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马链球菌兽疫亚种类M基因和猪链球菌2型mrp基因片段的融合表达及仔猪免疫试验 被引量:13
1
作者 范红结 陆承平 唐家琪 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期78-81,共4页
将含猪链球菌 2型mrp及马链球菌兽疫亚种类M基因融合片段的重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,表达了相对分子质量为 6 0 0 0 0左右的融合蛋白。利用组氨酸亲和层析柱 ,获得了纯化的融合蛋白 ,质量... 将含猪链球菌 2型mrp及马链球菌兽疫亚种类M基因融合片段的重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,表达了相对分子质量为 6 0 0 0 0左右的融合蛋白。利用组氨酸亲和层析柱 ,获得了纯化的融合蛋白 ,质量浓度为 4 2 μg·mL-1。以纯化的融合蛋白、宿主菌BL 2 1经IPTG诱导表达后的超声波破碎上清、马链球菌兽疫亚种ATCC 35 2 4 6株和猪链球菌 2型HA 980 1株制备的二联灭活苗为免疫原 ,分别免疫 30头仔猪。初次免疫 1月后 ,以同样的剂量再次免疫 ,3周后以 5×LD50 的ATCC 35 2 4 6和HA 980 1强毒株进行攻击。结果 ,纯化融合蛋白免疫组的免疫保护率达 6 0 % ,BL 2 1上清免疫组的免疫保护率为 5 0 % ,全菌二联灭活菌苗的免疫保护率达 90 %。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种M基因 猪链球菌2型mrp基因 融合表达 仔猪 免疫试验 链球菌病 二联疫苗
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猪源马链球菌兽疫亚种灭活疫苗对小鼠的免疫效力评价 被引量:9
2
作者 范红结 陆承平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期613-618,共6页
【目的】评价中国不同地区猪源马链球菌兽疫亚种分离株抗原性的差异,为猪链球菌病疫苗的研制提供指导。【方法】取从国内10省市分离的10株猪源马链球菌兽疫亚种分离株,分别制备灭活疫苗,免疫12周龄ICR小鼠,用同源菌株和ATCC35246株攻击... 【目的】评价中国不同地区猪源马链球菌兽疫亚种分离株抗原性的差异,为猪链球菌病疫苗的研制提供指导。【方法】取从国内10省市分离的10株猪源马链球菌兽疫亚种分离株,分别制备灭活疫苗,免疫12周龄ICR小鼠,用同源菌株和ATCC35246株攻击。【结果】以同源菌株攻击免疫小鼠,除CG-74-63株外,其余菌株的保护率均在90%以上;而以异源菌株ATCC35246进行攻击,免疫小鼠的免疫保护率为80%~100%。【结论】中国不同地区的猪源马链球菌兽疫亚种分离株的抗原性差异不大,单一菌株制备的疫苗具有保护性。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种 免疫效力 灭活疫苗
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猪繁殖与呼吸综合征与伪狂犬病混合感染的分子生物学快速诊断 被引量:2
3
作者 许立华 王玲 +3 位作者 苏鑫铭 王志亮 吴延功 陈溥言 《中国病毒学》 CAS CSCD 2003年第6期614-615,共2页
猪繁殖与呼吸综合征自1987年发现至今,已在世界大多数养猪国家和地区普遍存在[1,2].而伪狂犬病作为仅次于口蹄疫、猪瘟的危害养猪业的重要疫病,一直引起人们的高度重视[3,4].
