细胞生物学实验教学中学生科研能力培养的措施研究 被引量：10

1

作者 张伟 《高等理科教育》 2012年第1期130-133,162,共5页

培养学生的科研能力是当今高等院校实验教学的主要目标,科研文献的检索和阅读能力、实验设计能力、科学记录实验、发现问题和解决问题的能力、掌握最基本实验的技能、科研论文的撰写等是独立从事科研工作所必备的几项基本能力。在细胞... 培养学生的科研能力是当今高等院校实验教学的主要目标,科研文献的检索和阅读能力、实验设计能力、科学记录实验、发现问题和解决问题的能力、掌握最基本实验的技能、科研论文的撰写等是独立从事科研工作所必备的几项基本能力。在细胞生物学实验教学改革中,我们通过开设创新设计实验,规范细胞生物学的基本操作,开展文献的讨论等教学措施将上述基本科研工作能力的培养贯穿到整个教学环节中,为学生今后独立从事科研工作奠定基础。 展开更多

关键词 科研能力 细胞生物学实验 科研文献 实验设计 论文写作

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研究生实验教学中细胞转染技术结合斑点免疫印迹技术的实验探索

2

作者 黄凌云 张健翔 +2 位作者 刘进 窦非 张晓嫣 《教育进展》 2024年第1期800-805,共6页

在研究生组织及细胞培养实验教学中,细胞转染技术是一个重要的组成部分,以往实验方案使用携带荧光蛋白GFP基因的质粒转染细胞后,可使用荧光显微镜进行观察定性分析转染是否成功并粗略计算转染效率,但对于没有荧光标记的细胞转染结果分... 在研究生组织及细胞培养实验教学中,细胞转染技术是一个重要的组成部分,以往实验方案使用携带荧光蛋白GFP基因的质粒转染细胞后,可使用荧光显微镜进行观察定性分析转染是否成功并粗略计算转染效率,但对于没有荧光标记的细胞转染结果分析检测方法在教学上尚有欠缺。本实验针对这个问题,在检测方法中加入斑点免疫印迹技术,并对实验方案及分析方法进行了探索,以便于学生掌握更全面的细胞生物学分析技术。 展开更多

关键词 转染 荧光显微成像 斑点免疫印迹

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Vav3蛋白的调控机制及其生物学功能 被引量：2

3

作者 尹富民 孙晟 张伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期491-497,共7页

Vav家族蛋白是Rho家族GTPase的鸟嘌呤核苷酸转移因子.Vav3作为Vav家族蛋白的成员之一,由8个结构域组成,其结构的复杂性赋予其功能的多样性.它可通过调节Rho家族不同成员的活性参与对MAPK、PI3K-Akt、NF-κB等信号转导通路的调控,在维持... Vav家族蛋白是Rho家族GTPase的鸟嘌呤核苷酸转移因子.Vav3作为Vav家族蛋白的成员之一,由8个结构域组成,其结构的复杂性赋予其功能的多样性.它可通过调节Rho家族不同成员的活性参与对MAPK、PI3K-Akt、NF-κB等信号转导通路的调控,在维持细胞形态、细胞黏附、血管生成、免疫功能的调节和细胞分化等过程中发挥重要作用.最近的研究发现,Vav3表达的失调与肿瘤发生密切相关,提示Vav3具有原癌基因的活性.本文对Vav3蛋白的结构、功能及其上下游的信号调节通路等进行了综述. 展开更多

关键词 Vav3蛋白 信号通路 肿瘤 生物学功能

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紫龙金对BGC-823细胞增殖的抑制作用及对p16^INK4a启动子活性的影响 被引量：5

4

作者 樊粉霞 卫玮 +1 位作者 柳惠图 张伟 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期68-71,共4页

利用记数法和Brdu脉冲标记法研究了紫龙金对细胞增殖的影响,western blot检测结果表明:紫龙金(3,4mg.mL-1)处理可明显抑制人胃癌BGC-823细胞的生长、提高BGC-823细胞中p16的表达水平.进一步利用含有p16INK4a启动子片段(-967^-165区域)... 利用记数法和Brdu脉冲标记法研究了紫龙金对细胞增殖的影响,western blot检测结果表明:紫龙金(3,4mg.mL-1)处理可明显抑制人胃癌BGC-823细胞的生长、提高BGC-823细胞中p16的表达水平.进一步利用含有p16INK4a启动子片段(-967^-165区域)及荧光素酶报告系统的载体pGL3-Basic-p16N研究了紫龙金对p16INK4a启动子活性的影响及其作用的分子机制,结果表明,紫龙金可能通过提高p16INK4a启动子活性而促进p16的表达,从而抑制细胞的增殖. 展开更多

