微生物学科研创新型人才培养的实践与探索 被引量：8

1

作者 李明春 牛淑敏 +2 位作者 严冰 刁虎欣 刘方 《高校生物学教学研究（电子版）》 2012年第2期26-29,共4页

"微生物学"课程作为高等教育生命科学教学中的一门重要的基础课程,如何将科研创新思想贯穿于微生物学教学中,使该课程成为培养科研创新型人才的平台是我们一直思考和探索的课题。坚持"将科研引入教学,以科研带动教学&qu... "微生物学"课程作为高等教育生命科学教学中的一门重要的基础课程,如何将科研创新思想贯穿于微生物学教学中,使该课程成为培养科研创新型人才的平台是我们一直思考和探索的课题。坚持"将科研引入教学,以科研带动教学"的理念,使我们认识到紧跟学科发展不断更新教学内容是培养创新型人才的保障、基础理论知识和科学研究的有机结合是培养创新型人才的途径、激发科学研究的兴趣是培养创新型人才的动力、实验技能的训练是培养创新型人才的基石。通过多年实践取得了积极的教学结果,为培养拔尖创新型人才的中长期教育和发展规划提供了有益的探索。 展开更多

关键词 微生物学 实践探索 科研创新型人才

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海藻糖合酶的分子生物学研究进展 被引量：10

2

作者 朱玥明 张峻 +1 位作者 邢来君 李明春 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期6-12,共7页

海藻糖合酶能够将麦芽糖转化为海藻糖,在海藻糖的工业生产中具有十分重要的意义。本文从海藻糖合酶的基因克隆、基因工程应用、结构和催化机制的研究以及其在微生物体内的功能等方面讨论了海藻糖合酶的研究进展。

关键词 海藻糖 海藻糖合酶 α-淀粉酶家族 催化机制 C端结构域 代谢途径

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一种改进的丝状真菌DNA提取方法 被引量：94

3

作者 张颖慧 魏东盛 +1 位作者 邢来君 李明春 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期466-469,共4页

以丝状真菌雅致枝霉(Thamnidium elegans)和深黄伞形霉(Umbelopsis isabellina)为材料,使用优化的CTAB法提取基因组DNA。改进后的方法使用液氮冻融以及玻璃珠振荡的方法代替了传统的液氮研磨,所需菌体量少,而得到的基因组DNA比用传统的C... 以丝状真菌雅致枝霉(Thamnidium elegans)和深黄伞形霉(Umbelopsis isabellina)为材料,使用优化的CTAB法提取基因组DNA。改进后的方法使用液氮冻融以及玻璃珠振荡的方法代替了传统的液氮研磨,所需菌体量少,而得到的基因组DNA比用传统的CTAB法得到的基因组DNA产率高、纯度好、且步骤简单,适用于一次微量提取多个样品的基因组DNA。这种方法得到的基因组DNA可用于大部分分子生物学基本实验如PCR和DNA的酶切等。 展开更多

关键词 DNA提取 CTAB 玻璃珠 液氮冻融

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红色亚栖热菌海藻糖合酶在大肠杆菌中的表达及其酶学性质分析 被引量：1

4

作者 王文文 张峻 +5 位作者 王宇凡 朱玥明 张娟 刘艳超 邢来君 李明春 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期90-97,共8页

利用前期克隆得到的红色亚栖热菌CBS-01(Meiothermus ruber CBS-01)的海藻糖合酶基因(TreS),构建天然蛋白异源宿主表达载体并在大肠杆菌中获得较高的表达量.经纯化后测定该酶在pH 6.5,反应温度为50℃时活性最高.酶学性质的研究表明,Tre... 利用前期克隆得到的红色亚栖热菌CBS-01(Meiothermus ruber CBS-01)的海藻糖合酶基因(TreS),构建天然蛋白异源宿主表达载体并在大肠杆菌中获得较高的表达量.经纯化后测定该酶在pH 6.5,反应温度为50℃时活性最高.酶学性质的研究表明,TreS的最适底物为麦芽糖,其对麦芽糖的转化效率约是海藻糖的2.5倍;该酶在30～60℃、pH 3.5～9.0范围内都保留较高的酶活;2 mmol/L的一价阳离子Na^+、K^+对TreS有激活作用;低温有利于反应向海藻糖方向进行,并能减少葡萄糖副产物的生成;20℃时,几乎没有葡萄糖生成,麦芽糖至海藻糖的转化率可达65%.为工业化大规模生产海藻糖奠定了理论基础. 展开更多

