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共表达口蹄疫病毒VP1-2A基因与猪IL-2重组腺病毒的构建及其免疫效果研究 被引量：3
1
作者 苏春霞 段相国 +3 位作者 郑洁 林源 郭琳 陈溥言 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期1-5,共5页
构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨... 构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨架载体pAdenoVatorΔE1/E3同源重组。重组腺病毒质粒转染HEK-293A细胞,得到重组腺病毒rAd5VP1-2A-Po IL-2。MTT法检测重组IL-2的生物活性。用rAd5VP1-2A-poIL-2免疫接种小鼠,同时设免疫单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1和空腺病毒的对照组。通过检测淋巴细胞增殖功能,特异性抗体分泌,IL-4和IFN-γ的表达水平衡量rAd5VP1-2A-poIL-2对小鼠特异性免疫应答的影响。结果显示,成功获得了rAd5VP1-2A-poIL-2,MTT法检测重组IL-2具有生物学活性。小鼠免疫试验结果显示,与rAd5VP1免疫组相比,rAd5VP1-2ApoIL-2免疫既能增强重组病毒诱导小鼠淋巴细胞增殖的能力,又能提高重组病毒诱导小鼠特异性抗体的水平。细胞因子检测结果显示,串联IL-2能促进重组病毒诱导Th1和Th2的分化。研究结果说明,rAd5VP1-2A-poIL-2可望成为口蹄疫的候选疫苗。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 重组腺病毒 VP1-2A基因 白细胞介素2
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共表达口蹄疫病毒VP1-2A与猪IFN-α的重组腺病毒增强小鼠免疫功能 被引量：1
2
作者 苏春霞 段相国 +2 位作者 曹瑞兵 郑洁 陈溥言 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1129-1132,共4页
目的构建串联表达口蹄疫病毒VP1-2A和猪干扰素-α的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法将FMDV VP1-2A基因和α干扰素基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体中,得到的阳性穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌BJ5183中进行... 目的构建串联表达口蹄疫病毒VP1-2A和猪干扰素-α的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法将FMDV VP1-2A基因和α干扰素基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体中,得到的阳性穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组。重组腺病毒质粒感染HEK293A细胞,获得重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。用rAd5VP1-2ApoIFN-α免疫BALB/c小鼠,同时设注射单独表达FMDV VP1的重组腺病毒(rAd5VP1)和空腺病毒的对照组。通过ELISA检测血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a及细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平;MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果成功构建了共表达FMDV VP-2A和IFN-α的重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。小鼠免疫实验结果显示,与单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1相比,重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能增强特异性IgG、IgG1和IgG2a的分泌,促进IL-4和IFN-γ的分泌,并能增强小鼠淋巴细胞增殖功能。结论重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能明显增强小鼠特异性免疫应答。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 重组腺病毒 VP1基因 干扰素-Α
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表达口蹄疫病毒VP1的重组腺病毒对小鼠特异性免疫的影响 被引量：2
3
作者 苏春霞 段相国 +1 位作者 黄菱 陈溥言 《宁夏医科大学学报》 2010年第9期947-949,952,共4页