关键词 紫龙金 p16^INK4a启动子 荧光素酶

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表达PKCα反义RNA对人肺癌细胞增殖的影响 被引量：2

5

作者 王向阳 柳惠图 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第3期412-416,共5页

运用基因重组和基因转染技术 ,将 PKCα c DNA反向插入的重组质粒 p XJ41 - CKPα导入人肺癌 LTEPa- 2细胞 .经 Northern印迹 ,Western印迹等检验 ,表明成功地建立了稳定表达 PKCα反义 RNA的人肺癌细胞 (LT· AS4) .进一步研究了表... 运用基因重组和基因转染技术 ,将 PKCα c DNA反向插入的重组质粒 p XJ41 - CKPα导入人肺癌 LTEPa- 2细胞 .经 Northern印迹 ,Western印迹等检验 ,表明成功地建立了稳定表达 PKCα反义 RNA的人肺癌细胞 (LT· AS4) .进一步研究了表达 PKCα反义 RNA对人肺癌细胞 LTEPa-2增殖的影响 .结果表明 ,表达 PKCα反义 RNA可抑制人肺癌细胞增殖速率 ,流式细胞光度术检测 ,G1 期细胞百分数增加 ,S期细胞百分数降低 ,并进一步探讨了其作用机理 ,观察到与增殖相关基因 c- myc、Ca M和 Cyclin B1的表达水平均下降 .这可能是 PKCα表达被阻抑。 展开更多

关键词 PKCΑ 人肺癌细胞 反义RNA 细胞增殖 基因表达

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三氟拉嗪通过诱导p16^INK4a抑制BGC-823细胞增殖 被引量：2

6

作者 樊粉霞 张伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期950-955,共6页

为探索三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP)抗肿瘤作用机制,对胃癌BGC-823细胞进行TFP(5、10μmol/L)处理后,利用计数法、BrdU脉冲标记法、Western印迹等方法从细胞形态、细胞增殖、S期细胞百分比以及相关因子表达水平等方面进行分析.结果显... 为探索三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP)抗肿瘤作用机制,对胃癌BGC-823细胞进行TFP(5、10μmol/L)处理后,利用计数法、BrdU脉冲标记法、Western印迹等方法从细胞形态、细胞增殖、S期细胞百分比以及相关因子表达水平等方面进行分析.结果显示,TFP处理后,细胞形态发生明显改变,细胞增殖受到明显抑制且呈时间计量效应关系;S期细胞比例下降;p16INK4a表达水平升高.为进一步研究TFP诱导p16INK4a表达的分子机制,本实验采用插入p16INK4a启动子片段及荧光素酶报告系统的载体pGL3-Basic-p16INK4a(-967～-165 bp),研究了TFP在转录水平对p16INK4a启动子活性的影响.结果表明,TFP能够提高p16INK4a的启动子活性.上述结果提示,TFP通过诱导p16INK4a表达抑制BGC-823细胞增殖. 展开更多

关键词 三氟拉嗪(TFP) p16INK4a启动子 荧光素酶 胃癌BGC-823细胞

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Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的生物学功能研究 被引量：8

7

作者 胡新宙 王旭 张伟 《生命科学》 CSCD 2007年第1期31-36,共6页

Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolamine-binding protein,PEBP)家族,广泛存在于各种生物中,参与了对细胞内多种信号转导通路的调节作用。RKIP可以与Raf-1结合,从而抑制... Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolamine-binding protein,PEBP)家族,广泛存在于各种生物中,参与了对细胞内多种信号转导通路的调节作用。RKIP可以与Raf-1结合,从而抑制MAPK信号转导通路,并参与了对G蛋白偶联受体信号通路和NF-κB信号通路的调控。RKIP在膜的生物合成、精子发生、神经发育和细胞凋亡等生理过程中发挥重要作用,并参与了老年痴呆症及糖尿病等的病理过程。此外,近年来的研究表明RKIP是一个新的转移抑制因子,可以抑制前列腺癌、人乳腺癌和黑色素瘤细胞的转移,并已成为一个新的前列腺癌诊断标志物。 展开更多