关键词 红色亚栖热菌 海藻糖合酶(TreS) 表达 酶学性质

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利用定点突变分析白念珠菌依赖铁基因FRP1启动子元件 被引量：1

5

作者 桂磊 梁勇 +3 位作者 魏东盛 郑雯 邢来君 李明春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1348-1353,共6页

通过对白念珠菌高铁还原酶基因FRP1启动子进行突变分析,确认启动子中特殊调控元件。我们通过分析FRP1起始密码子上游1000bp序列发现在-160和-650处有2个推测的Rim101p结合位点,对其分别进行定点突变,然后构建启动子与报告基因LacZ融合质... 通过对白念珠菌高铁还原酶基因FRP1启动子进行突变分析,确认启动子中特殊调控元件。我们通过分析FRP1起始密码子上游1000bp序列发现在-160和-650处有2个推测的Rim101p结合位点,对其分别进行定点突变,然后构建启动子与报告基因LacZ融合质粒,转化整合到白念珠菌rim101-/-株和野生株中,检测不同缺铁条件下β-半乳糖苷酶活性。结果发现碱性条件,Rim101p能够正向调控FRP1的表达;启动子-160处突变对启动子功能影响较弱,而-650突变使启动子活性大大降低,此结果和双突变的结果相同,表明Rim101p主要通过与启动子-650处结合位点相互作用来调控FRP1的表达。 展开更多

关键词 定点突变 白念珠菌 Rim101蛋白 高铁还原酶基因

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白念珠菌pH应答转录因子Rim101p在大肠杆菌中的表达 被引量：1

6

作者 桂磊 郑雯 +1 位作者 邢来君 李明春 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期96-100,共5页

Rim101蛋白是白念珠菌中pH应答反应的重要转录因子.为进一步研究Rim101p的功能,采用PCR方法获得RIM101基因序列,并将其克隆入表达载体pET-21a,转化大肠杆菌表达菌BL21,通过摸索诱导条件使Rim101p在大肠杆菌中成功表达.EMSA实验结果进一... Rim101蛋白是白念珠菌中pH应答反应的重要转录因子.为进一步研究Rim101p的功能,采用PCR方法获得RIM101基因序列,并将其克隆入表达载体pET-21a,转化大肠杆菌表达菌BL21,通过摸索诱导条件使Rim101p在大肠杆菌中成功表达.EMSA实验结果进一步验证了重组Rim101p的活性. 展开更多

关键词 白念珠菌 Rim101p EMSA

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毕赤酵母Δ^9-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达

7

作者 张昕欣 魏东盛 +2 位作者 张飙 邢来君 李明春 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期28-33,共6页

