快速检测TOX、CMVIgG抗体的适配子型SPR传感器微阵列的初步构建 被引量：2

1

作者 刘星 秦莲花 +6 位作者 罗阳 苗杰 王丰 黄庆 黄君富 胡忠义 府伟灵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期765-767,共3页

目的初步构建弓形虫(toxoplasma gondii,TOX)、巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)IgG抗体的适配子型SPR传感器微阵列的快速检测方法。方法采用SELEX技术筛选TOX、CMV IgG的适配子,并将其整合于SPR生物传感器实时在线分析系统,通过在传感... 目的初步构建弓形虫(toxoplasma gondii,TOX)、巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)IgG抗体的适配子型SPR传感器微阵列的快速检测方法。方法采用SELEX技术筛选TOX、CMV IgG的适配子,并将其整合于SPR生物传感器实时在线分析系统,通过在传感器表面固定探针分子,对溶液中的TOX、CMV IgG进行杂交检测,并进一步研究该检测方法的稳定性与线性检范围。结果该新型快速检测方法能够实现对TOX、CMV IgG的实时检测,检测系统稳定性良好,八通道间检测时互不影响,线性检测范围为20～300μmol/L。结论该实验建立的快速检测方法,具有稳定性好等优点,SPR传感器技术结合适配子技术在临床诊断工作中有着广阔的应用前景。 展开更多

关键词 生物芯片 适配子 SPR传感器

在线阅读 下载PDF 职称材料

RNA恒温扩增联合熔解曲线分析鉴定胞内分枝杆菌的应用研究 被引量：2

2

作者 李园园 程松 +2 位作者 陆俊梅 胡忠义 崔振玲 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期58-62,共5页

目的建立RNA恒温扩增联合熔解曲线分析技术(RIARD-MCA)鉴定胞内分枝杆菌的方法,评估其应用效果。方法以胞内分枝杆菌的16SrRNA的特异序列为检测靶标设计RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物,42℃恒温扩增实时检测后进行熔解曲线分析,... 目的建立RNA恒温扩增联合熔解曲线分析技术(RIARD-MCA)鉴定胞内分枝杆菌的方法,评估其应用效果。方法以胞内分枝杆菌的16SrRNA的特异序列为检测靶标设计RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物,42℃恒温扩增实时检测后进行熔解曲线分析,对21种分枝杆菌标准株、5种非分枝杆菌和229株分枝杆菌临床分离株进行鉴别检测;同时以16SrRNA及hsp65基因PCR测序结果为金标准对照。结果 RIARD-MCA在21种分枝杆菌标准株及5种非分枝杆菌检测中只有胞内分枝杆菌阳性,其他阴性,与测序结果一致;在分枝杆菌临床分离株检测中,鉴定胞内分枝杆菌63株,其余为非胞内分枝杆菌,PCR测序为胞内分枝杆菌63株,其余166株为非胞内分枝杆菌,其灵敏度为100%(63/63),特异度为100%(166/166)。结论 RIARD-MCA鉴定胞内分枝杆菌具有较高的灵敏度、特异度和准确性,且检测快速,有望作为一种新的胞内分枝杆菌临床分离株鉴定方法。 展开更多

关键词 RNA恒温扩增 熔解曲线 胞内分枝杆菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

HCMV PP65抗原核酸适配子的筛选及活性鉴定

3

作者 夏宇 王永虎 +5 位作者 秦莲花 韩梅 姚远 和昱辰 罗娟 张波 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1040-1044,共5页

目的以人巨细胞病毒HCMV PP65抗原为靶分子,筛选与其有高亲和力、高特异性的适配子。方法采用SELEX技术筛选HCMV PP65抗原特异的适配子,进行亲和性检测以及二级结构预测,以筛选获得的最优序列作为捕获适配子,建立基于"磁珠-适配子... 目的以人巨细胞病毒HCMV PP65抗原为靶分子,筛选与其有高亲和力、高特异性的适配子。方法采用SELEX技术筛选HCMV PP65抗原特异的适配子,进行亲和性检测以及二级结构预测,以筛选获得的最优序列作为捕获适配子,建立基于"磁珠-适配子-抗原-荧光单克隆抗体"的夹心检测方法,实现对PP65抗原的初步检测。结果本实验经过8轮筛选获得6条与靶物质高亲和性,高特异性结合的适配子。结论适配子的成功筛选,为建立基于适配子检测HCMV PP65抗原的新方法奠定了基础。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 PP65 抗原 SELEX 适配子

