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重组人神经肽Y融合蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备与鉴定 被引量：1
1
作者 丁克祥 董萍 +7 位作者 杨永鹏 孙乐 丁银巧 郑宇浩 尹晴 韩晋云 丁宇 丁振华 《国际老年医学杂志》 2011年第5期193-197,共5页
目的：构建人神经肽Y（NPY）基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备兔抗人NPY抗血清。方法：取已构建好且经测序确认无误的再组质粒pET28a—NPY转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达融合蛋白，并经SDS—PAGE检测和Western印迹... 目的：构建人神经肽Y（NPY）基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备兔抗人NPY抗血清。方法：取已构建好且经测序确认无误的再组质粒pET28a—NPY转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达融合蛋白，并经SDS—PAGE检测和Western印迹鉴定，表达产物包涵体经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化，以纯化后的融合蛋白pET28a—NPY为抗原免疫家兔，获得抗血清，Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果经IPTG诱导含有pET28a—NPY重组质粒的DE3菌，表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni^2＋-NTA亲和层析进行纯化后，得到了较高纯度的融合蛋白，用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体，Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论：成功表达了人NPY蛋白并获得了其多克隆抗体，为进一步研究人NPY蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 重组人NPY 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 制备 鉴定
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神经肽Y及其受体与某些老年病及作用机制的研究 被引量：4
2
作者 丁克祥 董萍 +4 位作者 韩晋云 杨永鹏 丁宁 朱晓亮 丁振华 《国际老年医学杂志》 2010年第4期149-157,共9页
高血压、冠心病、肺心病、支气管哮喘、慢性阻塞性肺病、糖尿病、老年性痴呆、帕金森氏病、老年抑郁症与焦虑症、骨质疏松、肿瘤等均是老年人较为常见的疾病，它们直接或间接地威胁甚至危害着老年人的健康和生命。然而，大量基础医学和... 高血压、冠心病、肺心病、支气管哮喘、慢性阻塞性肺病、糖尿病、老年性痴呆、帕金森氏病、老年抑郁症与焦虑症、骨质疏松、肿瘤等均是老年人较为常见的疾病，它们直接或间接地威胁甚至危害着老年人的健康和生命。然而，大量基础医学和临床研究发现，神经肽Y及其受体在机体的分布、含量、合成、分泌及表达水平和调控功能等，不仅有可能介导或影响着这些老年性疾病的发生、发展、加重或预后，而且还有可能与治疗这些疾病的生物学效应、作用靶点、用药途径及治疗对策等密切相关。因此，本文就神经肽Y及其受体与这些老年病之间的关系及其作用机制方面的研究进展作一综述，为今后探索以神经肽Y及其受体为靶点的有效治疗方式奠定基础，也为老年医学的科学研究和临床防治提供一些理论和实验依据。 展开更多
关键词 神经肽Y 神经肽Y受体 老年病 作用机制 研究进展
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抗人神经肽Y单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1
3
作者 丁克祥 董萍 +7 位作者 杨永鹏 孙乐 孙哲 尹晴 韩晋云 左夏林 丁宇 丁振华 《国际老年医学杂志》 2011年第4期145-150,共6页