根据真菌Δ9-脂肪酸脱氢酶保守的氨基酸序列设计简并引物进行PCR,获得一个741 bp的毕赤酵母cDNA片段,再根据获得的部分序列设计基因特异性引物,通过cDNA末端扩增技术(RACE)获得该cDNA的3′和5′序列,从而得到全长为1 689 bp的cDNA序列.... 根据真菌Δ9-脂肪酸脱氢酶保守的氨基酸序列设计简并引物进行PCR,获得一个741 bp的毕赤酵母cDNA片段,再根据获得的部分序列设计基因特异性引物,通过cDNA末端扩增技术(RACE)获得该cDNA的3′和5′序列,从而得到全长为1 689 bp的cDNA序列.序列分析结果表明,该序列具有一个长度为1 194 b p、编码397个氨基酸的开放阅读框(PPD9).与报道的Δ9-脂肪酸脱氢酶一样,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区和疏水结构,在其氨基酸序列的C-末端具有类似于细胞色素b5的血红素结合区.该序列为一个新的编码Δ9-脂肪酸脱氢酶的基因,为了验证其功能,把开放阅读框序列PPD9亚克隆到表达载体pYES 2.0,构建重组表达载体pYPPD9,并转化到酿酒酵母的Δ9-脂肪酸脱氢酶缺陷型菌株DTY-11A中进行表达。通过平板互补实验结果表明,该序列在酿酒酵母中获得表达。所编码的蛋白具有Δ9-脂肪酸脱氢酶活性,能弥补DTY-11A中由于Δ9-脂肪酸脱氢酶的缺失而引起的致死性突变。 展开更多

关键词 毕赤酵母 Δ9-脂肪酸脱氢酶 cDNA末端扩增 酿酒酵母 表达

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高山被孢霉Δ~6-脂肪酸延长酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达

8

作者 兰昊 欧秀元 +4 位作者 黎明 于爱群 石桐磊 邢来君 李明春 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期100-106,共7页

长链多不饱和脂肪酸花生四烯酸(ARA,C20:4n-6)是合成生物活性物质类二十碳烷酸的初级底物神经组织的重要组成成分.Δ6-脂肪酸延长酶是花生四烯酸Δ6-合成途径的关键酶之一.根据已经报道的Δ6-脂酸延长酶基因序列设计引物,分别从产花生... 长链多不饱和脂肪酸花生四烯酸(ARA,C20:4n-6)是合成生物活性物质类二十碳烷酸的初级底物神经组织的重要组成成分.Δ6-脂肪酸延长酶是花生四烯酸Δ6-合成途径的关键酶之一.根据已经报道的Δ6-脂酸延长酶基因序列设计引物,分别从产花生四烯酸的丝状真菌高山被孢霉ATCC16266菌株基因组和cDNA扩增得到该序列.经序列分析后,将来源于cDNA的序列连接到毕赤酵母表达载体pPIC3.5K上,得到重组质PIC3.5K-ELO.用电击转化法将重组载体pPIC3.5K-ELO转化到巴斯德毕赤酵母GS115中,在缺省培养基筛选得到毕赤酵母转化菌株pPIC3.5K-ELO.在适宜的培养条件下,添加外源底物γ-亚麻酸(GLA)和诱导物醇诱导基因表达.气相色谱分析表明该基因在毕赤酵母中得到了表达,底物GLA转化为二高γ-亚麻酸GLA),转化效率为28.91%.对Δ6-脂肪酸延长酶进行跨膜分析,表明该蛋白为具有7个跨膜域的膜结合蛋白. 展开更多

关键词 高山被孢霉 多不饱和脂肪酸 Δ6-脂肪酸延长酶 巴斯德毕赤酵母

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白念珠菌钙稳态系统及钙信号途径的研究进展 被引量：2

9

作者 喻其林 徐宁 李明春 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期422-428,共7页

白念珠菌是临床重要的条件致病菌,其胞内的钙稳态及钙信号途径与宿主侵染、压力应答等诸多生理过程紧密相关。研究该菌的钙稳态系统及钙信号调控网络,对明确白念珠菌的侵染机制与耐药机理,以及开发具有新靶点的抗真菌药物具有重要意义... 白念珠菌是临床重要的条件致病菌,其胞内的钙稳态及钙信号途径与宿主侵染、压力应答等诸多生理过程紧密相关。研究该菌的钙稳态系统及钙信号调控网络,对明确白念珠菌的侵染机制与耐药机理,以及开发具有新靶点的抗真菌药物具有重要意义。本文对这些内容的研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 白念珠菌 钙稳态 钙信号途径 压力应答

