同型半胱氨酸水平与代谢性心血管疾病相关性的meta分析

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作者 孙静 赵燚 +2 位作者 林怡 雷蓝 孙仙 《临床心血管病杂志》 CAS 2024年第2期108-115,共8页

目的:通过meta分析评估同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平与代谢性心血管疾病发生及死亡风险的相关性。方法:计算机检索Pubmed、中国知网(CNKI)、万方数据库和维普数据库,检索时限为建库至2023年7月24日。经过文献筛选、资料提取和质... 目的:通过meta分析评估同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平与代谢性心血管疾病发生及死亡风险的相关性。方法:计算机检索Pubmed、中国知网(CNKI)、万方数据库和维普数据库,检索时限为建库至2023年7月24日。经过文献筛选、资料提取和质量评价,采用RevMan 5.3软件进行meta分析。结果:共纳入16篇文献,其中7篇为队列研究,9篇为随机对照试验(randomized controlled trial,RCT)。队列研究meta分析结果显示,与Hcy水平正常者相比,Hcy水平较高者全因死亡率(RR=2.38,95%CI:1.71~3.32)、代谢性心血管疾病(RR=1.91,95%CI:1.46~2.49)、卒中(RR=2.26,95%CI:1.91~2.67)和冠心病(RR=2.32,95%CI:1.40~3.83)的发生/死亡风险增加;RCT研究meta分析结果显示,叶酸联合B族维生素干预可降低人体内Hcy水平(RR=-2.85,95%CI:-3.86~-1.83),但试验组和对照组全因死亡率、代谢性心血管疾病、心肌梗死和卒中的发生/死亡风险均无统计学意义(均P>0.05)。结论:队列研究结果显示,体内Hcy水平升高会增加代谢性心血管疾病的发生风险和全因死亡风险。RCT结果显示,叶酸联合B族维生素干预虽然能降低体内Hcy水平,但远期内并不能观测到对代谢性心血管疾病的影响。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 代谢性心血管疾病 META分析 队列研究 随机对照试验

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Hcy促血管平滑肌细胞增殖迁移相关的miRNAs筛选研究

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作者 马星 桂娜 +3 位作者 马婷 王秀玉 莫廷润 张鸣号 《宁夏医科大学学报》 2024年第1期7-14,共8页

目的明确同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人源血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖迁移的影响以及分析Hcy干预下VSMC增殖迁移相关差异miRNAs,为探讨Hcy促VSMC增殖迁移的分子机制提供依据。方法体外培养VSMC,分为Con... 目的明确同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人源血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖迁移的影响以及分析Hcy干预下VSMC增殖迁移相关差异miRNAs,为探讨Hcy促VSMC增殖迁移的分子机制提供依据。方法体外培养VSMC,分为Control组和100μmol·L^(-1) Hcy组。采用CCK-8法测量VSMC的增殖活性;采用划痕实验分析VSMC在0 h和48 h的迁移情况。高通量测序分析各组VSMC中差异化表达的miRNAs,采用miRanda和TargetScan软件进行靶基因预测,使用BLAST软件将预测靶基因序列与GO和KEGG数据库比对,分析靶基因的功能,获得与VSMC增殖和迁移相关的靶基因信息。通过RT-qPCR对其中表达上调的miRNAs进行验证。结果Hcy干预能增加VSMC的增殖活力(P<0.01),且VSMC的划痕面积减少(P<0.01)。两组细胞共检测到576个miRNAs,其中已知miRNAs 404个,新预测miRNAs 172个。与Control组相比,Hcy组存在88个差异表达的miRNAs,其中表达上调的20个,表达下调的68个。与VSMC增殖和迁移相关的miRNAs有20个,表达上调的包括miRNA39、miRNA206和miRNA212-5p,表达下调的包括miRNA35等17个。RT-qPCR结果显示,Hcy组miRNA212-5p的表达上调(P<0.05)。结论Hcy致VSMC增殖迁移过程中存在差异表达的miRNAs,miRNA212-5p可能参与了Hcy对VSMC的作用。 展开更多

关键词 微小RNA 靶基因预测 高通量测序 同型光胱氨酸 血管平滑肌细胞

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MicroRNA-145在动脉粥样硬化血管平滑肌细胞增殖迁移及表型转化中的研究进展 被引量：2

