应用时间分辨荧光免疫分析技术检测SARS病毒抗原的初步研究 被引量：9

1

作者 王蕾 吴英松 +1 位作者 汤永平 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期429-431,434,共4页

目的建立定量检测SARS冠状病毒N蛋白的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA).方法采用经SARS-CoVN蛋白和配对实验筛选的两株抗SARSN蛋白单克隆抗体,以双抗体夹心法为基础建立检测SARS-CoVN抗原的时间分辨荧光免疫分析技术,进行方法学的评价,并... 目的建立定量检测SARS冠状病毒N蛋白的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA).方法采用经SARS-CoVN蛋白和配对实验筛选的两株抗SARSN蛋白单克隆抗体,以双抗体夹心法为基础建立检测SARS-CoVN抗原的时间分辨荧光免疫分析技术,进行方法学的评价,并与相应ELISA试剂盒进行比较.结果该法的测量范围为(0.02～150)ng/ml,灵敏度为0.02 ng/ml;批内、批间CV分别为(3.3～6.2)%和(5.3～9.6)%,与采用ELISA试剂盒检测灭活SARS-CoV N蛋白情况比较的结果一致.结论本研究建立的检测SARSN蛋白的时间分辨荧光免疫分析技术灵敏度高,特异性好,具有潜在的临床应用价值. 展开更多

关键词 时间分辨荧光免疫分析技术 SARSN蛋白 单克隆抗体

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循证医学与糖尿病 被引量：1

2

作者 张定康 耿仁文 +3 位作者 俞守义 薛耀明 陈清 钱毅 《循证医学》 CSCD 2005年第6期359-363,共5页

循证医学概念的提出为医学科研活动提供了新的思维方式和新的方法,尽管它应用时间不长,但发展势头迅猛。糖尿病是目前发病率迅速增长的慢性代谢性疾病之一,循证医学方法最早应用于糖尿病的病因、诊断和治疗,在遗传因素的探索、诊断标准... 循证医学概念的提出为医学科研活动提供了新的思维方式和新的方法,尽管它应用时间不长,但发展势头迅猛。糖尿病是目前发病率迅速增长的慢性代谢性疾病之一,循证医学方法最早应用于糖尿病的病因、诊断和治疗,在遗传因素的探索、诊断标准的确立和统一、控制血糖及并发症治疗等方面均提出了全新的观点,这些观点已被世界范围内内分泌学界广泛接受,并指导临床实践,对改善糖尿病患者的治疗效果、预后及其生存质量起到了重要作用。 展开更多

关键词 糖尿病 遗传因素 诊断 治疗 循证医学

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循证医学图书馆(中文光盘版)的特点和检索功能分析 被引量：1

3

作者 夏旭 孙玮 +1 位作者 吴娴波 刘建炜 《医学信息（西安上半月）》 2004年第12期817-820,共4页

循证医学 (EBM)的发展使得大量的临床证据产生了 ,用于检索这些证据的 Cochrane图书馆亦已开发成功。循证医学图书馆 (中文光盘版 )始建于 2 0 0 2年。文章探讨了循证医学图书馆 (中文光盘版 )的特点和检索功能 ,同时讨论了该数据库存... 循证医学 (EBM)的发展使得大量的临床证据产生了 ,用于检索这些证据的 Cochrane图书馆亦已开发成功。循证医学图书馆 (中文光盘版 )始建于 2 0 0 2年。文章探讨了循证医学图书馆 (中文光盘版 )的特点和检索功能 ,同时讨论了该数据库存在的一些问题。 展开更多

关键词 循证医学图书馆 检索功能 医学数据库 文献收集

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CA125时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制 被引量：8

4

作者 杭建峰 吴英松 +2 位作者 徐伟文 周志聪 李明 《热带医学杂志》 CAS 2005年第5期567-570,582,共5页

目的研制CA125时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心法建立CA125TRFIA试剂盒,对试剂盒各项指标进行评价。结果该试剂盒的工作范围为10～600U/m l,分析灵敏度为1.07U/m l,批内、批间的精密度分别为4.5%～8.1%,6.9%～11... 目的研制CA125时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心法建立CA125TRFIA试剂盒,对试剂盒各项指标进行评价。结果该试剂盒的工作范围为10～600U/m l,分析灵敏度为1.07U/m l,批内、批间的精密度分别为4.5%～8.1%,6.9%～11.5%。与CEA、AFP、CA50、CA15-3、CA19-9无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7d。425份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～37U/m l。123份血清标本用本试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.939。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。 展开更多