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根癌农杆菌介导的日本曲霉转化体系的建立 被引量：9

10

作者 郭慧 杨哲 +1 位作者 邢来君 李明春 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期115-121,共7页

【目的】通过根癌农杆菌介导的方法构建日本曲霉转化子库,从而筛选出高产甘没氧化酶的日本曲霉突变菌株。【方法】本文通过三亲杂交的方法将双元载体pBI-hphII转移至根癌农杆菌EHA105中并作为侵染菌株,以日本曲霉As5999为受体菌株,建立... 【目的】通过根癌农杆菌介导的方法构建日本曲霉转化子库,从而筛选出高产甘没氧化酶的日本曲霉突变菌株。【方法】本文通过三亲杂交的方法将双元载体pBI-hphII转移至根癌农杆菌EHA105中并作为侵染菌株,以日本曲霉As5999为受体菌株,建立了农杆菌介导的日本曲霉转化体系,构建了突变体库,并对影响转化效率的根癌农杆菌浓度,乙酰丁香酮(As)加入与否,共培养时间,共培养温度等因素进行了分析。【结果】对转化子的PCR检测和Southern杂交分析表明,T-DNA已整合进日本曲霉基因组中,随机挑选的9个转化子连续转接10代后均能稳定遗传。【结论】该转化体系的建立为筛选出高产甘油氧化酶的日本曲霉突变菌株奠定了基础。 展开更多

关键词 日本曲霉 根癌农杆菌 转化体系

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分段DNA shuffling:一种大分子海藻糖合酶有效的定向进化方法 被引量：2

11

作者 刘艳超 王宇凡 +4 位作者 钱柯帆 张峻 肖辰鹏 邢来君 李明春 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期362-372,共11页

【目的】红色亚栖热菌(Meiothermus ruber)海藻糖合酶(Trehalose synthase,M-TreS)将麦芽糖转化生成海藻糖只需一步反应,且具有很好的热稳定性及pH耐受性,是潜在的工业生产海藻糖的酶源。为了提高该酶的性能,有必要对其进行定向进化。... 【目的】红色亚栖热菌(Meiothermus ruber)海藻糖合酶(Trehalose synthase,M-TreS)将麦芽糖转化生成海藻糖只需一步反应,且具有很好的热稳定性及pH耐受性,是潜在的工业生产海藻糖的酶源。为了提高该酶的性能,有必要对其进行定向进化。【方法】M-TreS基因(M-treS)大小为2 889 bp。该蛋白质分子本身具有很大的进化空间,但是却不宜进行全长基因Shuffling。分段DNA shuffling是为大分子蛋白质(基因≥2 000 bp)的进化而设计的一种方法。该方法分为三步:(1)用两对引物分别扩增目的基因的上游片段和下游片段;(2)上下游片段各自进行Shuffling;(3)利用重叠延伸PCR连接上下游突变群,建立完整基因的突变文库。【结果】结合易错PCR,通过该方法经一轮进化获得一株酶活力是野生型1.6倍、催化效率是野生型2倍的突变株。序列分析表明,该突变株共有6个位点发生了氨基酸的替代,其中一个来自易错突变,2个来自同源重组,3个为随机突变。【结论】分段DNA shuffling是进化大分子蛋白质的有效方法。 展开更多

关键词 红色亚栖热菌 海藻糖合酶 定向进化 易错PCR 分段DNA SHUFFLING

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白念珠菌胞内铁离子存储转运系统的研究进展 被引量：2

12

作者 钱柯帆 董义杰 +3 位作者 徐宁 喻其林 邢来君 李明春 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1643-1648,共6页

