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题名人源性RPL22基因的原核表达与纯化及功能分析
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作者
田甜
张星娟
杨明夏
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机构
南京医科大学第三附属医院(常州市第二人民医院)呼吸科
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出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2024年第10期1785-1793,共9页
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基金
国家自然科学基金项目(编号:81472199)。
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文摘
目的了解人类核糖体蛋白L22(RPL22)基因的生物信息学,原核表达与纯化人类RPL22重组蛋白,在体外合成人类RPL22(标记为试剂M),研究试剂M对NSCLC A549细胞增殖、周期、凋亡的影响,分析试剂M和顺铂(DDP)联合进行化疗的效果。方法分析RPL22生物信息学。PCR克隆RPL22基因,进行单链寡核苷酸的设计及合成,获得目的基因后连接pET-28α载体,构建pET-28α-RPL22重组质粒,转化大肠埃希菌感受态细胞DH 5α,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot分析重组蛋白RPL22的表达情况。CCK-8检测试剂M和DDP在A549细胞中的半抑制率(IC_(50))以及试剂M对A549细胞增殖的影响;流式细胞术检测试剂M对A549细胞凋亡、周期的影响;qPCR、Western blot检测试剂M和DDP分别对磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、腺苷5′-单磷酸激活蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)信号通路的影响。结果RPL22蛋白为不稳定亲水性蛋白质。诱导表达的重组蛋白经溶解纯化后获得了高浓度重组蛋白。在A549细胞中,试剂M的IC_(50)为400μg/L,DDP的IC_(50)为10μmol/L,试剂M抑制细胞增殖,其浓度与细胞活性成反比;试剂M(200μg/L)与DDP(2.5μmol/L)联合运用时,效果与单独使用10μmol/L DDP抑制增殖比相似;试剂M能诱导G 2细胞周期停止、促进细胞凋亡,且可能参与PI3K/AKT、AMPK/mTOR通路的调节。结论该研究首次克隆得到人类RPL22重组蛋白,使其成功纯化表达。
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关键词
核糖体蛋白L22
非小细胞肺癌
生物信息学分析
原核表达与纯化
功能分析
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Keywords
ribosomal protein L22
non-small cell lung cancer
bioinformatic analysis
prokaryotic expression and purification
functional analysis
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分类号
R56
[医药卫生—呼吸系统]
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