临近脑干组织和脑桥的影响,为优化伽玛刀照射剂量提供理论依据.方法 选用成年雄性SD大鼠65只,分别以不同照射剂量（20、40、80、160 Gy... 目的 探讨伽玛刀不同剂量照射大鼠三叉神经（感觉根）后对照射范围内三叉神经组织的损伤以及对周围临近脑干组织和脑桥的影响,为优化伽玛刀照射剂量提供理论依据.方法 选用成年雄性SD大鼠65只,分别以不同照射剂量（20、40、80、160 Gy）照射三叉神经,观察照射后1周、2周、4周大鼠行为学变化,取全脑组织进行HE、Nissl、MAPLC3B、53BP1、XRCC1染色观察细胞形态学和自噬以及DNA损伤和修复等变化.结果 所有剂量组照射大鼠均存活.20和40 Gy组均无行为学和病理学改变;80和160 Gy组均出现了照射部位毛发脱落;HE、Nissle、LC3B、53BP1及XRCC1染色发现,受照部位组织在80和160 Gy照射后,可见神经元细胞固缩、膨胀,神经元细胞发生自噬以及DNA损伤明显,160 Gy组DNA损伤明显加重.40 Gy照射后,神经元发生DNA损伤修复的程度较其他剂量增高.结论 伽玛刀照射三叉神经根对神经元有明显的剂量-效应关系. 展开更多

关键词 伽玛刀 放射性损伤 三叉神经

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