白念珠菌是一种常见的条件致病性真菌。为了在宿主体内复杂的铁离子微环境中定居、生长和繁殖,该菌在长期的进化过程中演化出一系列复杂的铁离子稳态调控网络,包括位于细胞膜表面的铁离子吸收系统和位于细胞内的铁离子储存、转运及利用... 白念珠菌是一种常见的条件致病性真菌。为了在宿主体内复杂的铁离子微环境中定居、生长和繁殖,该菌在长期的进化过程中演化出一系列复杂的铁离子稳态调控网络,包括位于细胞膜表面的铁离子吸收系统和位于细胞内的铁离子储存、转运及利用系统。本文结合课题组研究工作,简要综述近几年关于铁离子吸收、储存及转运机制的研究进展,主要关注细胞内铁离子的储存、转运,尤其是线粒体在胞内铁离子代谢及稳态维持方面的作用。 展开更多

关键词 白念珠菌 胞内铁离子稳态 线粒体

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白念珠菌的铁吸收系统及其调控

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作者 桂磊 魏东盛 +1 位作者 邢来君 李明春 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1055-1058,共4页

白念珠菌（Candida albicans）是常见的条件致病性病原体，广泛存在于人体的口咽部、胃肠道和泌尿生殖道。在人体免疫力低下时白念珠菌就会大量繁殖发展为菌丝型，侵犯组织，引起临床症状，主要表现为黏膜感染，也可通过血液散播侵犯内... 白念珠菌（Candida albicans）是常见的条件致病性病原体，广泛存在于人体的口咽部、胃肠道和泌尿生殖道。在人体免疫力低下时白念珠菌就会大量繁殖发展为菌丝型，侵犯组织，引起临床症状，主要表现为黏膜感染，也可通过血液散播侵犯内脏器官引起多种器官的感染，如支气管和肺念珠菌病、泌尿道念珠菌病、念珠菌性脑膜炎等。许多艾滋病患者、移植患者和化疗患者的死亡往往是由于并发白念珠菌病。目前主要抗白念珠菌的药物有两性霉素B和唑类衍生物，然而这些抗真菌药物存在毒性问题和药物耐药性问题，特别对于像慢性感染的艾滋病患者，耐药性问题更为严重，因此，了解白念珠菌的致病机制，以期研发新的药物用于医治这种病原引发的疾病。 展开更多

关键词 白念珠菌病 吸收系统 药物耐药性 致病性病原体 念珠菌性脑膜炎 肺念珠菌病 艾滋病患者 调控

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苏云金芽胞杆菌几丁质酶B特性及其杀虫抑真菌的作用 被引量：16

14

作者 刘东 陈月华 +2 位作者 蔡峻 肖亮 刘传 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期180-185,共6页

【目的】本文对苏云金芽胞杆菌科默尔亚种15A3菌株(Bacillus thuringensis subsp.colmeri 15A3,简称Bt 15A3)几丁质酶B(chitinase B,简称ChiB)的特性及其杀虫抑真菌作用作了初步研究。【方法】将大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的Bt 1... 【目的】本文对苏云金芽胞杆菌科默尔亚种15A3菌株(Bacillus thuringensis subsp.colmeri 15A3,简称Bt 15A3)几丁质酶B(chitinase B,简称ChiB)的特性及其杀虫抑真菌作用作了初步研究。【方法】将大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的Bt 15A3菌株的ChiB,经过硫酸铵沉淀、透析、Sephadex G-200凝胶层析,最终得到初步纯化的几丁质酶。利用酶谱方法确定分子量,并且对2种分子量的酶蛋白进行了质谱鉴定。对各种金属离子对ChiB酶活的影响、最适反应温度及pH、温度及pH稳定性等理化特性进行研究,并且测定了ChiB抑制真菌孢子萌发的活性和对甜菜夜蛾和棉铃虫的杀虫增效作用。【结果】ChiB分子量约为70kDa。同时证明检测到的64kDa蛋白为70kDa蛋白C端的降解产物。ChiB最适作用温度为60℃,最适pH值为5,在温度20℃～60℃和pH4～8的范围内均有良好的稳定性。供试金属离子中Fe3+对ChiB的酶活有促进作用,Zn2+,Ag+有抑制作用。ChiB可抑制产黄青霉等真菌孢子的萌发,半抑制浓度(median effective inhibitory concentration,IC50)约为4μg/mL。该酶可以分别降低Bt晶体蛋白对甜菜夜蛾和棉铃虫的半致死浓度(median lethal concentration,LC50)26%和30%。【结论】Bt科默尔亚种的几丁质酶不但具有较稳定的理化性质,而且具有抑制真菌生长及明显的杀虫增效作用。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 ChiB 特性 抑真菌 杀虫增效