在线阅读 下载PDF 职称材料

显微镜观察药物敏感度检测技术在二线抗结核药耐药性检测中应用 被引量：12

4

作者 付佑辉 郑瑞娟 +2 位作者 王洁 金文国 胡忠义 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期25-29,共5页

目的探讨MODS同时快速检测4种二线抗结核药耐药性的效果。方法用24孔细胞培养板建立显微镜观察药物敏感性技术，进行二线抗结核药物耐药性检测，并对最佳检测条件进行探讨。将该技术用于上海市肺科医院2007-2008年住院肺结核患者痰标本... 目的探讨MODS同时快速检测4种二线抗结核药耐药性的效果。方法用24孔细胞培养板建立显微镜观察药物敏感性技术，进行二线抗结核药物耐药性检测，并对最佳检测条件进行探讨。将该技术用于上海市肺科医院2007-2008年住院肺结核患者痰标本分离60株结核分枝杆菌对丙硫异烟胺、阿米卡星、卷曲霉索、左氧氟沙星耐药性检测，并与传统罗氏药敏结果进行比较，对2种方法检测结果不符的菌株进行MIC测定。结果MODS检测丙硫异烟胺、阿米卡星、卷曲霉素、左氧氟沙星药敏结果与罗氏药敏结果符合率分别为96．7％（58／60）、98．3％（59／60）、91．7％（55／60）、96．7％（58／60）。以传统罗氏药敏结果为判断金标准，MODS检测敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值及准确性丙硫异烟胺分别为100％、87．5％、87．5％、100％、96．7％，阿米卡星分别为100％、90．0％、90．0％、100％、98．3％，卷曲霉素分别为76．9％、95．7％、83．3％、93．8％、91．7％，左氧氟沙星分别为100％、96．0％、83．3％、100％、96．7％。结论MODS检测丙硫异烟胺、阿米卡星、卷曲霉素、左氧氟沙星耐药性具有快速、操作简便、价廉等优点，与传统罗氏药敏结果有较高的符合率，可作为MTB耐药性的快速检测方法之一。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 抗结核药 微生物敏感性试验 显微镜检查 抗药性 细菌

原文传递

氯法齐明对不同耐药类型结核分枝杆菌的体外抑菌活性研究 被引量：11

5

作者 桂徐蔚 肖和平 +3 位作者 胡忠义 崔振玲 王洁 陆俊梅 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期579-581,共3页

目的评价氯法齐明对不同耐药类型的MTB临床分离菌株的体外抑菌活性，为临床应用提供依据。方法应用微孔板观察法，测定氯法齐明对MTB标准株H，，Rv及临床分离敏感、单耐药、多耐药、耐多药和广泛耐药菌株各15株的MIC，并将氯法齐明对不... 目的评价氯法齐明对不同耐药类型的MTB临床分离菌株的体外抑菌活性，为临床应用提供依据。方法应用微孔板观察法，测定氯法齐明对MTB标准株H，，Rv及临床分离敏感、单耐药、多耐药、耐多药和广泛耐药菌株各15株的MIC，并将氯法齐明对不同耐药类型的MTB菌株体外活性与异烟肼、利福平、阿米卡星、卷曲霉素和氧氟沙星进行比较。结果氯法齐明对敏感菌株的MIC（0．06～4．00mg／L）高于异烟肼（0．06—0．25mg／L）和利福平（0．06—0．25mg／L），与氧氟沙星（0．06．2．00mg／L）、阿米卡星（0．06—4．00mg／L）和卷曲霉素（0．50～4．00mg／L）相似；氯法齐明对单耐药菌株的MIC（O．03～4．00mg／L）与异烟肼（0．06～0．25mg／L）和利福平（0．06～0．25mg／L）相似，低于氧氟沙星（0．25—8．00mg／L）、阿米卡星（0．06～4．00mg／L）和卷曲霉素（0．50～8．00mg／L）；氯法齐明对耐多药菌株的MIC（0．06～8．00mg／L）与阿米卡星（0．25～8．00mg／L）相似，优于氧氟沙星（0．125～8．00mg／L）和卷曲霉素（0．50～8．00mg／L）；氯法齐明对广泛耐药菌株的MIC（0．03～8．00mg／L）明显优于其他药物。结论氯法齐明对MTB菌株，尤其是耐多药和广泛耐药MTB菌株，均有较好的体外抑菌活性。 展开更多