关键词 CA125 时间分辨荧光免疫分析(TRFIA) 试剂盒

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人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制 被引量：9

5

作者 杭建峰 吴英松 +4 位作者 余伟鸿 徐伟文 王从容 裘宇容 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第3期313-317,共5页

目的研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒.方法采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价.结果试剂盒的可测范围为l～1 000 U/ml,灵敏度为0.17 U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3... 目的研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒.方法采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价.结果试剂盒的可测范围为l～1 000 U/ml,灵敏度为0.17 U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%～5.9%,3.7%～6.5%.与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应.稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7 d.426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～12 U/ml.用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995.结论试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒. 展开更多

关键词 人甲胎蛋白(hAFP) 时间分辨免疫荧光分析(TRFIA) 试剂盒

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总PSA时间分辨免疫荧光分析法的建立 被引量：8

6

作者 杭建峰 吴英松 +1 位作者 徐伟文 李明 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期402-405,共4页

利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立人血清总PSA(前列腺特异性抗原)的快速全自动检测方法及其诊断试剂研制,该法采用双抗体夹心法建立tPSA-TRFIA,对该法和研制试剂的指标评价表明:方法的线性测量范围为0.50～250μg/L,灵敏度为0.0... 利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立人血清总PSA(前列腺特异性抗原)的快速全自动检测方法及其诊断试剂研制,该法采用双抗体夹心法建立tPSA-TRFIA,对该法和研制试剂的指标评价表明:方法的线性测量范围为0.50～250μg/L,灵敏度为0.06μg/L,批内批间的精密度分别为5.58%～9.71%,6.49%～12.12%。与CEA、CA12-5、CA15-3、CA19-9、AFP无交叉反应。353份血清标本用本试剂与国外其他试剂同时检测,其相关性达到94.4%,结果表明,试剂测定各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品。 展开更多

关键词 总PSA(前列腺特异性抗原) 时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)

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用乳酸脱氢酶为靶分子的免疫层析技术检测恶性疟原虫(英文) 被引量：4

7

作者 吴英松 雷腊梅 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第7期761-765,共5页

目的建立一种免疫胶体金层析(GICA)法用于恶性疟原虫的检测。方法采用杂交瘤技术制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)单抗,利用筛选出来的单抗制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条,以镜检和PCR法为对照,用GICA条检测门诊"四热"病人血... 目的建立一种免疫胶体金层析(GICA)法用于恶性疟原虫的检测。方法采用杂交瘤技术制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)单抗,利用筛选出来的单抗制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条,以镜检和PCR法为对照,用GICA条检测门诊"四热"病人血样,评价其敏感性和特异性,并对其稳定性进行了初步研究。结果筛选出4株抗LDHpf单抗,间接ELISA表明4株单抗仅与恶性疟原虫发生反应,而与间日疟原虫、红细胞蛋白、刚地弓形虫和日本血吸虫不发生交叉反应。Western-blot结果显示4株单抗能识别恶性疟原虫相对分子质量约为33000处的虫源蛋白。以镜检法和PCR法为标准,GICA条检测恶性疟原虫的敏感性分别为88.37%和86.67%,GICA与镜检法的符合率均为91.55%。结论GICA检测恶性疟原虫简易快速、灵敏度高,无需特殊仪器设备,有望成为一种恶性疟原虫快速免疫诊断试剂盒。 展开更多

关键词 恶性疟原虫 乳酸脱氢酶 单克隆抗体 免疫胶体金层析

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树突状细胞感染Her2/neu膜外及跨膜区蛋白基因重组腺病毒后的免疫功能变化

8

作者 马树东 罗荣城 +2 位作者 丁振华 鲁峰 袁长青 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1184-1187,共4页