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地衣芽孢杆菌MY75菌株几丁质酶基因的异源表达及特性 被引量：5

15

作者 肖亮 刘传 +3 位作者 谢池楚 蔡峻 刘东 陈月华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期749-754,共6页

【目的】地衣芽孢杆菌MY75菌株的几丁质酶基因的异源表达,并对表达蛋白的特性进行研究。【方法】制备MY75菌株培养上清粗蛋白,利用酶谱分析确定具有几丁质酶活的蛋白分子量。将该蛋白进行飞行时间质谱分析,确定其部分氨基酸序列,设计PC... 【目的】地衣芽孢杆菌MY75菌株的几丁质酶基因的异源表达,并对表达蛋白的特性进行研究。【方法】制备MY75菌株培养上清粗蛋白,利用酶谱分析确定具有几丁质酶活的蛋白分子量。将该蛋白进行飞行时间质谱分析,确定其部分氨基酸序列,设计PCR引物对MY75菌株的几丁质酶基因进行克隆及异源表达。对表达蛋白的最适反应温度及pH,温度耐受性及金属离子对酶活力的影响等特性进行了研究,并测定了表达蛋白对真菌孢子萌发的抑制活性和对甜菜夜蛾幼虫的杀虫增效作用。【结果】酶谱分析证明MY75菌株培养上清液中仅含有一种55kDa的几丁质酶。将该编码基因chiMY克隆及序列分析后发现,基因长度为1797bp,编码599个氨基酸。在大肠杆菌中异源表达的几丁质酶ChiMY蛋白的分子量为67kDa。质谱分析证明,55kDa蛋白与67kDa蛋白序列相同。ChiMY最适pH和最适温度分别为7.0和50°C,为中性几丁质酶。Li+,Na+,和Mg2+离子对表达蛋白的酶活力具有促进作用,Mn2+,Cr3+,Zn2+和Ag+离子则能显著抑制酶活力,Cu2+和Fe3+离子完全抑制酶活性。生物测定的结果显示,异源表达的MY75几丁质酶能够抑制小麦赤霉及黑曲霉的孢子萌发,并且对苏云金芽孢杆菌的杀虫活力具有增效作用。【结论】地衣芽孢杆菌MY75菌株中仅有一种55kDa几丁质酶,其编码基因能够在大肠杆菌中大量表达,表达蛋白分子量与野生型蛋白之间有显著差异,由此证明MY75菌株中存在着几丁质酶的剪切加工过程。明确了地衣芽孢杆菌几丁质酶ChiMY具有抑制真菌活性及杀虫增效作用。上述全部研究结论在国内首次报道。 展开更多

关键词 地衣芽孢杆菌 几丁质酶 质谱 特性 抑真菌 杀虫增效

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低温和外源不饱和脂肪酸对高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因表达的影响 被引量：4

16

作者 于爱群 石桐磊 +2 位作者 张飙 邢来君 李明春 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1369-1377,共9页

