目的:探讨p21WAF1(p21)基因转染对人胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖的影响.方法:根据转染质粒的不同和是否进行质粒转染分为3组,p21转染组、空载体转染组和未转染组.应用RT-PCR和Western blot方法检测转染细胞的p21基因表达变化;流式细胞...目的:探讨p21WAF1(p21)基因转染对人胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖的影响.方法:根据转染质粒的不同和是否进行质粒转染分为3组,p21转染组、空载体转染组和未转染组.应用RT-PCR和Western blot方法检测转染细胞的p21基因表达变化;流式细胞仪分析细胞周期变化,用MTT、流式细胞仪和透射电镜检测转染外源p21基因对BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响.结果:p21转染组细胞存在p21 mRNA高表达和P21蛋白高表达;p21转染组细胞生长速度低于对照空载体转染组和未转染组;流式细胞仪观察到P21蛋白高表达使BxPC-3细胞发生G1/S阻滞,G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组(59.887%±3.700% vs 47.443%±6.354%,49.223%±2.226%,P<0.05),S期显著低于空载体组和未转染组(21.277%±2.080% vs 35.247%±3.966%,36.013%±1.540%,P<0.01),并出现亚G1峰(凋亡峰).透射电镜亦发现p21转染组发生细胞凋亡.结论:p21基因转染可以抑制人胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖并能诱导其发生细胞凋亡.展开更多
目的：研究亚砷酸(As_2O_3)对人食管癌EC109细胞株细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p15^(INK4B)(p15)基因表达的影响．方法：终浓度2μmol/L的As_2O_3加入食管癌EC109细胞系,采用甲基化特异PCR(MSP)检测食管癌EC109细胞系中p15基因甲基化...目的：研究亚砷酸(As_2O_3)对人食管癌EC109细胞株细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p15^(INK4B)(p15)基因表达的影响．方法：终浓度2μmol/L的As_2O_3加入食管癌EC109细胞系,采用甲基化特异PCR(MSP)检测食管癌EC109细胞系中p15基因甲基化,采用RT-PCR和Western blot方法检测As_2O_3处理前后p15的mRNA和蛋白质水平的表达情况．用Scion Image软件测量条带灰度值,P15蛋白与ACTB条带的灰度比进行半定量分析．结果：EC109细胞p15基因发生高甲基化,p15基因不表达．As_2O_3作用后p15基因甲基化程度明显下降,As_2O_3作用72,48,24 h组和未加药组之间差异均有统计学意义(37．11±3．62,50．92±5．47,72．07±7．53 vs 97．23±9．80,P＜0．05)．As_2O_3作用24 h后出现p15 mRNA表达,随As_2O_3作用时间延p15 mRNA表达逐渐增强,各个时间组之间比较,除了未加药组和加药24 h组之间及加药24 h组和加药48 h组之间差异无统计学意义外,其余各个时间组之间差异有统计学意义(0．72±0．07 vs 0．58±0．06 vs 0．48±0．07 vs 0．41±0．08,P＜0．05)．As_2O_3作用24 h后P15蛋白出现表达,2μmol/L作用24-72 h中P15蛋白条带灰度逐渐增强,As_2O_3作用72,48,24 h组和未加药组之间差异均有统计学意义(0．51±0．02 vs 0．21±0．01 vs 0．16±0．02 vs 0．06±0．01,P＜0．05),说明其表达随As_2O_3作用时间延长而逐渐增强．结论：As_2O_3可使食管癌EC109细胞p15基因去甲基化,使p15基因表达上调,从而抑制细胞周期进程．展开更多
文摘目的:探讨p21WAF1(p21)基因转染对人胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖的影响.方法:根据转染质粒的不同和是否进行质粒转染分为3组,p21转染组、空载体转染组和未转染组.应用RT-PCR和Western blot方法检测转染细胞的p21基因表达变化;流式细胞仪分析细胞周期变化,用MTT、流式细胞仪和透射电镜检测转染外源p21基因对BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响.结果:p21转染组细胞存在p21 mRNA高表达和P21蛋白高表达;p21转染组细胞生长速度低于对照空载体转染组和未转染组;流式细胞仪观察到P21蛋白高表达使BxPC-3细胞发生G1/S阻滞,G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组(59.887%±3.700% vs 47.443%±6.354%,49.223%±2.226%,P<0.05),S期显著低于空载体组和未转染组(21.277%±2.080% vs 35.247%±3.966%,36.013%±1.540%,P<0.01),并出现亚G1峰(凋亡峰).透射电镜亦发现p21转染组发生细胞凋亡.结论:p21基因转染可以抑制人胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖并能诱导其发生细胞凋亡.
文摘目的：研究亚砷酸(As_2O_3)对人食管癌EC109细胞株细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p15^(INK4B)(p15)基因表达的影响．方法：终浓度2μmol/L的As_2O_3加入食管癌EC109细胞系,采用甲基化特异PCR(MSP)检测食管癌EC109细胞系中p15基因甲基化,采用RT-PCR和Western blot方法检测As_2O_3处理前后p15的mRNA和蛋白质水平的表达情况．用Scion Image软件测量条带灰度值,P15蛋白与ACTB条带的灰度比进行半定量分析．结果：EC109细胞p15基因发生高甲基化,p15基因不表达．As_2O_3作用后p15基因甲基化程度明显下降,As_2O_3作用72,48,24 h组和未加药组之间差异均有统计学意义(37．11±3．62,50．92±5．47,72．07±7．53 vs 97．23±9．80,P＜0．05)．As_2O_3作用24 h后出现p15 mRNA表达,随As_2O_3作用时间延p15 mRNA表达逐渐增强,各个时间组之间比较,除了未加药组和加药24 h组之间及加药24 h组和加药48 h组之间差异无统计学意义外,其余各个时间组之间差异有统计学意义(0．72±0．07 vs 0．58±0．06 vs 0．48±0．07 vs 0．41±0．08,P＜0．05)．As_2O_3作用24 h后P15蛋白出现表达,2μmol/L作用24-72 h中P15蛋白条带灰度逐渐增强,As_2O_3作用72,48,24 h组和未加药组之间差异均有统计学意义(0．51±0．02 vs 0．21±0．01 vs 0．16±0．02 vs 0．06±0．01,P＜0．05),说明其表达随As_2O_3作用时间延长而逐渐增强．结论：As_2O_3可使食管癌EC109细胞p15基因去甲基化,使p15基因表达上调,从而抑制细胞周期进程．