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 伪狂犬病 混合感染 快速诊断
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三种猪繁殖障碍性病毒混合感染的分子生物学调查 被引量:34
4
作者 许立华 王玲 +1 位作者 芦银华 陈溥言 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期40-43,共4页
根据GenBank登录的PRRSVORF7、PCV 2ORF1基因及PRVTK基因的核苷酸序列设计合成引物 ,建立了分别用于检测PRRSV、PRV及PCV 2的RT PCR及PCR方法。应用该方法对 77份可疑病料进行了检测 ,以调查猪群中PCV 2与PRRSV和 (或 )PRV混合感染情况... 根据GenBank登录的PRRSVORF7、PCV 2ORF1基因及PRVTK基因的核苷酸序列设计合成引物 ,建立了分别用于检测PRRSV、PRV及PCV 2的RT PCR及PCR方法。应用该方法对 77份可疑病料进行了检测 ,以调查猪群中PCV 2与PRRSV和 (或 )PRV混合感染情况。结果表明 ,2 4份样品表现为PRRSV与PCV 2混合感染 ,占样品总数的 31.2 % ;17份样品检测为PRRSV与PRV混合感染 ;9份样品表现为PCV 2与PRV混合感染 ,占 11.7% ;另外 ,还有一定比例的三重感染 ,共 8个样品 ,占 10 .4 %。结果显示 ,猪群中PRRSV、PRV与PCV 展开更多
关键词 猪繁殖障碍 混合感染 猪生殖与呼吸综合征病毒 伪狂犬病病毒 猪圆环病毒
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检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的重组N蛋白—乳胶凝集试验的建立 被引量:14
5
作者 许立华 苏鑫铭 +4 位作者 刘华雷 任雪枫 王志亮 吴延功 陈溥言 《中国病毒学》 CAS CSCD 2004年第4期401-403,共3页
The purified recombinant nuclocapsid protein of PRRSV was used to conjoined with latex, and the conjoined concentration,temperature and time were optimized, a detection method for serum antibodies against Porcine repr... The purified recombinant nuclocapsid protein of PRRSV was used to conjoined with latex, and the conjoined concentration,temperature and time were optimized, a detection method for serum antibodies against Porcine reproductive and respiratory syndrome virus was established. Some tests for the method’s sensitivity, specificity and stability were confirmed. About 200 serum samples were detected by using the method, and these samples were also detected by recombinant N protein based ELISA and IDEXX ELISA kit. The result showed that the agreement ratio of the recombinant N protein based LAT with other two methods arrived at 93%, 78%, respectively. 展开更多
关键词 重组N蛋白 猪繁殖与呼吸综合征 抗体 乳胶凝集试验 PRRS 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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猪圆环病毒研究进展 被引量:14
6
作者 许立华 芦银华 +1 位作者 王玲 陈溥言 《中国病毒学》 CAS CSCD 2004年第3期288-290,共3页
关键词 猪圆环病毒 基因组结构 编码蛋白 免疫系统
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2型鸭疫里氏杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量:12
7
作者 程龙飞 施少华 +4 位作者 傅光华 李文杨 彭春香 黄瑜 陈溥言 《福建农业学报》 CAS 2006年第2期131-134,共4页
以2型鸭疫里氏杆菌裂解物作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的兔抗鸭IgG抗体为第二抗体,以TMB为显色剂,成功地建立了检测鸭血清中2型鸭疫里氏杆菌抗体的间接EL1SA方法。经检测表明该方法特异性强,敏感性比常规的试管凝集试验高320倍。... 以2型鸭疫里氏杆菌裂解物作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的兔抗鸭IgG抗体为第二抗体,以TMB为显色剂,成功地建立了检测鸭血清中2型鸭疫里氏杆菌抗体的间接EL1SA方法。经检测表明该方法特异性强,敏感性比常规的试管凝集试验高320倍。以该方法对免疫2型鸭疫里氏杆菌灭活油乳剂疫苗的试验鸭进行抗体水平的跟踪测定,发现试验鸭于免疫后7d开始产生抗体,28d达到最高峰,然后开始下降,于免疫后56d其抗体水平仍高于免疫后14d的水平。 展开更多
关键词 2型鸭疫里氏杆菌 抗体检测 间接酶联免疫吸附试验