【目的】在转录水平上研究低温和外源不饱和脂肪酸对于高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因的表达调控机制。【方法】通过实时定量PCR技术和启动子报告基因融合载体的方法,研究低温和外源不饱和脂肪酸对于高山被孢霉3种脂肪酸脱氢酶基因表达随... 【目的】在转录水平上研究低温和外源不饱和脂肪酸对于高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因的表达调控机制。【方法】通过实时定量PCR技术和启动子报告基因融合载体的方法,研究低温和外源不饱和脂肪酸对于高山被孢霉3种脂肪酸脱氢酶基因表达随时间进程的影响。【结果】实时定量PCR的结果表明:低温对于3种脂肪酸脱氢酶基因的转录具有激活作用,外源不饱和脂肪酸对基因转录起抑制作用,而且这两种作用都是快速响应的,随时间延长逐渐减弱并消失。脂肪酸组成测定结果证明了基因转录水平变化与对应产物变化之间没有相关性。低温能够在短时间内诱导pFAD6启动子活性增加,并随时间延长而持续增强;外源不饱和脂肪酸对pFAD6启动子活性起抑制作用,其不饱和度和浓度越高,抑制作用越强,而且抑制作用是快速且持续的。【结论】低温和外源不饱和脂肪酸除了在转录水平上调控高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因表达发生变化之外,可能主要在转录后水平上介导了胞内脂肪酸组成的变化。而且,脂肪酸脱氢酶基因的表达可能受到胞内脂肪酸组成变化的反馈调节作用。本文首次在转录水平上对高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因的表达调控机制进行了探索,为深入了解脂肪酸脱氢酶基因表达及多不饱和脂肪酸合成对外界信号的应答机制提供了有用信息,也对应用微生物发酵和转基因技术生产不饱和脂肪酸具有指导意义。 展开更多

关键词 低温 不饱和脂肪酸 脂肪酸脱氢酶 实时定量PCR 启动子

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白念珠菌高铁还原酶FRP1基因的功能 被引量：4

17

作者 梁勇 郑雯 +2 位作者 魏东盛 邢来君 李明春 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期337-342,共6页

白念珠菌(Candida albicans)获得铁的能力影响细胞的生长和毒力,高铁还原酶是白念珠菌高亲和铁吸收系统的重要组成部分。【目的】构建高铁还原酶FRP1(Ferric reductase protein)基因缺失突变株,对FRP1基因功能进行初步研究。【方法】使... 白念珠菌(Candida albicans)获得铁的能力影响细胞的生长和毒力,高铁还原酶是白念珠菌高亲和铁吸收系统的重要组成部分。【目的】构建高铁还原酶FRP1(Ferric reductase protein)基因缺失突变株,对FRP1基因功能进行初步研究。【方法】使用Northern杂交的方法分析FRP1基因在缺铁和富铁条件下的表达。利用PCR介导的基因敲除技术构建frp1缺失突变株,并且对野生型和缺失突变株在细胞高铁还原酶活性以及缺铁条件下的生长情况进行比较分析。【结果】缺铁条件可以诱导FRP1基因的表达。frp1缺失突变株不能在铁缺陷的固体培养基上生长。【结论】FRP1蛋白可能是白念珠菌在缺铁条件下起主要作用的高铁还原酶。 展开更多

关键词 白念珠菌 高铁还原酶 FRP1基因

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CCH1或MID1基因缺失对白念珠菌药物耐受性及致病性的影响 被引量：3

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作者 王慧 芦广庆 +6 位作者 杨宝鹏 王帆 喻其林 徐宁 程欣欣 邢来君 李明春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期726-736,共11页

CCH1和MID1基因编码的钙闸门是外源钙进入细胞内的重要通道,Ca2+作为细胞内重要的第2信使分子,其浓度的升高可激活相应的途径参与各种细胞反应过程。该研究将利用钙通路CCH1和MID1基因的单缺失菌株,并构建其相应的回补菌株,研究CCH1或M... CCH1和MID1基因编码的钙闸门是外源钙进入细胞内的重要通道,Ca2+作为细胞内重要的第2信使分子,其浓度的升高可激活相应的途径参与各种细胞反应过程。该研究将利用钙通路CCH1和MID1基因的单缺失菌株,并构建其相应的回补菌株,研究CCH1或MID1基因缺失后对白念珠菌药物耐受性和致病性的影响作用。通过药物平板敏感性试验和微量液基稀释法比较不同菌株对唑类药物敏感性的变化,进一步添加钙通道阻滞剂和钙离子螯合剂来分析钙离子浓度变化对药物作用的影响,结果发现CCH1或MID1基因的缺失明显对氟康唑和伊曲康唑表现出敏感性,且药物作用受到钙离子浓度变化的调节。最后建立小鼠感染模型分析不同菌株的毒力变化差异,确定CCH1或MID1基因的缺失显著减弱了白念珠菌的致病性。 展开更多