关键词 RAF激酶抑制蛋白 信号转导 前列腺癌 转移 细胞凋亡

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Pup-蛋白酶体系统的作用机制和生物学功能

8

作者 戴炜 李梦淼 张俊杰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2023年第4期725-739,共15页

Pup-蛋白酶体系统(Pup-proteasome system,PPS)是原核生物的一种翻译后蛋白质修饰降解体系,在去酰胺酶(deamidase of Pup,Dop)和蛋白酶体辅助因子A(proteasome accessory factorA,PafA)两种酶的作用下,原核生物类泛素蛋白(prokaryotic u... Pup-蛋白酶体系统(Pup-proteasome system,PPS)是原核生物的一种翻译后蛋白质修饰降解体系,在去酰胺酶(deamidase of Pup,Dop)和蛋白酶体辅助因子A(proteasome accessory factorA,PafA)两种酶的作用下,原核生物类泛素蛋白(prokaryotic ubiquitin-like protein,Pup)可以标记靶蛋白,并介导靶蛋白经蛋白酶体降解。在分枝杆菌中PPS参与氧化应激、营养缺乏、热激、DNA损伤等多种应激反应,并在金属离子稳态调控、毒素-抗毒素系统(toxin-antitoxin system,TA system)的调节以及抵抗宿主免疫等过程中发挥作用。PPS与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)的持留性和致病性直接相关,因此PPS中的PafA、Dop和蛋白酶体均是抗结核药物开发的新靶点,筛选针对PPS的小分子抑制剂将成为新型抗结核药物研发的一个新途径。此外,Paf A催化的蛋白质Pup化被应用于生物技术的研发,形成了一种新的邻近标记技术——基于Pup化的邻近标记技术(pupylation-based interaction tagging,PUP-IT),应用于蛋白质相互作用的研究。本文综述了Pup-蛋白酶体系统的作用机制及其生物学功能研究的进展,并探讨了该系统在抗结核药物和生物技术研发中的应用前景。 展开更多

关键词 Pup-蛋白酶体系统 DOP PafA PUP 蛋白酶体 结核分枝杆菌

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CBL协同翻转课堂教学模式在植物科学前沿通识课程中的实践与探索

9

作者 张凡凡 于延欢 刘婷 《教育进展》 2024年第4期431-436,共6页

植物科学前沿是一门理论性和实用性兼顾的通识课程,在使用传统的讲授方法教学时会造成学生的被动学习,不利于人才的全面培养。我们对基于案例学习(Case-Based Learning, CBL)协同翻转课堂的教学模式进行探索和应用,优化和完善现有教学... 植物科学前沿是一门理论性和实用性兼顾的通识课程,在使用传统的讲授方法教学时会造成学生的被动学习,不利于人才的全面培养。我们对基于案例学习(Case-Based Learning, CBL)协同翻转课堂的教学模式进行探索和应用,优化和完善现有教学体系及教学方法,提高学生的学习成效,培养学生的创新思维,全面提升学生运用植物科学原理与技术解决问题的实践创新能力。 展开更多

关键词 CBL 翻转课堂 教学模式 植物科学

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人胃癌BGC-823细胞中去甲斑蝥素抑癌作用机理的蛋白质组学研究 被引量：14

10

作者 曹秋菊 田志华 +6 位作者 孙晟 杨宁 王芳 黄凌云 彭安 柳惠图 张伟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1114-1121,共8页

去甲斑蝥素是我国自行研制的抗肿瘤药物,在临床上主要用于消化道肿瘤的治疗.实验表明,去甲斑蝥素可引起人胃癌BGC-823细胞发生M期阻滞及细胞凋亡.进一步利用双向电泳和质谱技术,筛选出了去甲斑蝥素抑癌作用相关蛋白.研究显示,线粒体热... 去甲斑蝥素是我国自行研制的抗肿瘤药物,在临床上主要用于消化道肿瘤的治疗.实验表明,去甲斑蝥素可引起人胃癌BGC-823细胞发生M期阻滞及细胞凋亡.进一步利用双向电泳和质谱技术,筛选出了去甲斑蝥素抑癌作用相关蛋白.研究显示,线粒体热休克蛋白CH60、线粒体ATP合酶d亚单位、内质网葡萄糖调节蛋白GRP78、线粒体Hsp70的辅助因子GRPE1、SH3L3以及染色质组装因子1小亚基RBBP4参与了去甲斑蝥素的抑癌作用.研究提示,去甲斑蝥素可能通过促进线粒体热休克蛋白及p53的表达进而激活caspase-3依赖的凋亡通路,并且去甲斑蝥素在引发内质网协迫之后,可通过抑制胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)的活性促进肿瘤细胞的凋亡.进一步分析了去甲斑蝥素与线粒体ATP合酶抑制剂寡霉素A的联合用药对人胃癌细胞生长的影响,结果表明,联合用药的抑瘤效果比单独用药的抑瘤效果显著,提示去甲斑蝥素可能通过抑制线粒体ATP合酶功能抑制BGC-823生长.上述结果为优化去甲斑蝥素的联合用药方案提供了新线索. 展开更多