目的检测表达FMDV VP1基因的重组腺病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法 6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只,将重组腺病毒rAd5VP1以腹膜内接种的方式免疫小鼠,对照组小鼠分别腹膜内接种等量的PBS和口蹄疫病毒灭活疫苗。通过测定IgG... 目的检测表达FMDV VP1基因的重组腺病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法 6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只,将重组腺病毒rAd5VP1以腹膜内接种的方式免疫小鼠,对照组小鼠分别腹膜内接种等量的PBS和口蹄疫病毒灭活疫苗。通过测定IgGI、gG1I、gG2a、淋巴细胞增殖功能I、L-4和IFN-γ的水平来衡量重组病毒的免疫效果。结果重组腺病毒免疫小鼠既能刺激小鼠淋巴细胞增殖又能诱导小鼠特异性抗体的产生,证明重组病毒具有良好的免疫原性。免疫原性略低于灭活疫苗免疫组,但明显高于PBS组。结论重组病毒刺激小鼠淋巴细胞增殖和抗体分泌的能力略低于灭活疫苗,但重组病毒诱导Th1分化的能力强于灭活疫苗。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 重组腺病毒 VP1基因
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重组白介素-2增强口蹄疫病毒多表位疫苗免疫效果研究 被引量：1
4
作者 苏春霞 段相国 陈溥言 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第12期1-4,共4页
通过研究重组白细胞介素-2(IL-2)对口蹄疫病毒(FMDV)多表位疫苗免疫效果的增强作用,为IL-2作为FMDV表位疫苗佐剂应用提供实验依据。6周龄雌性Balb/c小鼠,分为4组,第1组联合免疫表达猪IL-2的重组腺病毒(rAd5poIL-2)和串联表达FMDV多表位... 通过研究重组白细胞介素-2(IL-2)对口蹄疫病毒(FMDV)多表位疫苗免疫效果的增强作用,为IL-2作为FMDV表位疫苗佐剂应用提供实验依据。6周龄雌性Balb/c小鼠,分为4组,第1组联合免疫表达猪IL-2的重组腺病毒(rAd5poIL-2)和串联表达FMDV多表位基因的重组腺病毒(rAd5EGS),第2、3和4组分别注射rAd5EGS、灭活疫苗和PBS,间隔2周免疫1次,共免疫3次。首免后每周采血分离小鼠血清,通过ELISA检测血清中特异性IgG;首免后6周检测血清中抗体亚型IgG1、IgG2a及细胞因子IL-4和IFN-γ的表达水平,同时分离脾细胞,MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果显示,联合免疫rAd5poIL-2和rAd5EGS既能增强rAd5EGS诱导小鼠特异性IgG、IgG1和IgG2a的分泌,又能增强其诱导淋巴细胞增殖能力,且免疫效果强于灭活疫苗;细胞因子检测结果显示,联合免疫rAd5poIL-2后能增强rAd5EGS诱导小鼠IL-4和IFN-γ的分泌,且其诱导IL-4和IFN-γ分泌能力也强于灭活疫苗。说明重组IL-2能有效增强FMDV多表位疫苗诱导抗体分泌能力和细胞免疫应答,rAd5poIL-2有望作为FMDV表位疫苗的候选佐剂。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 多表位疫苗 佐剂 白细胞介素-2
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用PCR、斑点杂交及间接免疫荧光试验诊断鸡传染性贫血的初步研究 被引量：2
5
作者 孙伟 吴中勤 +2 位作者 胡青海 李树香 李刚 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期69-72,共4页
利用地高辛标记的０８５ ｋｂ 的鸡传染性贫血病毒 （ Ｃ Ａ Ｖ） 核酸探针， 对江苏某地区疑为 Ｃ Ａ Ｖ 的１５～３０日龄病鸡的肝 Ｄ Ｎ Ａ 样品进行斑点杂交。结果在被检的２０份样品中有６份为阳性，阳性率为３０％ 。对相同样... 利用地高辛标记的０８５ ｋｂ 的鸡传染性贫血病毒 （ Ｃ Ａ Ｖ） 核酸探针， 对江苏某地区疑为 Ｃ Ａ Ｖ 的１５～３０日龄病鸡的肝 Ｄ Ｎ Ａ 样品进行斑点杂交。结果在被检的２０份样品中有６份为阳性，阳性率为３０％ 。对相同样品根据已知引物（特异性扩增出 Ｃ Ａ Ｖ 的０５８ ｋｂ Ｄ Ｎ Ａ） 进行 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增， 所得结果与斑点杂交相同。对应的病鸡血清经间接免疫荧光试验 （ Ｉ Ｆ Ａ）， 有７份为 Ｃ Ａ Ｖ 抗体阳性， 与 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增结果的符合率为８３％ 。初步结果表明， 江苏某地区存在 Ｃ Ａ Ｖ 感染。 展开更多
关键词 鸡 传染性贫血 病毒 核酸探针 间接免疫荧光 PCR
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实时荧光定量PCR技术及在猪重大疫病中的诊断应用
6
作者 周斌 《猪业科学》 2011年第8期40-44,共5页