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猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因的克隆及高效表达 被引量:5
8
作者 许立华 芦银华 +3 位作者 胡志华 苏鑫铭 苏春霞 陈溥言 《中国病毒学》 CAS CSCD 2003年第3期279-282,共4页
本试验参照GenBank公布的Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)VR2332株的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,应用RT-PCR方法扩增出了PRRSV的核衣壳蛋白基因(N基因)。在对N基因及pET32a载体双酶切后进行连接,构... 本试验参照GenBank公布的Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)VR2332株的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,应用RT-PCR方法扩增出了PRRSV的核衣壳蛋白基因(N基因)。在对N基因及pET32a载体双酶切后进行连接,构建了高效原核表达载体pETN。将pETN重组质粒转化BL21(DE3)宿主菌后,对培养条件及诱导表达条件(IPTG最佳浓度、作用时间)等影响表达的因素进行优化,实现了PRRSV核衣壳蛋白基因的高效表达。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N基因 克隆 表达 原核表达载体 核衣壳蛋白基因
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猪细小病毒VP2蛋白的主要抗原表位基因的原核表达及检测应用 被引量:10
9
作者 李斐 曹瑞兵 +5 位作者 周斌 郑其升 魏建超 李鹏 任雪枫 陈溥言 《中国病毒学》 CSCD 2005年第5期507-510,共4页
将构建好的重组质粒PET-VP2Ⅰ转化宿主菌BL21,利用IPTG(1mmol/L)诱导实现了PET-VP2Ⅰ蛋白主要抗原域VP2Ⅰ融合蛋白的高效表达。通过Western-blot检测证明表达的重组蛋白具有良好的免疫学活性。表达产物经HisBind层析柱纯化后作为诊断抗... 将构建好的重组质粒PET-VP2Ⅰ转化宿主菌BL21,利用IPTG(1mmol/L)诱导实现了PET-VP2Ⅰ蛋白主要抗原域VP2Ⅰ融合蛋白的高效表达。通过Western-blot检测证明表达的重组蛋白具有良好的免疫学活性。表达产物经HisBind层析柱纯化后作为诊断抗原初步建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法。结果表明:抗原的最佳包被浓度为3.5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶40,待检血清阳性标准初步定为OD490>0.51,且待检血清的OD490值与阴性血清的OD490值的比值大于2.1。 展开更多
关键词 猪细小病毒 VP2 蛋白的主要抗原域 原核表达 间接ELISA
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检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的重组N蛋白-ELISA的建立 被引量:3
10
作者 许立华 苏鑫铭 +3 位作者 王玲 王志亮 吴延功 陈溥言 《中国病毒学》 CAS CSCD 2004年第3期250-254,共5页
将已构建成功的重组质粒pETN转化入E.coliBL21(DE3)中,在最佳诱导条件下获得重组N蛋白。随后用His-Bind对表达产物进行纯化,对纯化效果及纯化产物的特异性分别用SDS-PAGE电泳及Western-blot试验检测。在此基础上,以纯化的重组N蛋白作为... 将已构建成功的重组质粒pETN转化入E.coliBL21(DE3)中,在最佳诱导条件下获得重组N蛋白。随后用His-Bind对表达产物进行纯化,对纯化效果及纯化产物的特异性分别用SDS-PAGE电泳及Western-blot试验检测。在此基础上,以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,对各种条件进行优化(如抗原的包被,作用时间及底物的选择),确定了判定标准,建立了检测PRRS抗体的间接ELISA方法。用此方法检测了200份血清样品,并与IDEXX公司ELISA试剂盒检测结果相比较,符合率达91%。 展开更多
关键词 重组质粒 重组N蛋白 猪繁殖与呼吸综合征抗体 间接ELISA
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猪源马链球菌兽疫亚种中国分离株类M基因特性分析 被引量:4
11
作者 范红结 陆承平 唐家琪 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期210-214,共5页
目的阐明国内不同区域猪源马链球菌兽疫亚种分离株类M基因的特性,为疫苗研制提供指导。方法利用PCR技术,扩增国内9省市从1974~2003年分离的9株马链球菌兽疫亚种类M基因,并进行克隆、测序及序列分析。结果发现7株类M基因长度为1137bp,... 目的阐明国内不同区域猪源马链球菌兽疫亚种分离株类M基因的特性,为疫苗研制提供指导。方法利用PCR技术,扩增国内9省市从1974~2003年分离的9株马链球菌兽疫亚种类M基因,并进行克隆、测序及序列分析。结果发现7株类M基因长度为1137bp,含一个阅读框,CG-74-63和CP-0104株的长度分别为1143bp及1125bp。除1株关节炎分离株CP-0104外,引致败血症的8株菌类M基因的核苷酸同源性高达95.4%~99.9%,推导的相应氨基酸序列同源性高达92.1%~100%。9株猪源菌与马源菌株及人源菌株类M基因的核苷酸同源性分别为81.6%~87.0%、81.7%~91.8%。9株猪源分离株类M蛋白信号肽、C末端细胞锚定区的序列均高度同源;除CP-0104外,其余8株高变区高度同源。结论国内不同区域猪源马链球菌兽疫亚种分离株类M基因同源性高。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种 类M基因 分析