关键词 去甲斑蝥素 M期阻滞 细胞凋亡 蛋白质组学

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原核生物类泛素蛋白Pup-蛋白酶体系统的研究进展 被引量：13

11

作者 汪春军 林进 张俊杰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1091-1098,共8页

真核泛素-蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的重要机制,参与细胞生理功能调控,因此泛素-蛋白酶体通路的机制和功能研究备受关注.20世纪80年代,人们就发现放线菌中存在原核蛋白酶体,但是对于原核蛋白酶体的功能和作用机理长期以来了解甚少... 真核泛素-蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的重要机制,参与细胞生理功能调控,因此泛素-蛋白酶体通路的机制和功能研究备受关注.20世纪80年代,人们就发现放线菌中存在原核蛋白酶体,但是对于原核蛋白酶体的功能和作用机理长期以来了解甚少.2008年,Pearce等在结核分枝杆菌中发现了原核类泛素蛋白(prokaryotic ubiquitin-like protein,Pup).在Dop、PafA、Mpa等辅助因子的作用下,Pup可以共价标记多种功能蛋白,并介导被标记蛋白质通过蛋白酶体降解,Pup-蛋白酶体系统的发现揭示了原核生物中一个崭新的蛋白质降解机制.Pup-蛋白酶体系统的靶蛋白涉及物质中间代谢、信号通路、毒性和抗毒性因子、细胞壁和细胞膜组分等多个方面,并且与结核分枝杆菌的致病性相关,被认为是新的结核病治疗药物靶点.本文就原核Pup-蛋白酶体系统的作用机理及其功能的研究进展作一综述. 展开更多

关键词 原核类泛素蛋白(Pup) 蛋白酶体 蛋白质降解 结核分枝杆菌

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蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞中Ha-ras基因表达的影响 被引量：3

12

作者 冯怡 柳惠图 高萍 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第5期781-785,共5页

运用基因转染技术 ,将蛋白激酶C(PKCα)cDNA正向插入的真核表达重组质粒pXJ4 1 PKCα ,导入人正常肝细胞 (L 0 2 ) ,经蛋白质免疫印迹等检验 ,表明成功构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型 (LT3) ,用LT3和表达反义PKCα的人肝癌细... 运用基因转染技术 ,将蛋白激酶C(PKCα)cDNA正向插入的真核表达重组质粒pXJ4 1 PKCα ,导入人正常肝细胞 (L 0 2 ) ,经蛋白质免疫印迹等检验 ,表明成功构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型 (LT3) ,用LT3和表达反义PKCα的人肝癌细胞HT6为细胞模型 ,通过RT PCR ,蛋白质印迹 (Westernblot)等分析和进一步运用自行构建的真核表达质粒prasGL3,进行荧光素酶活性检测表明 :过表达PKCα可以促进L 0 2细胞的增殖速率 ,并引起Ha ras基因转录水平上升和Ha ras启动子活性升高 ;反之 ,表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞增殖被抑制 ,Ha ras基因转录水平下降 ,Ha ras启动子活性降低 .通过实验我们首次观察到 ,PKCα亚类对Ha ras癌基因表达的影响与其对Ha ras启动子活性的作用有关 ,PKCα可能参与了对Ha 展开更多

关键词 蛋白激酶CΑ 人正常肝 肝癌细胞 HA-RAS 基因表达

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激光共聚焦显微成像技术在植物细胞微丝骨架三维动态观察中的应用 被引量：7