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作者 曾玥 王秀玉 +3 位作者 马星 罗思晴 马玉花 张鸣号 《宁夏医科大学学报》 2023年第7期731-738,共8页

微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一类长度为22~28个核苷酸的内源性非编码单链RNA,通过降解mRNA或抑制蛋白质翻译后修饰调控转录后基因的表达,是调控蛋白质生物合成的一类重要的非编码RNA。研究发现,miRNAs参与了动脉粥样硬化(atheroscleros... 微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一类长度为22~28个核苷酸的内源性非编码单链RNA,通过降解mRNA或抑制蛋白质翻译后修饰调控转录后基因的表达,是调控蛋白质生物合成的一类重要的非编码RNA。研究发现,miRNAs参与了动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)斑块的形成、脂质代谢障碍、血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)损伤等过程的调节。miRNAs在VSMCs中的表达水平,为阐明As的发病机制提供了新视角,也为As的治疗提供了新靶点。miRNA-145是血管壁和新鲜分离的VSMCs中含量最丰富的miRNA,是VSMCs表型和增殖的关键调节因子。文章就miRNA-145对As发生发展过程中的VSMCs增殖、迁移及表型转化的调控作用进行了综述。 展开更多

关键词 miRNA-145 动脉粥样硬化 血管平滑肌细胞 增殖 表型转化

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UBC9介导SUMO化修饰在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡中的作用研究

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作者 马凌桔 迟宏扬 +9 位作者 吴昕雪 马福军 田彦成 赵彩齐 何天宇 彭红建 姜怡邓 杨力 黄晖 马胜超 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期11-17,共7页

目的探讨泛素结合酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)介导SUMO化修饰在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡中的作用。方法首先采用细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)法和Western blot检测不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μm... 目的探讨泛素结合酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)介导SUMO化修饰在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡中的作用。方法首先采用细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)法和Western blot检测不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L和200μmol/L)同型半胱氨酸对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)的活力及焦亡的影响;采用Western blot检测不同组细胞中UBC9、SUMO化修饰蛋白SUMO-1、炎症因子IL-1β的表达水平;qRT-PCR检测干扰前后UBC9的mRNA表达,同时检测干扰UBC9后,UBC9、焦亡相关蛋白、IL-1β及SUMO-1相关表达。结果当采用100μmol/L的Hcy刺激后,巨噬细胞的活力影响最小且焦亡蛋白NLRP3、Caspase-1表达最明显(P<0.001);与Control组相比,Hcy组IL-1β的表达水平升高(P<0.01),SUMO-1表达升高(P<0.01);与Control组相比,Hcy组中UBC9蛋白水平及mRNA水平表达均增高(P<0.05);转染si-UBC9后,与si-NC+Hcy组相比,si-UBC9+Hcy组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、UBC9、SUMO-1表达降低(P<0.01)。结论同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡的发生,其机制与上调泛素结合酶9发生SUMO化修饰有关。 展开更多

关键词 UBC9 SUMO化 巨噬细胞 同型半胱氨酸 细胞焦亡

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DNMT1调控LSM4在Hcy诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用及其研究

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作者 夏童童 马芳 +8 位作者 刘虹麟 张正皓 丁寒霜 郝银菊 张慧萍 吴凯 焦运 姜怡邓 李桂忠 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期34-42,共9页