实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该技术具有操作简便、特异性强、... 实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该技术具有操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、快速高效、全封闭反应、高通量等特点。随着现代医学和分子生物学的飞速发展,该技术已在兽医诊断研究及临床应用方面发挥着越来越大的作用。文章对FQ-PCR的原理、分类以及在猪重大疫病的诊断应用进行了综述。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 猪 重大疫病 诊断
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猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究 被引量：25
7
作者 董信田 李玉峰 +3 位作者 姜平 王先炜 冯志新 俞俐莉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期639-644,共6页
猪圆环病毒2型(PCV2)经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和... 猪圆环病毒2型(PCV2)经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和二免后第14天进行ELISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,笔者进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果如下:①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,灭活时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两种油苗均能产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪的体温高于免疫猪,空白对照猪体温正常。免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两个免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著(P<0.05)。病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测表明两油苗均能够有效降低猪体的带毒。以上结果表明,PCV2灭活疫苗免疫小鼠和猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并能够在一定程度上抵抗PCV2对猪体的感染。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 油佐剂 氢氧化铝佐剂 灭活苗
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免疫刺激商品断奶仔猪复制多系统衰竭综合征(PMWS) 被引量：13
8
作者 王先炜 姜平 +4 位作者 韦显凯 李广明 李军星 董信田 蒋文明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期66-71,共6页
猪圆环病毒2型(PCV2)是引起PMWS的必需病原,与其他病原混合感染或受到外界刺激时表现PMWS临床症状。本试验将16头商品化断奶仔猪(32日龄)随机分为4组(每组4头),即对照组、钥匙孔血蓝蛋白刺激组、PCV2攻毒组和PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白... 猪圆环病毒2型(PCV2)是引起PMWS的必需病原,与其他病原混合感染或受到外界刺激时表现PMWS临床症状。本试验将16头商品化断奶仔猪(32日龄)随机分为4组(每组4头),即对照组、钥匙孔血蓝蛋白刺激组、PCV2攻毒组和PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组,用上海某猪场分离株PCV2-SH、钥匙孔血蓝蛋白(KLH)反复刺激断奶仔猪以复制PMWS。其中对照组、钥匙孔血蓝蛋白刺激组未出现症状;PCV2攻毒组症状较轻,出现增重缓慢,伴有短暂的体温升高;而PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组出现明显的临床症状,2头猪在攻毒后第11天濒临死亡,其中1头在第12天死亡,攻毒猪宰杀后脏器出现明显的病理变化。PCV2攻毒组和PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组于攻毒后第4天出现病毒血症,宰杀后肺脏、淋巴结均检测到PCV2的DNA。以上结果说明,PCV2-SH感染结合免疫刺激可以引起商品化仔猪发生PMWS,为PCV2致病机理和免疫学研究提供了动物发病模型。 展开更多
关键词 PCV2 免疫刺激 断奶仔猪 仔猪多系统衰竭综合征 复制
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串联表达PRRSV M与GP5蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究 被引量：10
9