13

作者 薛秀花 张晓嫣 +1 位作者 郑东 任海云 《现代仪器》 2010年第5期50-54,共5页

激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)是目前生物学领域应用最广泛、分辨率高的仪器。可用于细胞内形态结构观察及三维重建、组分空间定位、实时动态变化监测等研究,图像分析软件还能提供荧光强度、空间距离... 激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)是目前生物学领域应用最广泛、分辨率高的仪器。可用于细胞内形态结构观察及三维重建、组分空间定位、实时动态变化监测等研究,图像分析软件还能提供荧光强度、空间距离定量测定的丰富信息。本文以携带GFP融合拟南芥丝束蛋白1(AtFIM1)的肌动蛋白结合结构域2(fABD2)基因的B Y-2转基因细胞系为材料,运用LSCM技术观察到间期细胞的网络状微丝结构并重构出胞内微丝的三维网络结构;实时动态监测细胞有丝分裂过程中微丝骨架的动态变化;通过细胞内荧光强度的分布直观地看出BY-2细胞胞质分裂过程中微丝骨架的动态变化。这些结果显示出LSCM在研究植物细胞微丝骨架的三维网络动态结构及图像荧光强度分析与统计方面的优越性。 展开更多

关键词 激光共聚焦显微镜 微丝骨架 肌动蛋白结合蛋白 三维动态 BY-2细胞 胞质分裂

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不同恶化程度胃癌细胞系的细胞间隙连接通讯功能及Cx43表达的差异 被引量：5

14

作者 田志华 丁慧荣 +2 位作者 张宏 张伟 李振甫 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期63-68,0+2,共6页

以人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1和不同恶化程度的人胃癌细胞系(低恶化AGS细胞系、中恶化SGC-7901细胞系、高恶化BGC-823细胞系)为研究对象,采用激光共聚焦显微镜的荧光漂白恢复技术及划痕标记荧光染料示踪技术研究不同恶化程度的胃癌细... 以人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1和不同恶化程度的人胃癌细胞系(低恶化AGS细胞系、中恶化SGC-7901细胞系、高恶化BGC-823细胞系)为研究对象,采用激光共聚焦显微镜的荧光漂白恢复技术及划痕标记荧光染料示踪技术研究不同恶化程度的胃癌细胞系细胞间隙连接通讯(Gap junctional intercellular communication,GJIC)功能的差异;采用荧光定量PCR技术和间接免疫荧光技术检测间隙连接蛋白(Connexin43,Cx43)基因在mRNA和蛋白水平的表达差异,探求其与胃癌恶性程度的相关性.结果表明,在正常胃细胞系和低、中及高恶化胃腺癌细胞系中,细胞间的GJIC功能随着恶性程度的升高而减弱(AGS、SGC-7901)或消失(BGC-823),且Cx43蛋白及mRNA的表达量随着恶性程度的升高而下调(AGS、SGC-7901)或缺失(BGC-823).这提示胃癌恶性程度与胃癌细胞的GJIC功能显著相关(P<0.05),GJIC在胃癌发生中起重要作用. 展开更多

关键词 胃癌细胞系 细胞间隙连接通讯(GJIC) 间隙连接蛋白(Cx43) 荧光漂白恢复技术 划痕标记荧光染料示踪技术 荧光定量PCR技术

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PKA和PKC对HeLa细胞G_2/M/G_1进程的影响 被引量：2

15

作者 郝智慧 柳惠图 王端顺 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期264-267,共4页

为了研究PKA和PKC对HeLa细胞G2 →M期和M→G1期进程的影响 ,用PKA和PKC抑制剂分别处理同步的G2 期和M期的HeLa细胞后 ,测定了细胞有丝分裂指数和PKA ,PKC与CDC2激酶的活性 .结果表明 ,PKAⅢ型抑制剂在促进HeLa细胞G2 /M /G1进程的同时 ... 为了研究PKA和PKC对HeLa细胞G2 →M期和M→G1期进程的影响 ,用PKA和PKC抑制剂分别处理同步的G2 期和M期的HeLa细胞后 ,测定了细胞有丝分裂指数和PKA ,PKC与CDC2激酶的活性 .结果表明 ,PKAⅢ型抑制剂在促进HeLa细胞G2 /M /G1进程的同时 ,刺激了PKC的活性 ,反之 ,PKC的抑制剂GF 10 92 0 3X在阻抑HeLa细胞G2 /M /G1进程的同时 ,激活了PKA的活性 ,与其相关的CDC2激酶活性也发生了相应的变化 .实验表明 ,PKA和PKC分别负调和正调HeLa细胞G2 /M/G1进程 ,两者表现出拮抗关系 . 展开更多