目的探讨DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)调控LSM4蛋白(Sm-like protein-4,LSM4)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用及机制研究。方法将ApoE-/-小鼠(12只)均分为2组,给予普通饲料喂养设为饮食... 目的探讨DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)调控LSM4蛋白(Sm-like protein-4,LSM4)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用及机制研究。方法将ApoE-/-小鼠(12只)均分为2组,给予普通饲料喂养设为饮食对照组(ND组,n=6),给予高蛋氨酸饲料喂养设为高蛋氨酸组(HMD组,n=6);NCTC1469小鼠正常肝细胞分为正常对照组(Control组,0μmol/L Hcy)、Hcy干预组(Hcy组,100μmol/L Hcy)、转染干扰片段对照组(si-NC组,0μmol/L Hcy)、转染LSM4干扰片段组(si-LSM4组,0μmol/L Hcy)、转染DNMT1干扰片段组(si-DNMT1组,0μmol/L Hcy)、Hcy干预下对照干扰组(Hcy+si-NC组,100μmol/L Hcy)、Hcy干预下LSM4干扰组(Hcy+si-LSM4组,100μmol/L Hcy)和Hcy干预下DNMT1干扰组(Hcy+si-DNMT1组,100μmol/L Hcy);NCBI数据库分析LSM4在多种组织中表达;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测小鼠组织(HMD组和ND组)和肝细胞(Control组和Hcy组)LSM4蛋白表达差异;Western blot检测凋亡指标Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)和B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达变化;流式细胞术检测Control组、Hcy组、Hcy+si-NC组和Hcy+si-LSM4组细胞凋亡率变化;MethPrimer在线软件分析LSM4启动子区CpG岛;qRT-PCR和Western blot检测Hcy+si-DNMT1组中LSM4蛋白表达。结果与ND组、Control组相比,HMD组、Hcy组LSM4蛋白表达显著增高(P<0.05);与Control组比较,Hcy组中Bax蛋白表达显著上调(P<0.05),而Bcl-2表达明显降低(P<0.05);与Hcy+si-NC组比较,Hcy+si-LSM4组中Bax蛋白表达量显著减少(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量明显增多(P<0.05);与Control组相比,Hcy组细胞凋亡率显著升高(P<0.05);相较Hcy+si-NC组,Hcy+si-LSM4组细胞凋亡率下降(P<0.05);MethPrimer在线软件分析显示LSM4启动子区GC含量丰富且存在1个CpG岛;与Hcy+si-NC组相比,Hcy+si-DNMT1组LSM4蛋白表达增高(P<0.05)。结论DNMT1通过调控LSM4低甲基化使其表达升高,从而促进Hcy诱导的小鼠肝细胞凋亡。 展开更多

关键词 内分泌与代谢病 LSM4 同型半胱氨酸 凋亡 DNA甲基转移酶1

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RNA pull-down联合质谱分析lncRNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制

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作者 夏童童 马芳 +8 位作者 孙浩原 刘虹麟 张正皓 杨佳琪 张慧萍 吴凯 沈江涌 姜怡邓 李桂忠 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第12期2492-2499,共8页

背景:课题组前期研究发现,增生性瘢痕特异性长链非编码RNA HSFAS是一种可用于增生性瘢痕诊断的新型生物标志物,但其如何在增生性瘢痕中发挥作用尚不清楚。目的:探讨长链非编码RNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制。方法:临床收集3例行... 背景:课题组前期研究发现,增生性瘢痕特异性长链非编码RNA HSFAS是一种可用于增生性瘢痕诊断的新型生物标志物,但其如何在增生性瘢痕中发挥作用尚不清楚。目的:探讨长链非编码RNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制。方法:临床收集3例行增生性瘢痕组织切除手术患者的新鲜增生性瘢痕皮肤组织和增生性瘢痕旁正常皮肤组织标本,应用免疫荧光技术检测两种皮肤组织冰冻切片中长链非编码RNA HSFAS的表达。应用酶消化法体外分离增生性瘢痕皮肤组织与正常皮肤组织原代成纤维细胞,采用qRT-PCR检测细胞中长链非编码RNA HSFAS mRNA表达,通过RNA pull-down联合质谱技术检测与长链非编码RNA HSFAS相互结合的蛋白,利用GO和KEGG分析长链非编码RNA HSFAS参与增生性瘢痕进展的主要功能和通路,通过catRAPID和RPISeq网站分析确定长链非编码RNA HSFAS与蛋白的靶向结合。结果与结论:①与正常皮肤组织相比,增生性瘢痕组织中的长链非编码RNA HSFAS表达升高(P<0.05);与正常皮肤组织来源成纤维细胞相比,增生性瘢痕组织来源成纤维细胞中长链非编码RNA HSFAS mRNA表达升高(P<0.05);②RNA pull-down联合质谱技术明确与长链非编码RNA HSFAS相互结合的蛋白有510个;GO和KEGG分析结果显示:这些蛋白主要涉及RNA剪接和加工、染色体合成和分离、细胞周期等过程,其中涉及RNA剪接和加工的蛋白有支架附着因子B2和DICER1,并且与长链非编码RNA HSFAS的结合分数较高;生物信息学技术分析验证结果显示,长链非编码RNA HSFAS与支架附着因子B2和DICER1蛋白存在相互结合;③结果显示,长链非编码RNA HSFAS可能通过与支架附着因子B2和DICER1蛋白相互结合调控RNA剪接和加工修饰影响基因表达,从而促进增生性瘢痕的发生发展。 展开更多