目的：建立抗人神经肽Y（NPY）的单克隆抗体细胞株。方法：用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合，用ELISA法筛选出阳性克隆，经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株，并对得到的单抗进行亚类、效价... 目的：建立抗人神经肽Y（NPY）的单克隆抗体细胞株。方法：用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合，用ELISA法筛选出阳性克隆，经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株，并对得到的单抗进行亚类、效价、纯度、亲和常数以及结合位点的测定和分析。结果：获得了3株稳定分泌抗hNPY单抗杂交瘤细胞株，IgG亚类鉴定分别为IgG3、IgG2b、IgG1，腹水效价为1：20万～1：200万，纯化抗体效价为0．05μg／ml-0．0005μg／ml，4A8抗体纯度达到95％以上，抗体亲和常数分别为5．27×10^6L／mol、3．39×10^6L／mol、1．05×10^7L／mol，不同单抗配对经时间分辨免疫荧光法检测结果提示3株单抗是针对不同抗原决定簇。结论：成功制备了3株抗hNPY单抗，为研究NPY及其抗体在脂肪移植及肥胖治疗中的机制和应用奠定基础。 展开更多
关键词 人神经肽Y 多肽合成 BALB/C小鼠 单克隆抗体 制备 鉴定
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基因重组融合蛋白hNPY对小鼠前脂肪细胞增殖和分化影响的实验研究
4
作者 丁克祥 董萍 +7 位作者 刘敏 杨永鹏 胡平安 丁宇 韩晋云 徐钢 尹晴 丁振华 《国际老年医学杂志》 2011年第6期241-250,共10页
目的：前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化潜力的特异化的前体细胞，如能找到可促进前脂肪细胞增殖和分化的因子或药物，并在脂肪组织移植的同时使用，则有希望提高脂肪组织的移植效果，本实验探索一种新的人体肥胖关联基因和外... 目的：前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化潜力的特异化的前体细胞，如能找到可促进前脂肪细胞增殖和分化的因子或药物，并在脂肪组织移植的同时使用，则有希望提高脂肪组织的移植效果，本实验探索一种新的人体肥胖关联基因和外周脂肪细胞激动剂一基因重组融合蛋白hNPY对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响及其分子调控机制。方法：采用基因工程技术设计hNPY基因上下游序列，经过PCR反应合成hNPY的cDNA后与pET28a＋载体重组，再将已构建好、并经测序确认无误的重组质粒pET28a—NPY转导至大肠杆菌BL21（DE3），再由IPTG诱导表达hNPY融合蛋白、并进行纯化；然后，将体外培养的小鼠3T3-L1前脂肪细胞经由3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素和地塞米松进行联合诱导；诱导2d后，再将此细胞分为三组，即空白对照组（未加任何诱导剂组）、经典诱导组（胰岛素诱导）和实验干预组（hNPY融合蛋白干预），其中，实验干预组再按照hNPY融合蛋白浓度不同又分为高、中、低三个浓度组（10^-8mol／L、10^-19mol／L和10^-9 mol／L）。分别于细胞培养的第7d和第12d用相差显微镜观察各组细胞的形态学变化，再于细胞培养的第12d用油红O染色观察脂肪细胞的分化程度；同时，采用MTT法检测该细胞的增殖状况；采用Westernblot法检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物体增殖剂活化受体-γ（PPAR-γ）、CAAT／增强子结合蛋白-a（C／EBP-a）蛋白的表达水平。结果：低浓度（10^-10 mol／L）的hNPY融合蛋白，无明显促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的作用效果；中浓度（10^-9 mol／L）的hNPY融合蛋白，可有效促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖及细胞数量增多；而高浓度（10^-8 mol／L）的hNPY融合蛋白，不仅能明显促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞的细胞增殖和分化，且能显著提高该细胞C／EBPa和PPARγ的表达水平、而明显降低INSIG-2的表达。结论：高浓度（10^-8mol／L）的基因重组融合蛋白hNPY能够明显促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化，其促进3T3-L1细胞增殖和分化的分子调控机制很可能与上调PPARγ、C／EBPa表达和降低INSIG-2表达水平有关，这提示：hNPY作为脂肪细胞膜上受体NPYR的有效促进剂或激动剂，未来很可能成为人体外周脂肪细胞一个新的作用靶点。 展开更多