目的观察体外树突状细胞(DC)感染编码Her2/neu基因膜外第一受体区(Her2-ECDs)、全长膜外区(Her2-ECD)和膜外跨膜区(Her2-TM)蛋白3种重组腺病毒(rAdHer2-ECDs、rAdHer2-ECD和rAdHer2-TM)后的免疫功能变化。方法重组腺病毒感染未成熟DC后,... 目的观察体外树突状细胞(DC)感染编码Her2/neu基因膜外第一受体区(Her2-ECDs)、全长膜外区(Her2-ECD)和膜外跨膜区(Her2-TM)蛋白3种重组腺病毒(rAdHer2-ECDs、rAdHer2-ECD和rAdHer2-TM)后的免疫功能变化。方法重组腺病毒感染未成熟DC后,Westernblot法检测目的蛋白在DC中的表达。ELISA法检测DC感染3个重组腺病毒后的白介素-12(IL-12)分泌水平及与淋巴细胞共孵育后上清中干扰素-γ(IFN-γ)的含量。采用混合白细胞反应检测DC感染前后刺激同种异体淋巴细胞的增殖能力。MTT法检测细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性。结果Her2-ECDs、ECD、TM蛋白在DC中获得表达。转染DC培养第5天,上清中IL-12含量比未转染DC含量高(P<0.05),但3种重组病毒之间无明显差异(P>0.05)。DC刺激淋巴细胞增殖后培养上清中IFN-γ的含量显示随着时间的延长逐步增高,但病毒感染DC明显高于非感染DC。DC明显介导淋巴细胞增殖反应,除rAdHer2-TM感染DC外,另两种转染和非转染DC之间无差异(P>0.05)。在DC诱导的CTL反应中,病毒感染DC诱导的杀伤率明显高于SK-OV-3修饰和非修饰DC,而SK-OV-3修饰又高于非修饰DC杀伤率(P<0.05)。在病毒感染DC中,以rAdHer2-TM转染DC激发的CTL活性为最强。对高表达Her2/neu蛋白的乳腺癌细胞株的杀伤率明显高于对Her2/neu表达阴性的杀伤率(P<0.05)。结论编码Her2/neu膜外及跨膜区蛋白重组腺病毒转染DC后,明显增强DC的抗肿瘤免疫功能,诱导出Her2/neu特异性的CTL活性。 展开更多

关键词 基因 HER2/NEU 树突状细胞 T淋巴细胞 细胞毒 腺病毒 重组

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Her2/neu膜外及跨膜区蛋白基因重组腺病毒的构建和鉴定

9

作者 马树东 罗荣城 +2 位作者 丁振华 袁长青 丁雪梅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1641-1643,1647,共4页

目的构建编码Her2/neu膜外第一受体区、全长膜外区、膜外及跨膜区3个蛋白的重组腺病毒真核表达载体,为信号传导和免疫研究建立实验材料。方法RT-PCR扩增出3个目的片段的cDNA,克隆进pAdTrack-CMV穿梭质粒,在BJ5183细菌内同源重组形成腺... 目的构建编码Her2/neu膜外第一受体区、全长膜外区、膜外及跨膜区3个蛋白的重组腺病毒真核表达载体,为信号传导和免疫研究建立实验材料。方法RT-PCR扩增出3个目的片段的cDNA,克隆进pAdTrack-CMV穿梭质粒,在BJ5183细菌内同源重组形成腺病毒质粒,脂质体法转染293细胞后,荧光显微镜观察病毒噬斑形成和绿色荧光蛋白表达,Westernblot检测目的蛋白的表达。结果PCR扩增出了预定大小的目的基因cDNA片段,测序结果和GenBank完全相符。病毒质粒转染293细胞后形成了病毒噬斑,绿色荧光蛋白和目的蛋白均获得表达。目的蛋白的表达量随着病毒感染复数的升高而增加。结论成功地构建了在真核细胞中表达Her2/neu膜外及跨膜区蛋白的腺病毒载体,为Her2/neu膜外及跨膜区蛋白的功能研究提供了材料基础。 展开更多

关键词 HER2/NEU基因 载体 基因克隆 重组腺病毒

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基于Ⅰ型登革病毒全球统一基因分型协同监测策略的纳米孔测序溯源技术体系的建立与初步应用 被引量：1

10

作者 胡敏玲 张晓晴 +10 位作者 郭祥 刘晓华 Jone Jama Kpanda Ngobeh 李紫瑶 赵令斋 陈海洋 葛柳 曾淑 任文雯 张复春 周晓红 《中国热带医学》 CAS 北大核心 2024年第10期1166-1172,1216,共8页