关键词 增生性瘢痕 lncRNA HSFAS 成纤维细胞 RNA pull-down 质谱分析

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Toll样受体4在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞铁死亡中的作用

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作者 翟俊杰 温少莹 +10 位作者 李心如 孙睿 祁宁 张启凡 杨力 黄晖 马凌桔 郝银菊 姜怡邓 李桂忠 马胜超 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第3期313-321,共9页

目的探讨Toll样受体4在调控同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导巨噬细胞铁死亡中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,设置对照组(Control)、同型半胱氨酸干预组(Hcy)和同型半胱氨酸+铁死亡抑制剂组(Hcy+Fer-1);巨噬细胞转染干扰片... 目的探讨Toll样受体4在调控同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导巨噬细胞铁死亡中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,设置对照组(Control)、同型半胱氨酸干预组(Hcy)和同型半胱氨酸+铁死亡抑制剂组(Hcy+Fer-1);巨噬细胞转染干扰片段后予同型半胱氨酸干预,设置对照组(Control)、同型半胱氨酸干预组(Hcy)、TLR4干扰阴性对照+同型半胱氨酸干预组(si-NC+Hcy)、TLR4干扰+同型半胱氨酸干预组(si-TLR4+Hcy);巨噬细胞转染过表达慢病毒后予同型半胱氨酸干预,对照组(Control)、同型半胱氨酸干预组(Hcy)、TLR4过表达阴性对照+同型半胱氨酸干预组(OE-NC+Hcy)、TLR4过表达+同型半胱氨酸干预组(OE-TLR4+Hcy);干预细胞48 h后,实时荧光定量PCR和Western blot检测Hcy干预的巨噬细胞中TLR4表达水平;Western blot检测巨噬细胞中铁死亡相关蛋白ACSL4、GPX4及FTH1表达水平;采用铁离子试剂盒检测巨噬细胞内Fe^(2+)浓度;采用ROS试剂盒及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧的含量。结果与Control组相比,Hcy组促铁死亡相关蛋白ACSL4的表达水平升高(P<0.05),抗铁死亡相关蛋白GPX4与FTH1的表达水平降低(P<0.05),Fe^(2+)浓度升高(P<0.05),ROS含量增多,同时Hcy组中TLR4蛋白及mRNA表达水平均升高(P<0.05);巨噬细胞转染TLR4干扰片段后,与si-NC+Hcy组相比,si-TLR4+Hcy组中GPX4与FTH1表达水平增高(P<0.05),ACSL4表达水平降低(P<0.05),Fe^(2+)浓度降低(P<0.05),ROS含量减少;巨噬细胞转染TLR4过表达慢病毒后,与OE-NC+Hcy组相比,OE-TLR4+Hcy组中GPX4与FTH1表达水平降低(P<0.05),ACSL4表达水平升高(P<0.05)。结论Hcy诱导巨噬细胞铁死亡的发生,而Toll样受体4对Hcy诱导的巨噬细胞铁死亡有正向调控作用。 展开更多

关键词 TLR4 巨噬细胞 同型半胱氨酸 铁死亡

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miR-488-3p靶向调控RAP1A在同型半胱氨酸介导肝细胞自噬的作用研究 被引量：3

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作者 高源 揭育祯 +6 位作者 马天龙 汪乐新 杨慧霞 周瑜瑾 焦运 卢冠军 马胜超 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第9期1-9,共9页