关键词 PKA PKC G2/M/G1进程 细胞周期 HELA细胞

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新基因P15RS表达产物在人胃癌细胞细胞周期中定位的研究

16

作者 张小勇 张伟 +3 位作者 高萍 常智杰 孙一娜 柳惠图 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期771-776,共6页

P15RS是在p15INK4b高表达的人黑色素瘤细胞MLIK6G1期中发现和克隆的新基因.研究表明,该基因可能在G1期作为增殖负调因子起作用.为了观察P15RS基因产物在细胞中的定位,构建了表达P15RS-EGFP融合蛋白的真核表达质粒pEGFP-P15RS.用绿色荧... P15RS是在p15INK4b高表达的人黑色素瘤细胞MLIK6G1期中发现和克隆的新基因.研究表明,该基因可能在G1期作为增殖负调因子起作用.为了观察P15RS基因产物在细胞中的定位,构建了表达P15RS-EGFP融合蛋白的真核表达质粒pEGFP-P15RS.用绿色荧光蛋白GFP作为报告基因,以人胃癌细胞BGC-823为实验模型,将pEGFP-P15RS转染BGC-823细胞.实验表明,P15RS基因表达产物在G1期、S期和G2期均定位于细胞核内,未见在核仁中分布,M期凝缩的染色体上未见.因此,P15RS可能定位在核质中. 展开更多

关键词 P15RS 人胃癌细胞 GFP 细胞定位

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长链非编码RNA YLB调控多个亚端粒区域基因的表达

17

作者 梁亚楠 张月 +1 位作者 姜天霞 邱小波 《中国生化药物杂志》 CAS 2017年第1期1-5,共5页

目的 探讨一种自身表达受HECT类泛素连接酶Huwel/Tom1负调控的长链非编码RNA YLL066W-B（简称YLB）对亚端粒区域基因表达的调控作用。方法 建立Tom1基因敲除酵母菌株,采用实时定量PCR和基因芯片的方法检测Tom1敲除对基因表达的影响。构... 目的 探讨一种自身表达受HECT类泛素连接酶Huwel/Tom1负调控的长链非编码RNA YLL066W-B（简称YLB）对亚端粒区域基因表达的调控作用。方法 建立Tom1基因敲除酵母菌株,采用实时定量PCR和基因芯片的方法检测Tom1敲除对基因表达的影响。构建表达YLB-HA、HA-YLB、pYES2-HA-YLB酵母菌株并结合测序、免疫印迹实验分析YLB的表达产物。通过实时定量PCR分析YLB敲除或过表达对酵母亚端粒区域多个基因转录水平的影响。结果 Tom1的敲除明显改变众多基因的表达,包括上调参与细胞周期调控基因YLB的表达。免疫印迹检测不到YLB所翻译的蛋白质,结合针对YLB的核苷酸序列的分析结果,推测YLB的转录产物是一种长链非编码RNA（lnc RNA）。NCBI检索结果显示,YLB不与其它基因的编码序列同源,但与pau和DNA解旋酶Yrf家族等多个亚端粒区域基因编码区的上下游调控序列同源。实时定量PCR分析发现YLB敲除上调Yrf1-4、pau4和pau22 mRNA的表达水平,但其过表达则下调这些基因的表达。结论发现了一种新的长链非编码RNA YLB,其转录受Tom1负调控,而其自身可以调控多个亚端粒区域基因的表达。 展开更多

关键词 长链非编码RNA YLB Tom1 亚端粒基因

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Autotaxin表达调控机制及其生物学功能 被引量：4

18

作者 张地 张俊杰 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2022年第8期1148-1162,共15页

Autotaxin(ATX)是催化溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)生成的关键酶,LPA可以与细胞膜上至少6种G蛋白偶联受体(称为LPA受体1-6)结合,激活各种信号转导通路,在多种生理和病理过程中发挥重要作用.ATX的表达在转录、转录后及分泌过... Autotaxin(ATX)是催化溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)生成的关键酶,LPA可以与细胞膜上至少6种G蛋白偶联受体(称为LPA受体1-6)结合,激活各种信号转导通路,在多种生理和病理过程中发挥重要作用.ATX的表达在转录、转录后及分泌过程中受到多水平的调控,近期的研究还发现了ATX表达的表观遗传调控机制.肿瘤微环境中ATX和LPA可以促进肿瘤细胞的增殖和迁移,因此ATX-LPA通路被认为是一种潜在的癌症治疗靶点.目前,人们已经研发了多种ATX抑制剂,并发现具有临床应用潜力.本文重点关注ATX的表达调控机制和生物学功能,阐释ATX-LPA信号轴调控的生理和病理意义. 展开更多