作者 蒋文明 姜平 +3 位作者 李玉峰 汤景元 王先炜 杜以军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期555-560,共6页
利用PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的M基因,按正确的读码框与GP5基因串联,成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-M-GP5,经PCR、测序鉴定正确。PmeⅠ线性化后在BJ5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组,产生重组腺病毒DNA。重组... 利用PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的M基因,按正确的读码框与GP5基因串联,成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-M-GP5,经PCR、测序鉴定正确。PmeⅠ线性化后在BJ5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组,产生重组腺病毒DNA。重组腺病毒DNA经PacⅠ线性化后用脂质体转染HEK-293A细胞,在细胞内包装成完整的腺病毒,通过IFA可以检测到M与GP5串联的重组腺病毒构建成功,可以正确地表达目的蛋白。将构建好的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明可以诱导产生较强的体液免疫应答(ELISA抗体和中和抗体)和细胞免疫应答(淋巴细胞增殖和CTL反应)。证明该重组腺病毒具有较好的免疫原性,为下一步猪体免疫试验奠定了基础。 展开更多
关键词 PRRSV M GP5 重组腺病毒 体液免疫 细胞免疫
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PRRSV与PCV2体外共感染对猪肺泡巨噬细胞免疫学功能的影响 被引量：12
10
作者 冯志新 姜平 +1 位作者 王先炜 李玉峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期950-955,共6页
制备猪肺泡巨噬细胞,分别接种PCV2、PRRSV、PCV2+PRRSV(先接种PCV2,12h后接种PRRSV)、PRRSV+PCV2(先接种PRRSV,12h后接种PCV2)、PRRSV/PCV2(同时接种)和对照组。接种后不同时间观察细胞病变(CPE),并用real-time PCR和IFA方法检测PRRSV和... 制备猪肺泡巨噬细胞,分别接种PCV2、PRRSV、PCV2+PRRSV(先接种PCV2,12h后接种PRRSV)、PRRSV+PCV2(先接种PRRSV,12h后接种PCV2)、PRRSV/PCV2(同时接种)和对照组。接种后不同时间观察细胞病变(CPE),并用real-time PCR和IFA方法检测PRRSV和PCV2滴度,INF-α、INF-γ、TNF-α、IL-8和IL-10的mRNA。结果为:①PRRSV能在PAM中增殖,有CPE;PCV2在PAM中感染率较低,无CPE。②PRRSV对PCV2增殖无明显影响。PCV2先于或同时与PRRSV感染对PRRSV的复制具有抑制作用,而PCV2后于PPRSV感染,可促进PRRSV增殖。③PCV2单独感染PAM后能促进INF-α、INF-γ、IL-8和IL-10的大量表达,对TNF-α的表达量影响不大。④PCV2与PRRSV混合感染,尤其是PCV2后于PRRSV感染后,TNF-α、IL-8和IL-10的表达量与单感染组相比明显增加,而INF-γ的表达量明显受到抑制。实验结果表明,PCV2感染时间对PRRSV的增殖影响不同,PRRSV感染后如果再感染PCV2,可以明显促进PRRSV病毒增殖;两种病毒共同刺激了TNF-α、IL-8和IL-10的大量表达,抑制了抗病毒因子INF-γ的表达,从而可能抑制体液免疫和细胞免疫,加重了病理学免疫应答。 展开更多
关键词 PRRSV PCV2 共感染 猪肺泡巨噬细胞 免疫学功能
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口蹄疫病毒实时RT-PCR检测方法的建立 被引量：15
11
作者 李永东 张常印 +3 位作者 姜平 唐泰山 杨晓伟 杜以军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期212-215,258,共5页
目的用TaqMan技术建立了一种实时RT-PCR的方法,用于检测口蹄疫病毒,并优选出最佳检测样品。方法设计合成一套引物和TaqMan探针,通过反应条件的优化,建立实时RT-PCR的方法,以扩增口蹄疫病毒的3D基因,并用该法检测患病仔猪的气管、前肢肌... 目的用TaqMan技术建立了一种实时RT-PCR的方法,用于检测口蹄疫病毒,并优选出最佳检测样品。方法设计合成一套引物和TaqMan探针,通过反应条件的优化,建立实时RT-PCR的方法,以扩增口蹄疫病毒的3D基因,并用该法检测患病仔猪的气管、前肢肌肉、皮肤、舌、颈浅淋巴结、脾脏、喉头、食管、腹股沟淋巴结、肺脏、扁桃体、肝脏、肾脏、胸肌、心脏、鼻黏膜、后肢肌肉、脑、骨髓、软腭和血清等样品。结果(1)该方法检测FMDV下限为0.01TCID50,其敏感性比普通RT-PCR高100倍,并具有较好的特异性和重复性,(2)FMDV感染仔猪血清、淋巴结、扁桃体和肝脏中病毒含量较高是检测口蹄疫病毒很好的样品。结论建立了一种实时RT-PCR检测口蹄疫病毒的方法。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 TAQMAN 实时RT-PCR