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猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因原核表达产物的检测应用 被引量:3
12
作者 许立华 王玲 +3 位作者 吴晓东 王志亮 吴延功 陈溥言 《宁夏大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2005年第4期369-372,共4页
利用猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的原核表达产物,分别建立了检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的间接ELISA方法及乳胶凝集试验.对200份血清样品分别应用建立的间接ELISA方法和乳胶凝集试验,及由 IDEXX公司生产的ELISA检测试剂盒进... 利用猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的原核表达产物,分别建立了检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的间接ELISA方法及乳胶凝集试验.对200份血清样品分别应用建立的间接ELISA方法和乳胶凝集试验,及由 IDEXX公司生产的ELISA检测试剂盒进行抗体检测,结果显示,乳胶凝集试验及间接ELISA方法与IDEXX公司试剂盒相比,检出符合率分别达78%和91%.建立的乳胶凝集试验还需改进,而N蛋白-ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,是一种有应用前景的检测方法. 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 核衣壳蛋白基因 表达产物
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表达NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的构建 被引量:2
13
作者 苏春霞 张彦明 +2 位作者 张雪莲 徐学清 陈溥言 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第1期1-4,共4页
 将新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因1700bp克隆到真核表达载体pIRES中,构建成表达F基因的载体pIRESF,然后将包含F基因及其上游的内含子和下游的polyA的2900bpDNA片段再克隆入包含gB启动子的SK载体中,并使其克隆到gB启动子600bp...  将新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因1700bp克隆到真核表达载体pIRES中,构建成表达F基因的载体pIRESF,然后将包含F基因及其上游的内含子和下游的polyA的2900bpDNA片段再克隆入包含gB启动子的SK载体中,并使其克隆到gB启动子600bp的下游,最后将包含gB启动子和F基因表达盒3500bp克隆到包含MDVCVI988非必须片段US10的载体SK中。该研究为进一步在细胞中转染并获得表达F基因的MDVCVI988重组病毒奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 马立克氏病病毒CVI988转移质粒载体
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猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因和流感病毒HA基因的联合表达及应用 被引量:1
14
作者 许立华 苏小运 +4 位作者 王玲 苏鑫铭 任雪枫 苏春霞 陈溥言 《中国病毒学》 CAS CSCD 2003年第6期548-552,共5页
参照已公布的流感病毒血凝素基因(HA基因)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列,设计并合成一对引物P1、P2,以RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF7片段(约410bp),其中含HA基因主要核苷酸序列(33bp)。用BamH Ⅰ、Xho Ⅰ分别对扩增出的片段... 参照已公布的流感病毒血凝素基因(HA基因)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列,设计并合成一对引物P1、P2,以RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF7片段(约410bp),其中含HA基因主要核苷酸序列(33bp)。用BamH Ⅰ、Xho Ⅰ分别对扩增出的片段及pET32a质粒进行酶切,连接后构建了重组质粒pETHN并转化到BL21(DE3)宿主菌中诱导表达。用纯化后的表达产物与流感病毒血凝素单抗及乳胶建立了诊断猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的乳胶凝集试验。检测结果显示:该方法有良好的特异性及敏感性,与IDEXX公司FLISA检测试剂盒符合率达93.8%。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 Ⅳ基因 流感病毒 HA基因 联合表达 血凝素基因 乳胶凝集试验
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猪生殖与呼吸综合征血清抗体重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立 被引量:2
15
作者 刘磊 许立华 陈溥言 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期67-71,共5页