关键词 氯法齐明 分枝杆菌 结核 微生物敏感性试验

原文传递

分泌蛋白MPT64鉴定结核分枝杆菌复合群的应用研究 被引量：9

6

作者 刘忠华 秦莲花 +7 位作者 冯永红 毕爱笑 杨华 丁元生 崔振玲 金瑞良 郑瑞娟 胡忠义 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期608-612,共5页

目的构建重组MTB分泌蛋白MPT64，制备多克隆抗体，评价其在鉴定MTB复合群中的应用价值。方法通过PCR扩增mpt64基因，构建pET21a—mpt64重组质粒；纯化重组蛋白并免疫兔制备多克隆抗体；纯化和标记抗体，建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验... 目的构建重组MTB分泌蛋白MPT64，制备多克隆抗体，评价其在鉴定MTB复合群中的应用价值。方法通过PCR扩增mpt64基因，构建pET21a—mpt64重组质粒；纯化重组蛋白并免疫兔制备多克隆抗体；纯化和标记抗体，建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）方法；检测分枝杆菌标准菌株和临床分离株培养液中MPT64蛋白，抽提样本基因组扩增mpt64基因。结果成功构建重组质粒，纯化重组蛋白并制备多克隆抗体，检测抗体浓度为0．85g／L，ELISA法检测敏感度为0．01mg／L，MTB复合群中H37Rv、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌为阳性，24株非MTB均为阴性；rapt64基因扩增的结果与ELISA法检测结果完全相符。ELISA法检测MTB临床分离株的敏感度为97．3％（110／113），57株非MTB均未检出MPT64蛋白，检测特异度为100．0％。基因扩增MTB中2株为阴性，非MTB均为阴性。结论采用ELISA法检测分泌蛋白MPT64来鉴定MTB复合群，是一种准确、快速和简便的方法，值得临床推广应用。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 复合群 分泌蛋白

原文传递

环丝氨酸在健康大鼠肺组织中的药代动力学研究

7

作者 谢安 肖和平 +2 位作者 黄怡 王卓 张文静 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期59-60,共2页

环丝氨酸为新型二线抗结核药物，主要与其他药物联用于耐多药结核病的治疗。环丝氨酸通过抑制D一丙氨酸消旋酶和合成酶，抑制细菌细胞壁黏肽的形成，导致MTB细胞壁缺损，从而起到杀菌和抑菌作用[1-2]。我们对环丝氨酸在肺部的药代动力... 环丝氨酸为新型二线抗结核药物，主要与其他药物联用于耐多药结核病的治疗。环丝氨酸通过抑制D一丙氨酸消旋酶和合成酶，抑制细菌细胞壁黏肽的形成，导致MTB细胞壁缺损，从而起到杀菌和抑菌作用[1-2]。我们对环丝氨酸在肺部的药代动力学进行了初步研究。 展开更多

关键词 药代动力学 环丝氨酸 大鼠肺组织 力学研究 细菌细胞壁 健康 耐多药结核病 抗结核药物

原文传递

鉴别结核分枝杆菌复合群的新型核酸扩增检测靶标评价 被引量：1

8

作者 高诗会 赵英伟 +6 位作者 胡忠义 王洁 陆俊梅 闫丽萍 郭琪 马慧 秦莲花 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期907-910,共4页