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用聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测无包埋体对虾病毒 被引量：9
12
作者 朱山 郭福生 +2 位作者 涂小林 陆承平 吴时友 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期86-91,共6页
聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测证明，某虾场发病的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）感染无包埋体对虾病毒（ＮＯＳＶ），或称中国对虾类杆状病毒（ＰｃＢＬＶ）；野生脊尾白虾（Ｅｓｏｐａｌａｅｍｏｎｃａｒａｉｎｉｃａｕ... 聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测证明，某虾场发病的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）感染无包埋体对虾病毒（ＮＯＳＶ），或称中国对虾类杆状病毒（ＰｃＢＬＶ）；野生脊尾白虾（Ｅｓｏｐａｌａｅｍｏｎｃａｒａｉｎｉｃａｕｄａ）也感染ＮＯＳＶ，并可能经卵垂直传播；南美白对虾（（Ｐｅｎａｅｕｓｖａｎｎａｍｅｉ）亦可感染该病毒而发病。经ＰＣＲ扩增纯化的皮下及造血组织坏死症杆状病毒（ＨＨＮＢＶ）与ＮＯＳＶ的核酸结果表明，两者为同一种病毒。选取经ＰＣＲ检测的９份样品，重新编号后用ＥＬＩＳＡ法进行检测，两种方法判定的结果完全相同。将ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ双阳性的样品制备超薄切片，观察到ＮＯＳＶ感染的典型细胞病变。可以认为，在国内流行的中国对虾“暴发病”病原为ＮＯＳＶ。 展开更多
关键词 对虾 病原 无包埋体 对虾病毒 PCR ELISA
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犬瘟热病毒南京分离株的生物学特性鉴定 被引量：29
13
作者 陈培富 郭爱珍 陆承平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期231-234,共4页
从南京地区临床诊断疑似为犬瘟热的病犬脑组织分离到 1株病毒 ,经鉴定为犬瘟热病毒 ( CDV) ,命名为 CDV-NJ1 5,对其培养特性、细胞毒力、血凝活性、抗原性、结构多肽和对犬的致病性进行了研究。结果表明 ,除 Vero外 ,CDV-NJ1 5还能在 M... 从南京地区临床诊断疑似为犬瘟热的病犬脑组织分离到 1株病毒 ,经鉴定为犬瘟热病毒 ( CDV) ,命名为 CDV-NJ1 5,对其培养特性、细胞毒力、血凝活性、抗原性、结构多肽和对犬的致病性进行了研究。结果表明 ,除 Vero外 ,CDV-NJ1 5还能在 MDCK、BHK-2 1、FE、DJRK、HEp-2等细胞系有限增殖 ,产生的 CPE特征与 Vero细胞类似 ,但不能在 PK1 5细胞系增殖。在 Vero细胞的 TCID5 0 和空斑形成单位分别为 1 0 - 5 .0 /m L和2 .4× 1 0 5 PFU/m L。参考株 CDV-Onderspoort的培养特性和细胞毒力基本与之相似 ;交叉中和试验表明 ,二者之间具有交叉反应和相同的抗原性 ;二者的结构多肽 NP蛋白和 F蛋白用特异性单克隆抗体免疫转印技术分析 ,未显示差异。动物回归试验表明 ,CDV-NJ1 5对犬表现出弱致病力。以上结果提示 ,该分离株是一持续性感染的弱毒株 。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 分离株 生物学特性 致病力
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猪α干扰素对猪圆环病毒2型亚单位疫苗免疫效果的影响 被引量：13
14
作者 曹瑞兵 周国栋 陈溥言 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期867-872,共6页
为了评估酵母表达的PCV2 Cap蛋白在猪体的免疫特性以及猪α干扰素对其的免疫佐剂效果,将酵母表达的PCV2 Cap蛋白配比适量的铝胶或重组猪α干扰素制成亚单位疫苗。30日龄仔猪分别接种铝胶佐剂亚单位疫苗和猪α干扰素佐剂亚单位疫苗,同时... 为了评估酵母表达的PCV2 Cap蛋白在猪体的免疫特性以及猪α干扰素对其的免疫佐剂效果,将酵母表达的PCV2 Cap蛋白配比适量的铝胶或重组猪α干扰素制成亚单位疫苗。30日龄仔猪分别接种铝胶佐剂亚单位疫苗和猪α干扰素佐剂亚单位疫苗,同时设攻毒对照与空白对照,首免后21 d加强免疫,二免后14 d用PCV2 JS株攻毒。铝胶佐剂亚单位疫苗免疫猪体后产生了PCV2特异性中和抗体。猪α干扰素佐剂亚单位疫苗组仔猪免疫后产生的ELISA抗体和中和抗体都显著高于铝胶亚单位疫苗组仔猪。攻毒对照组的4只仔猪攻毒后全都产生了病毒血症,并有较长时间的发热;铝胶亚单位疫苗组4头仔猪中只有1头仔猪产生病毒血症,添加猪α干扰素亚单位疫苗组的仔猪攻毒后都没有产生病毒血症。综合分析试验猪的病毒感染、临床表现和生产性能等情况表明Cap蛋白亚单位疫苗具有免疫保护效果,猪α干扰素可显著增强Cap蛋白亚单位疫苗接种仔猪的体液免疫反应,提高PCV-2 Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护效果。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 重组CAP蛋白 免疫特性 猪Α干扰素 免疫佐剂