以纯化的猪生殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)重组N蛋白作为包被抗原 ,通过对各项试验条件的优化 ,建立起检测PRRS血清抗体的重组N蛋白间接ELISA检测方法。用此方法检测了2 0 0份血清样品 ,并与IDEXX公司ELISA试剂盒的检测结果相比较 ,敏感... 以纯化的猪生殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)重组N蛋白作为包被抗原 ,通过对各项试验条件的优化 ,建立起检测PRRS血清抗体的重组N蛋白间接ELISA检测方法。用此方法检测了2 0 0份血清样品 ,并与IDEXX公司ELISA试剂盒的检测结果相比较 ,敏感性和特异性分别为 93%和95 % ,总符合率达 91%。 2种检测方法的结果之间差异不显著 (P >0 .0 5 )。试验表明 ,建立的间接ELISA检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点 ,可用于PRRS血清抗体的检测。 展开更多
关键词 猪生殖与呼吸综合征 重组N蛋白 间接ELISA 抗体检测
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猪生殖与呼吸综合征病毒N基因的表达及其产物的纯化 被引量:1
16
作者 刘磊 许立华 陈溥言 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期61-65,共5页
对重组原核表达载体 pETN的表达条件进行了优化 ,在最佳诱导条件下获得了猪生殖与呼吸综合征病毒重组核衣壳蛋白 (N蛋白 )。利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行了纯化 ,再分别用SDS PAGE电泳及Western blotting试验对纯化产物... 对重组原核表达载体 pETN的表达条件进行了优化 ,在最佳诱导条件下获得了猪生殖与呼吸综合征病毒重组核衣壳蛋白 (N蛋白 )。利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行了纯化 ,再分别用SDS PAGE电泳及Western blotting试验对纯化产物的纯化效果及特异性进行了检测。结果表明 ,纯化产物的纯度可达 95 %以上 ,并具有良好的免疫学反应活性。 展开更多
关键词 猪生殖与呼吸综合征 病毒 N基因 表达 重组核衣壳蛋白 纯化
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猪圆环病毒检测方法的研究进展 被引量:4
17
作者 许立华 芦银华 +1 位作者 王玲 陈溥言 《农业科学研究》 2004年第1期73-76,共4页
综述了国内外检测猪圆环病毒的各种方法 ,包括病毒检测、病毒抗体检测等 ,便于全面了解猪圆环病毒的研究进展。
关键词 猪圆环病毒 检测方法 研究进展
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猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 被引量:2
18
作者 许立华 王玲 +1 位作者 刘华雷 陈溥言 《宁夏农学院学报》 2004年第2期71-75,共5页
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的猪的一种新传染病 ,分布广泛且对养猪业造成巨大损失 .就猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组结构、基因组编码蛋白、病毒结构蛋白的抗原性等方面的研究进展进行综述 ,为相关研究提供重要... 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的猪的一种新传染病 ,分布广泛且对养猪业造成巨大损失 .就猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组结构、基因组编码蛋白、病毒结构蛋白的抗原性等方面的研究进展进行综述 ,为相关研究提供重要依据 . 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因组 编码蛋白 抗原性
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含NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的真核表达
19
作者 苏春霞 苏鑫铭 +3 位作者 张彦明 曹瑞兵 周斌 陈溥言 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第5期59-62,共4页
为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移... 为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移质粒载体已经进入细胞DNA;转染转移质粒载体 pUS10F后的293 T细胞所表达的NDV F基因产物抗原性较好,能够与抗NDV的标准血清反应。确定的最佳转染条件为:DNA 3μg/mL,转染后48 h外源基因在细胞中的表达量最高,在6孔板和96孔板中细胞数量分别以 2×105/孔和1×101/孔的转染效果最好。 展开更多
关键词 畜禽疫病 新城疫病毒 F基因 马立克氏病病毒CVI988转移质粒载体
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病料中猪繁殖与呼吸综合症病毒的分子生物学快速检测
20
作者 许立华 苏春霞 +1 位作者 刘华雷 陈溥言 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2004年第11期48-49,共2页
猪繁殖与呼吸综合症自1987年发现至今,已在世界大多数养猪国家和地区普遍存在[1,2].该病在猪群中发生以后,表现出妊娠母猪流产、产木乃伊胎、产死胎、早产等繁殖障碍性症状,已成为危害养猪业发展的重要疫病之一.
关键词 繁殖呼吸综合症 病毒 分子生物学 快速诊断
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