目的 建立柯萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus group A type 16,CA16）抗原定量检测的ELISA方法,用于CA16疫苗中抗原的定量检测。方法 以纯化的CA16病毒颗粒作为免疫原,分别免疫家兔和BALB/c小鼠,制备抗CA16多克隆抗体和单克隆抗体。以...目的 建立柯萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus group A type 16,CA16）抗原定量检测的ELISA方法,用于CA16疫苗中抗原的定量检测。方法 以纯化的CA16病毒颗粒作为免疫原,分别免疫家兔和BALB/c小鼠,制备抗CA16多克隆抗体和单克隆抗体。以抗CA16多抗作为包被抗体,经HRP酶标记的单抗作为酶标抗体,建立CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,确定该方法的线性范围,并进行准确度、精密度、稳定性及特异性验证。用建立的方法检测CA16疫苗原液制备过程样品中CA16抗原含量。结果 以抗CA16多抗为包被抗体,针对74株不同基因型的CA16的ELISA检测结果均为阳性,该抗CA16单抗的广谱性较好。该方法的线性范围为23.4～750 ng/ml,R2跃0.99,最小检出量为23.4 ng/ml;样品回收率在89%～108%之间,CV约15%,准确度和精密度较好;抗体包被板干燥后于37℃放置6 d,CV约20%,稳定性较好;PV纯化样品、EV71收获液、Vero细胞样品中抗原的A值均小于cutoff值,特异性较好。随着CA16疫苗制备过程的不断进行,中间品1-4比活分别为0.44、0.64、92.13和1 239.03,呈逐渐上升趋势。结论 建立了CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,该方法准确度、精密度高,稳定性及特异性较好,为CA16疫苗的研制及工艺开发奠定了基础。展开更多
文摘目的 建立柯萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus group A type 16,CA16）抗原定量检测的ELISA方法,用于CA16疫苗中抗原的定量检测。方法 以纯化的CA16病毒颗粒作为免疫原,分别免疫家兔和BALB/c小鼠,制备抗CA16多克隆抗体和单克隆抗体。以抗CA16多抗作为包被抗体,经HRP酶标记的单抗作为酶标抗体,建立CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,确定该方法的线性范围,并进行准确度、精密度、稳定性及特异性验证。用建立的方法检测CA16疫苗原液制备过程样品中CA16抗原含量。结果 以抗CA16多抗为包被抗体,针对74株不同基因型的CA16的ELISA检测结果均为阳性,该抗CA16单抗的广谱性较好。该方法的线性范围为23.4～750 ng/ml,R2跃0.99,最小检出量为23.4 ng/ml;样品回收率在89%～108%之间,CV约15%,准确度和精密度较好;抗体包被板干燥后于37℃放置6 d,CV约20%,稳定性较好;PV纯化样品、EV71收获液、Vero细胞样品中抗原的A值均小于cutoff值,特异性较好。随着CA16疫苗制备过程的不断进行,中间品1-4比活分别为0.44、0.64、92.13和1 239.03,呈逐渐上升趋势。结论 建立了CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,该方法准确度、精密度高,稳定性及特异性较好,为CA16疫苗的研制及工艺开发奠定了基础。