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马链球菌兽疫亚种类M基因和猪链球菌2型mrp基因片段的融合表达及仔猪免疫试验 被引量：13
15
作者 范红结 陆承平 唐家琪 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期78-81,共4页
将含猪链球菌 2型mrp及马链球菌兽疫亚种类M基因融合片段的重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,表达了相对分子质量为 6 0 0 0 0左右的融合蛋白。利用组氨酸亲和层析柱 ,获得了纯化的融合蛋白 ,质量... 将含猪链球菌 2型mrp及马链球菌兽疫亚种类M基因融合片段的重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,表达了相对分子质量为 6 0 0 0 0左右的融合蛋白。利用组氨酸亲和层析柱 ,获得了纯化的融合蛋白 ,质量浓度为 4 2 μg·mL-1。以纯化的融合蛋白、宿主菌BL 2 1经IPTG诱导表达后的超声波破碎上清、马链球菌兽疫亚种ATCC 35 2 4 6株和猪链球菌 2型HA 980 1株制备的二联灭活苗为免疫原 ,分别免疫 30头仔猪。初次免疫 1月后 ,以同样的剂量再次免疫 ,3周后以 5×LD50 的ATCC 35 2 4 6和HA 980 1强毒株进行攻击。结果 ,纯化融合蛋白免疫组的免疫保护率达 6 0 % ,BL 2 1上清免疫组的免疫保护率为 5 0 % ,全菌二联灭活菌苗的免疫保护率达 90 %。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种M基因 猪链球菌2型mrp基因 融合表达 仔猪 免疫试验 链球菌病 二联疫苗
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法氏囊提取物对小鼠免疫功能的影响 被引量：5
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作者 张德明 戴亚斌 +4 位作者 许立华 龚远鹰 杨仁全 李刚 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期70-74,共5页
ICR小鼠用伪狂犬病毒 (Pseudorabiesvirus ,PRV)灭活苗免疫 ,同时每只分别注射 0 1,0 2 5和 1mg或口服 0 2 5mg法氏囊 (bursaoffabricius ,BF)提取物 (相对分子质量小于 10 0 0 )。对各试验组小鼠器官指数、白细胞数、淋巴细胞数、... ICR小鼠用伪狂犬病毒 (Pseudorabiesvirus ,PRV)灭活苗免疫 ,同时每只分别注射 0 1,0 2 5和 1mg或口服 0 2 5mg法氏囊 (bursaoffabricius ,BF)提取物 (相对分子质量小于 10 0 0 )。对各试验组小鼠器官指数、白细胞数、淋巴细胞数、淋巴细胞非特异酯酶染色阳性数 (acidα naphthylacetatcesterase ,ANAE+ )、PRV抗体水平、脾脏组织学变化和攻毒试验结果等各种免疫学指标进行检测和比较 ,探讨法氏囊提取物对试验个体的免疫力影响。结果表明 :中等剂量 (每只0 2 5mg)的法氏囊提取物能够不同程度地提高小鼠的体液免疫力和细胞免疫力 ,注射途径较口服的好 ;而高剂量 (每只1mg)的法氏囊提取物可提高小鼠的体液免疫 ,但对机体的细胞免疫却有抑制作用。法氏囊提取物对小鼠免疫功能的影响与接种的剂量、途径及时间有关。 展开更多
关键词 免疫功能 法氏囊提取物 剂量 接种途径 接种时间 免疫力
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山羊痘暴发流行的诊断 被引量：15
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作者 郭爱珍 姚火春 +2 位作者 唐泰山 陆承平 张振岚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第9期14-15,共2页
关键词 羊痘病毒 山羊痘 暴发 流行 诊断
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传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白基因及其表达产物免疫学试验 被引量：6
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作者 姜平 陈溥言 +1 位作者 蔡宝祥 黄兵 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期100-103,共4页