目的探讨微小RNA(miR-488-3p)通过靶向调控RAS癌基因家族成员RAP1A在同型半胱氨酸介导肝细胞自噬中的作用。方法体外常规培养人正常肝细胞(HL-7702),并给予100μmol/L Hcy干预24 h,采用Western blot检测肝细胞自噬相关蛋白LC3、p62和RA... 目的探讨微小RNA(miR-488-3p)通过靶向调控RAS癌基因家族成员RAP1A在同型半胱氨酸介导肝细胞自噬中的作用。方法体外常规培养人正常肝细胞(HL-7702),并给予100μmol/L Hcy干预24 h,采用Western blot检测肝细胞自噬相关蛋白LC3、p62和RAP1A的表达水平,qRT-PCR检测肝细胞中miR-488-3p和RAP1A的表达;转染miR-488-3p inhibitor和mimics后,qRT-PCR和Western blot分别检测miR-488-3p的转染效率及其对LC3和p62蛋白表达的影响;TargetScan预测miR-488-3p与RAP1A基因相关性,Western blot检测miR-488-3p下游潜在靶蛋白(RAP1A)的表达改变;Pearson相关系数对肝细胞中miR-488-3p表达水平与自噬相关蛋白水平进行相关性分析。结果与Control组相比,Hcy组肝细胞自噬相关蛋白LC3、RAP1A和miR-488-3p的表达水平升高(P<0.01),而p62表达明显降低(P<0.01);同时,转染miR-488-3p inhibitor和mimics后,与NC-inhibitor组比较,miR-488-3p inhibitor组中LC3和RAP1A蛋白的表达水平显著降低(P<0.01),p62表达明显升高(P<0.01);而与NC-mimics组相比,miR-488-3p mimics组中LC3和RAP1A蛋白表达水平明显增加(P<0.01),p62表达降低(P<0.01);进一步机制研究表明RAP1A是miR-488-3p的下游靶基因并受其正向调控。Pearson相关性分析发现,miR-488-3p的表达水平与LC3(r=0.9329,P=0.0002)蛋白表达呈正相关,而与p62(r=-0.8086,P=0.0083)表达则呈负相关。结论miR-488-3p在Hcy介导的肝细胞中高表达,可通过靶向调控RAP1A的表达促进肝细胞自噬。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 miR-488-3p 肝细胞 RAP1A 自噬

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FoxO1/p38 MAPK信号通路在LPS致急性肺损伤中的作用研究 被引量：2

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作者 杨亚丽 田荣 +2 位作者 袁茵 王艳佳 杨晓玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期36-42,共7页

目的探讨叉头状转录因子O1(forkhead transcription factors of O class1,FoxO1)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中的作用及其调控机制。方法采用LPS模拟诱导ALI模型。HE染色法观察肺组织的病理变... 目的探讨叉头状转录因子O1(forkhead transcription factors of O class1,FoxO1)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中的作用及其调控机制。方法采用LPS模拟诱导ALI模型。HE染色法观察肺组织的病理变化;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量;免疫组化染色观察FoxO1在小鼠肺组织的表达;Western blot检测FoxO1、DNA甲基转移酶和p38 MAPK的磷酸化水平;qRT-PCR检测FoxO1、IL-6、TNF-α和DNA甲基转移酶的mRNA水平;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测肺组织中FoxO1启动子区DNA甲基化的水平变化;培养肺血管内皮细胞(pulmonary vascular endothelial cells,PVECs)并转染FoxO1 siRNA,Western blot检测p38 MAPK的磷酸化水平;采用Pearson方法分析FoxO1甲基化水平与炎症因子的相关性。结果与Control组相比,LPS组小鼠肺泡炎性细胞明显增多,肺组织水肿、充血明显;TNF-α和IL-6的水平分别升高52.2%和150.4%(P<0.05);p38 MAPK磷酸化水平及FoxO1表达分别增加134.1%和61.8%(P<0.05),而FoxO1启动子区DNA甲基化水平降低17.2%(P<0.05),体外转染FoxO1 siRNA后,p38磷酸化水平降低,Pearson分析显示,FoxO1甲基化水平与炎症因子成负相关。结论FoxO1启动子区低甲基化调控FoxO1/p38 MAPK信号通路是LPS诱导急性肺损伤的重要机制。 展开更多