目的寻找新的鉴别诊断MTB复合群（MTC）高特异度和敏感的核酸靶标。方法利用简单序列重复区间（ISSR）分型技术平台筛选MTC的特征片段，克隆测序获得特征序列并进行序列同源性分析，以该序列为基础设计MTC特征引物，并对211株分枝杆菌... 目的寻找新的鉴别诊断MTB复合群（MTC）高特异度和敏感的核酸靶标。方法利用简单序列重复区间（ISSR）分型技术平台筛选MTC的特征片段，克隆测序获得特征序列并进行序列同源性分析，以该序列为基础设计MTC特征引物，并对211株分枝杆菌菌株（其中MTC107株、非结核分枝杆菌104株）进行鉴别检测。利用分枝杆菌属特征序列16s rRNA和MTC特征序列IS6110的鉴别结果，对MTC特征引物检测结果进行评估。结果通过ISSR分型获得588bp的MTC特征片段，该序列为MTC菌株的特征序列，位于MTB标准株H37Rv基因组的315947-316534位，以该序列为基础设计MTC鉴别引物MTCF／R，16srRNA基因在211株分枝杆菌菌株中的扩增结果均为阳性，IS6110序列在107株MTC菌株中扩增阳性率为99％（106／107），在104株NTM菌株中阴性检出率为100％（104／104），MTCF／R引物在MTC菌株中的扩增阳性率为100％（107／107），在非结核分枝杆菌菌株中的阴性检出率为100％（104／104）。结论通过ISSR分型技术筛选出的MTC特征序列可作为新的核酸扩增靶标用于MTC和非结核分枝杆菌的鉴别诊断。 展开更多

关键词 分枝杆菌属 核酸扩增技术 简单序列重复区间分型

原文传递

四川地区200例随机临床分枝杆菌分离株耐药状况的分析研究 被引量：3

9

作者 徐园红 崔振玲 +7 位作者 胡忠义 贺建兰 罗呆(呆) 岳翼 朱玛 朱帆 罗涛 钟晶 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期555-560,共6页

目的了解四川地区分枝杆菌的耐药状况，为临床用药提供参考依据。方法采用罗氏绝对浓度法对我院2009年6月—2010年12月间的200株分枝杆菌随机临床分离株进行9种抗结核药物的敏感性试验，并同步进行微量药敏（MIC）检测。结果200株分枝... 目的了解四川地区分枝杆菌的耐药状况，为临床用药提供参考依据。方法采用罗氏绝对浓度法对我院2009年6月—2010年12月间的200株分枝杆菌随机临床分离株进行9种抗结核药物的敏感性试验，并同步进行微量药敏（MIC）检测。结果200株分枝杆菌临床分离株中192株（96．0％）为结核分枝杆菌（MTB），8株（4．0％）为非结核分枝杆菌（NTM），两种分群方法结果一致。192株MTB中108株对9种抗结核药物全部敏感，对≥1种药物耐药者84株，总耐药率为43．7％（84／192），多重耐药（MDR）23株（12．0％），广泛耐药4株（2．1％），全耐药2株（1．0％）。耐9种不同抗结核药物的顺位由高到低依次为：丙硫异烟胺（PTA，33．3％）、异烟肼（INH，20．8％）、利福平（RFP，17．2％）、硫酸链霉素（SM，16．7％）、硫酸阿米卡星注射液（AMK，16．7％）、力克肺疾（PI，16．1％）、乙胺丁醇（EMB，10．9％）、左氧氟沙星（LFX，8．8％）、硫酸卷曲霉素（CPM，6．2％）；单-耐1、2、3、4、5、6、7、8和9种药物耐药率分别为12．5％、7．3％、6．2％、4．7％、4．2％、3．6％、3．1％、1．0％和1．0％。对I〉2种药物耐药者60株（31．2％）；对〉14种药物耐药者34株（17．7％）。MDR—TB对另外7种药物的罗氏药敏耐药率从高到底依次为：PI（78．3％）、EMB（69．6％）、SM（65．2％）、PTA（65．2％）、LFX（39．1％）、AMK（30．4％）、CPM（8．7％）。结论四川地区耐药性结核病仍处于全国较高水平，特别是同时耐多种（≥4种）药物的耐药率较高，应引起重视。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 最低抑菌浓度(MIC) 罗氏绝对浓度法 药物敏感性试验 多重耐药 结核

原文传递

分枝杆菌简单序列重复区间分型方法的研究 被引量：2

10

作者 秦莲花 范超 +4 位作者 郑瑞娟 刘忠华 王洁 蔡江丽 胡忠义 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1116-1120,共5页