用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡，免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价，并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示... 用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡，免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价，并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示：（１）ＶＰ２基因重组质粒ＤＮＡ除可诱导产生较高的ＥＬＩＳＡ抗体外，还可明显降低仔鸡ＩＢＤＶ攻击所引起的急性发病率和死亡率；（２）ＶＰ３－ＧＳＴ融合蛋白表达产物全菌裂解液可较早地诱导产生ＥＬＩＳＡ抗体，但对ＩＢＤＶ野毒株攻击只提供部分保护；（３）ＶＰ２和ＶＰ３表达产物无明显协同作用。 展开更多
关键词 结构蛋白基因 表达产物 免疫学试验 鸡病 IBD
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FMDV VP1基因与HSP70基因在毕赤酵母中的融合表达及免疫特性 被引量：5
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作者 苏春霞 段相国 +4 位作者 王秀青 任雪枫 曹瑞兵 周斌 陈溥言 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期733-736,共4页
利用毕赤酵母系统对O型口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因进行融合表达,并检测此融合蛋白对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响。将人工合成的O型口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因克隆入酵母表达载体pPICZαA中,以电穿孔法转化酵母... 利用毕赤酵母系统对O型口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因进行融合表达,并检测此融合蛋白对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响。将人工合成的O型口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因克隆入酵母表达载体pPICZαA中,以电穿孔法转化酵母菌X-33,用Zeocin+YPDS平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物。以皮下接种的方式给小鼠进行3次免疫,同时设两组对照,分别免疫PBS和常规灭活疫苗,然后通过MTT法和ELISA分别检测淋巴细胞的增殖情况和抗体水平。结果表明融合蛋白既能诱导细胞免疫应答又能诱导体液免疫应答,其诱导产生的抗体水平略低于常规灭活疫苗,而细胞免疫水平则高于后者。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 VP1基因 HSP70 毕赤酵母 融合表达
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表达猪流行性腹泻病毒S基因片段重组腺病毒的构建与免疫特性 被引量：13
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作者 韦显凯 侯继波 姜平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1128-1132,共5页
利用RT-PCR、同源重组等技术构建了含有猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因上3个片段的重组腺病毒质粒pAd-S498～638,pAd-S1～638,pAd-S498～1384,经PacI酶切后转染HEK-293A细胞,3次噬斑纯化分别获得了重组腺病毒rAd-S498～638,rAd-S1～638,rA... 利用RT-PCR、同源重组等技术构建了含有猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因上3个片段的重组腺病毒质粒pAd-S498～638,pAd-S1～638,pAd-S498～1384,经PacI酶切后转染HEK-293A细胞,3次噬斑纯化分别获得了重组腺病毒rAd-S498～638,rAd-S1～638,rAd-S498～1384。重组腺病毒于HEK-293A细胞连续传代至20代效价稳定,TCID50分别为每毫升10-6.29、10-5.75、10-6.5。应用猪流行性腹泻病毒阳性血清进行间接免疫荧光抗体试验,在3个腺病毒感染的HEK-293A细胞的胞质见有清晰荧光。将3个重组腺病毒分别免疫小鼠,结果均诱导产生较强的体液免疫应答。结果表明这3个重组腺病毒对S基因的3个片段均可成功表达,并具有较好的免疫原性,为PEDV重组腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 重组腺病毒 S基因 免疫原性
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