关键词 基因重组融合蛋白 人神经肽 脂肪细胞激动剂 3T3-L1细胞 增殖 分化
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脂肪细胞关联基因与老年肥胖代谢性疾病
5
作者 丁克祥 董萍 +7 位作者 杨永鹏 韩晋云 杨方应 尹晴 左夏林 丁宇 朱晓亮 丁振华 《国际老年医学杂志》 2011年第3期102-107,共6页
肥胖及肥胖代谢综合征作为老年人常见病和合并症目前已不再足某些发达国家或地区的问题，它已经成为全球各个国家都将面l临的重大医学问题和健康问题。而且，肥胖可引发老年代谢性疾病、呼吸系统疾病、心血管系统疾病以及骨关节退行性... 肥胖及肥胖代谢综合征作为老年人常见病和合并症目前已不再足某些发达国家或地区的问题，它已经成为全球各个国家都将面l临的重大医学问题和健康问题。而且，肥胖可引发老年代谢性疾病、呼吸系统疾病、心血管系统疾病以及骨关节退行性变、性激素分泌失调、静脉淤滞、深静脉血栓形成及肿瘤的发生和发展等，其潜在的健康影响和生命威胁难以估量，给国家带来的社会问题和经济损失也无法计算。而某些脂肪细胞关联基因及肥胖基因与人类肥胖及肥胖代谢综合征密切相关，因此，对这些肥胖基因表达及关联因素实施有效调控，对控制人类肥胖及肥胖代谢综合征的发生、发展及转归具有重要临床意义。正是基于这些，本文通过对肥胖相关基因及其与相关临床疾病关系的文献进行综述，希望未来能够对以这些肥胖基因作为靶点的肥胖预防和治疗药物的设计提供某些依据并奠定一定基础。 展开更多
关键词 脂肪细胞 关联基因 肥胖代谢综合征 靶点 研究进展
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植物桖对自由基直接清除效应的实验研究
6
作者 杨永鹏 董萍 +5 位作者 丁克祥 丁宇 赵保路 左夏林 杨方应 丁振华 《国际老年医学杂志》 2012年第2期49-55,共7页
目的：检测植物柚（商品名是3D紫晶青春肽）对能引起机体氧化毒性或过氧化损伤的几种主要自由基的清除作用。方法：利用电子自旋共振（ESR）技术和ABTS等方法进行相关实验研究。结果：植物楹（商品名是3D紫晶青春肽）的终浓度仅为原液1... 目的：检测植物柚（商品名是3D紫晶青春肽）对能引起机体氧化毒性或过氧化损伤的几种主要自由基的清除作用。方法：利用电子自旋共振（ESR）技术和ABTS等方法进行相关实验研究。结果：植物楹（商品名是3D紫晶青春肽）的终浓度仅为原液1／1800时对超氧阴离子自由基、其终浓度仅为原液1／45000时对羟基自由基、其终浓度仅为原液1／1000时对DPPH自由基、其终浓度仅为原液1／120时对脂类自由基、其终浓度仅为原液1／1000时对ABTS自由基的清除率均可达到50％左右。结论：植物j血（商品名是3D紫晶青春肽）具有十分有效直接清除多种自由基的作用，显示出其显著的抗氧化功能。这种良好的抗氧化生物学效应，对于机体主动防御、早期干预过多自由基的氧化损伤或减轻由过剩自由基所引起的相关老年性疾病和衰老等具有积极意义。 展开更多
关键词 植物桖 青春肽 自由基 氧化损伤 抗氧化作用 生物学效应
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忽视脚下，后果很严重
7
作者 沈洁 《糖尿病之友》 2005年第11期37-37,共1页
老张是刚退休的政法委干部，退下来后不服老，常西装革履地参加各种社会活动。为了形象，他常穿皮质较硬的牛皮鞋，渐渐出现双足刺痛、麻木感，自认为是工作太累所致，于是和同事们去沐足，没想到第二天起床时发现足背上烫了几个水泡，... 老张是刚退休的政法委干部，退下来后不服老，常西装革履地参加各种社会活动。为了形象，他常穿皮质较硬的牛皮鞋，渐渐出现双足刺痛、麻木感，自认为是工作太累所致，于是和同事们去沐足，没想到第二天起床时发现足背上烫了几个水泡，自行简单处理后继续工作，几天后局部出现溃疡并化脓，异味很大，立刻到医院就诊，才知道他早就患有”糖尿病足”了， 展开更多
关键词 忽视 社会活动 医院就诊 糖尿病足 不服老 麻木感 出现
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