关键词 AUTOTAXIN 溶血磷脂酸 溶血磷脂酸受体 表达调控 生物学功能

原文传递

Polycomblike家族蛋白参与表观遗传调控的分子机制及其生物学意义 被引量：2

19

作者 周海霞 王占新 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2022年第8期1118-1128,共11页

PRC2复合物是Polycomb家族蛋白的重要复合物之一,在细胞的增殖、分化和谱系特征的维持等生理过程中发挥着至关重要的作用.PRC2主要通过修饰染色质和调控染色质结构的方式对基因表达起抑制作用,其中PRC2的核心组分EZH2在组蛋白H3第27位... PRC2复合物是Polycomb家族蛋白的重要复合物之一,在细胞的增殖、分化和谱系特征的维持等生理过程中发挥着至关重要的作用.PRC2主要通过修饰染色质和调控染色质结构的方式对基因表达起抑制作用,其中PRC2的核心组分EZH2在组蛋白H3第27位赖氨酸上留下的三甲基化修饰(H3K27me3)是与基因抑制相关的重要标记之一.PRC2的核心组分需要与其他结合蛋白结合形成全酶才能发挥出最大催化活性.PRC2的结合蛋白,例如Polycomblike(PCL)蛋白,对PRC2的功能起着重要的调控作用.近些年的研究表明,PCL蛋白对PRC2的活性和其在染色质上的招募起着重要的调控作用.此外,PCL蛋白的表达异常与多种人类癌症相关.因此PCL蛋白结构与功能的研究对深入了解其调控PRC2的机制以及靶向PCL相关的药物研发均具重要意义.本文就近年来关于PCL蛋白的结构和功能研究进展进行总结,着重阐述人源PCL蛋白的分子机制和生物学功能. 展开更多

关键词 PCL家族蛋白 表观遗传调控 PRC2复合物 细胞记忆 招募

原文传递

PP4低表达对人乳腺癌细胞MCF7增殖的影响 被引量：1

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作者 宁丽峰 龙治涛 +2 位作者 黄秀清 孙玲玲 桑建利 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第18期2119-2125,共7页

蛋白磷酸酶4(proteinphosphatase4,PP4)在果蝇、线虫及哺乳动物细胞中都可定位于中心体上,且在果蝇和线虫中参与了中心体成熟.为探讨PP4在哺乳动物细胞中的功能,通过RT-PCR的方法扩增得到PP4基因全长序列,构建pEGFP-C1-PP4融合蛋白表达... 蛋白磷酸酶4(proteinphosphatase4,PP4)在果蝇、线虫及哺乳动物细胞中都可定位于中心体上,且在果蝇和线虫中参与了中心体成熟.为探讨PP4在哺乳动物细胞中的功能,通过RT-PCR的方法扩增得到PP4基因全长序列,构建pEGFP-C1-PP4融合蛋白表达质粒.将该质粒转染MCF7细胞,用间接免疫荧光技术确认PP4在MCF7细胞中的中心体定位.将PP4蛋白中非磷酸酶保守区序列作为反义抑制作用的靶序列,构建真核表达重组质粒pXJ41-as-PP4并转染MCF7细胞,G418筛选获得稳定的PP4表达受抑制的细胞株MCF7pXJ41-as-PP4.对此细胞株进行细胞形态、骨架结构、生长特性及有丝分裂过程观察分析,发现其生长速率明显减慢,血清依赖性增强,TdR双阻断进行周期同步化结合流式细胞术以及有丝分裂指数分析发现细胞进入M期受阻.间接免疫荧光检测发现,细胞中微管组织紊乱,细胞核物质增加,细胞群体中多核细胞比例增加,有丝分裂过程发生异常,出现较多多极分裂现象.这些结果表明,在哺乳动物细胞中,PP4的正常表达对中心体正常行使微管组织功能是必要的,抑制PP4表达将导致细胞增殖及周期进程发生异常. 展开更多

关键词 MCF7 细胞周期 蛋白磷酸酶4(PP4) 微管 中心体 有丝分裂 反义RNA技术

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