目的构建分枝杆菌简单序列重复区间（inter-simple sequence repeat，ISSR）分型系统，为结核分枝杆菌的基因分型、菌种鉴定以及流行病学的研究提供新的研究工具和研究思路。方法根据结核分枝杆菌基因组中简单重复序列（SSR）的丰度和... 目的构建分枝杆菌简单序列重复区间（inter-simple sequence repeat，ISSR）分型系统，为结核分枝杆菌的基因分型、菌种鉴定以及流行病学的研究提供新的研究工具和研究思路。方法根据结核分枝杆菌基因组中简单重复序列（SSR）的丰度和频率，设计用于分枝杆菌基因分型的ISSR引物，以分枝杆菌属的DNA为材料，分析DNA浓度、Mg^2＋浓度、dNTP浓度、Taq酶的含量以及退火温度对ISSR-PCR扩增结果的影响，构建分枝杆菌的ISSR分型体系，并通过该体系筛选获得扩增结果稳定、多态性强的引物。结果经过优化实验建立了分枝杆菌ISSR-PCR最佳反应体系，20μl的PCR反应液含有的组分和终浓度分别为：10ng模板DNA，1U Taq酶，0．5μmol／L引物，1．5mmol／L MgCl2，0．2mmol／L dNTPs。利用该反应体系从10个ISSR引物中，筛选出了3个稳定性高、重复性好的引物，对分枝杆菌属28个菌种的标准菌株及52株结核分枝杆菌临床分离株进行了ISSR遗传多样性分析。结果显示，28个分枝杆菌菌种，除了结核和牛分枝杆菌之间具有较高的相似性，两两之间存在着高度的遗传多样性；52株结核分枝杆菌菌株在用ISSR进行分型时，大部分菌株表现出了较高的遗传相似性。结论建立了分枝杆菌属的ISSR分型体系。 展开更多

关键词 简单序列重复区间 优化 遗传多样性 分枝杆菌

原文传递

一种五联重复序列在分枝杆菌简单序列重复区间分型中的应用研究 被引量：1

11

作者 高诗会 胡忠义 +1 位作者 赵英伟 秦莲花 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期592-595,共4页

目的分析微卫星5联简单重复序列在分枝杆菌基因组中的分布情况，并评价其简单序列重复区间（ISSR）分型能力，为分枝杆菌的基因分型及流行病学研究提供新的研究工具。方法实验菌株为17株分枝杆菌菌株和41株MTB临床分离株，17株分枝杆菌... 目的分析微卫星5联简单重复序列在分枝杆菌基因组中的分布情况，并评价其简单序列重复区间（ISSR）分型能力，为分枝杆菌的基因分型及流行病学研究提供新的研究工具。方法实验菌株为17株分枝杆菌菌株和41株MTB临床分离株，17株分枝杆菌菌株包括分枝杆菌标准株15株、MTB临床菌株1株和MTB无毒株（H37Ra）1株。利用MICdb2．0软件分析微卫星数据库收录的分枝杆菌基因组中5联简单重复序列（CAGCG）n的分布特征，并以该序列为基础设计ISSR引物（5’-CAGCGCAGCGCAGCG-3’），用于分枝杆菌种间和种内菌株的基因分型分析。结果生物信息学分析显示（CAGCG）n在数据库收录的大部分分枝杆菌基因组中均有较高含量，其中在H37Rv、CDCl551、牛分枝杆菌和鸟分枝杆菌基因组中出现的次数分别为40、39、39和33次，且主要分布在编码序列区（分别为39、36、38和30次）。ISSR引物对分枝杆菌菌种的基因分型分析显示，15种常见菌种聚为2大簇，第1簇含有2个亚型，第2簇含有4个亚型，种间表现出高度的遗传多样性；ISSR引物对MTB临床菌株的分析结果显示，41株菌株聚为2簇，各簇分别有2个亚型，提示该引物对种内菌株也表现出良好的分辨力。结论以（CAGCG）n建立的ISSR分型体系，可用于分枝杆菌种间和种内菌株的遗传多样性分析。 展开更多

关键词 分枝杆菌属 简单序列重复区间分型 变异(遗传学)

原文传递