目的基于全球统一DENV-1基因分型协同监测策略构建纳米孔测序溯源技术体系,并初步应用于患者血清样本测试。方法基于全球DENV整合序列资源数据库GISDD v1.2.1中DENV-1全基因组序列集,利用MEGA 7.0、primer-BLAST、MPprimer和GISDDrPrime... 目的基于全球统一DENV-1基因分型协同监测策略构建纳米孔测序溯源技术体系,并初步应用于患者血清样本测试。方法基于全球DENV整合序列资源数据库GISDD v1.2.1中DENV-1全基因组序列集,利用MEGA 7.0、primer-BLAST、MPprimer和GISDDrPrimer软件筛选、设计和评价特异性的靶向多重PCR引物对;提取血清样本RNA和逆转录;16对引物分配至2个引物池,多重PCR扩增靶标基因组序列;使用磁珠纯化,根据SQK-LSK109试剂盒操作流程构建文库,使用MinION测序;分析测序数据并组装基因组,以GISDD基因分型平台进行溯源分析。结果设计并鉴定了16对与GISDD所收录基因组序列具有高覆盖度的DENV-1引物,建立了DENV-1特异性多重PCR靶向纳米孔高通量测序技术体系。初步应用于13例广州登革热患者血清样本的全基因组检测,读长(reads)平均长度中值为1668.00 bp,测序平均质量中值为9.30,比对率中值为97.90%,比对上参考基因组NV46的平均长度中值为1677.90 bp,基因组平均深度中值为12886.40×。进一步基于GISDD基因分型和溯源分析发现,9个隶属DENV-1基因分支1E1、3个为1L1、1个为5C1。结论纳米孔测序DENV-1全基因组检测体系稳定可靠,可获得高质量DENV-1全基因组序列,为登革热疫情暴发中DENV-1基因组的快速侦检与溯源追踪提供了有效的技术方案,为建立登革热的全球协同监测控制体系奠定技术基础。 展开更多

关键词 登革病毒 纳米孔测序 全基因组 基因分型

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盐酸克伦特罗时间分辨荧光免疫检测方法的建立 被引量：12

11

作者 雷红涛 高秀洁 +3 位作者 潘科 黄丽 吴英松 孙远明 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 2006年第1期6-10,共5页

采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速、高灵敏度的盐酸克伦特罗(CLB)全自动检测方法。以CLB-OVA包被96微孔板作为固相抗原,与游离CLB竞争限量的以Eu3+标记的抗CLB单克隆抗体,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测CLB。该方... 采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速、高灵敏度的盐酸克伦特罗(CLB)全自动检测方法。以CLB-OVA包被96微孔板作为固相抗原,与游离CLB竞争限量的以Eu3+标记的抗CLB单克隆抗体,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测CLB。该方法的灵敏度为0.03ng/mL,批内和批间变异系数分别为2.0%和8.9%,平均回收率为105.8%,与沙丁胺醇、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0.96%和0.77%,结果表明,用TRFIA法检测CLB,灵敏度高、特异性强、稳定性好,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 盐酸克伦特罗 时间分辨荧光免疫分析法

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病毒及其分类单元名称的词源学分析

12

作者 刘晓华 郭祥 +1 位作者 高文艳 周晓红 《热带医学杂志》 CAS 2021年第9期1227-1232,共6页

目的系统性分析总结现有病毒名、病毒分类单元名的词汇特征和规律。方法主要从国际病毒分类委员会(ICTV)所发布的基于7个主要分类阶元(域、界、门、纲、目、科、属)层级合计1709个病毒分类单元名展开词汇特征解析和词源分析;对以系统抽... 目的系统性分析总结现有病毒名、病毒分类单元名的词汇特征和规律。方法主要从国际病毒分类委员会(ICTV)所发布的基于7个主要分类阶元(域、界、门、纲、目、科、属)层级合计1709个病毒分类单元名展开词汇特征解析和词源分析;对以系统抽样法获得的168个病毒种名和171个病毒名以及以整群随机抽样法获得的317个宏基因组来源病毒名进一步进行词汇含义及其结构特征解析。结果种以上病毒分类单元名呈现统一的词根+后缀的构词特征,后缀具有较好的分类阶元区分度,词根则内涵丰富且形式多样。病毒种名和病毒名由合成法构成,为修饰语+核心词形式,尚无统一规范。目前宏基因组来源新病毒亦主要遵循现有命名规则。结论基于15个分类阶元的病毒分类与命名框架,如何整合病毒遗传学特征元素,发展一套系统性的简便高效的规范化命名系统,以适应宏病毒组学时代下日益剧增的新病毒命名需求,仍是全球病毒学研究领域亟待解决的重要问题。 展开更多

关键词 病毒 病毒命名 宏基因组 词源学

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