关键词 白念珠菌 CCH1 MID1 药物耐受性 致病性

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利用定点突变分析海藻糖合酶的功能 被引量：4

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作者 王宇凡 朱玥明 +3 位作者 魏东盛 张峻 邢来君 李明春 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期658-665,共8页

我们通过对来自红色亚栖热菌(Meiothermus ruber)CBS-01中的海藻糖合酶(Trehalose synthase)序列比对及三维模型构建,我们构建了D200G/H165R,R227C,R392A三个定点突变体,检测其对麦芽糖及海藻糖的转化能力。结果发现:在50°C时,D200... 我们通过对来自红色亚栖热菌(Meiothermus ruber)CBS-01中的海藻糖合酶(Trehalose synthase)序列比对及三维模型构建,我们构建了D200G/H165R,R227C,R392A三个定点突变体,检测其对麦芽糖及海藻糖的转化能力。结果发现:在50°C时,D200G/H165R、R392A基本失去其原有活性,而R227C产生海藻糖的能力降低。37°C时,D200G/H165R失去转化能力,而R392A及R227C保有部分能力。因此我们推测,R392位点可能是维持酶的结构及热稳定性的关键位点,而D200位点在反应过程中也起重要作用。 展开更多

关键词 海藻糖合酶 定点突变 序列比对 三维模型构建

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碱性pH条件下白念珠菌钙离子通道CCH1和MID1基因对钙内流的影响及Crz1p转录因子对其的调控作用 被引量：2

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作者 王慧 徐宁 +2 位作者 邢来君 李明春 魏东盛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期917-925,共9页

白念珠菌Candida albicans对环境pH的适应能力与其致病性有密切关系,钙信号转导途径介导许多环境压力的应答并伴随胞内钙离子浓度的瞬间变化。通过构建钙通道基因CCH1和MID1的缺失突变株,在碱性pH条件下,研究其对胞内钙内流的影响以及... 白念珠菌Candida albicans对环境pH的适应能力与其致病性有密切关系,钙信号转导途径介导许多环境压力的应答并伴随胞内钙离子浓度的瞬间变化。通过构建钙通道基因CCH1和MID1的缺失突变株,在碱性pH条件下,研究其对胞内钙内流的影响以及转录因子Crz1p对CCH1和MID1基因的调控作用。使用二步法PCR介导的基因敲除技术构建cch1?/?和mid1?/?突变菌株,利用流式细胞术比较野生型和突变型菌株在碱性pH条件刺激下胞内钙的瞬间变化,进一步构建pPHO89-LacZ重组质粒并利用β-半乳糖苷酶体系分析CCH1和MID1基因缺失对外钙内流以及转录因子Crz1p对LacZ活性的影响,结果发现碱性pH条件引起的钙离子浓度的瞬间变化在cch1?/?和mid1?/?缺失突变株中明显减弱,LacZ活性也显著降低,且在crz1?/?缺失突变株中完全消失。最后利用实时定量PCR,确定转录因子Crz1p在碱性pH条件下对CCH1和MID1具有非钙调神经磷酸酶依赖性的调控作用。对钙信号途径在碱性pH压力应答中作用的研究,将为临床上白念珠菌感染的治疗和新药靶点导向提供重要的理论依据。 展开更多

关键词 白念珠菌 碱性pH CCH1 MID1 钙内流 Crz1p

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