关键词 FOXO1 LPS 急性肺损伤 DNA甲基化 p38 MAPK信号通路 肺血管内皮细胞

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医学研究生“思政+科研+教学+创业”四维教育协同育人模式研究——以宁夏医科大学为例 被引量：1

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作者 李晓菡 高源 +1 位作者 马胜超 姜怡邓 《西部素质教育》 2022年第16期17-20,共4页

文章以宁夏医科大学2019级、2020级、2021级在读研究生共185人为研究对象,探究了“思政+科研+教学+创业”四维教育协同育人模式的应用效果,具体从在线平台学情数据、满意度调查问卷结果、效果调查问卷结果、期末考试成绩和创新创业情况... 文章以宁夏医科大学2019级、2020级、2021级在读研究生共185人为研究对象,探究了“思政+科研+教学+创业”四维教育协同育人模式的应用效果,具体从在线平台学情数据、满意度调查问卷结果、效果调查问卷结果、期末考试成绩和创新创业情况五个方面入手进行分析,结果发现,“思政+科研+教学+创业”四维教育协同育人模式实施成效显著,但同时也存在一些问题,并提出了相应的改进措施,包括加强教学质量保障和监督管理、完善研究生创新创业教育机制和课程体系等。 展开更多

关键词 “思政+科研+教学+创业”四维教育协同育人模式 医学研究生 新医科

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miR-5088-5p在同型半胱氨酸致肝细胞焦亡中的保护作用研究

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作者 董小艳 刘达越 +5 位作者 徐灵博 顾铃毓 姜怡邓 杨安宁 焦运 李桂忠 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1565-1570,共6页

目的探讨miR-5088-5p在同型半胱氨酸诱导肝细胞焦亡中的作用。方法培养正常肝细胞,分为Control组、Hcy组、转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic后给予Hcy干预组,采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、caspase 1、IL-1β的表达水平... 目的探讨miR-5088-5p在同型半胱氨酸诱导肝细胞焦亡中的作用。方法培养正常肝细胞,分为Control组、Hcy组、转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic后给予Hcy干预组,采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、caspase 1、IL-1β的表达水平;采用qRT-PCR检测miR-5088-5p的表达水平;将CBS^(+/-)小鼠和CBS^(+/+)小鼠给予高蛋氨酸饮食12周,采用全自动生化仪检测小鼠血清中Hcy水平;采用免疫荧光检测小鼠肝组织中焦亡相关蛋白的表达水平。结果与Control组相比,Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平增加(P<0.01);miR-5088-5p表达水平降低(P<0.01);转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic并给予Hcy干预后,与Hcy组相比,miR-5088-5p NC+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达无差异,与miR-5088-5p NC+Hcy组相比,miR-5088-5p mimic+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05);与CBS^(+/+)小鼠相比,全自动生化分析仪结果显示CBS^(+/-)小鼠血清Hcy水平明显升高(P<0.01),免疫荧光染色结果显示CBS^(+/-)组小鼠肝脏中NLRP3、caspase 1、IL-1β荧光强度增高(P<0.01)。结论miR-5088-5p对同型半胱氨酸诱导的肝细胞焦亡具有保护作用。 展开更多

关键词 CBS小鼠 肝细胞 高同型半胱氨酸血症 MIRNA miR-5088-5p 焦亡

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瞬时感受电位通道6在同型半胱氨酸诱导的小鼠肾脏足细胞自噬中的作用

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作者 卢冠军 汪乐新 +12 位作者 赵静 刘超 熊建团 焦运 杨安宁 姜怡邓 田宇佳 徐遥琴 石青 刘莉 张亚兰 白志刚 李淑娟 《解放军医学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第12期1400-1407,共8页

目的探讨在同型半胱氨酸(Hcy)作用下瞬时感受电位通道6(TRPC6)对小鼠肾脏足细胞自噬的调控作用。方法将小鼠肾脏足细胞分为对照组与Hcy组(40、60、80、100μmol/L的Hcy刺激48 h),采用qRT-PCR检测TRPC6mRNA水平,筛选出Hcy的最佳浓度后,... 目的探讨在同型半胱氨酸(Hcy)作用下瞬时感受电位通道6(TRPC6)对小鼠肾脏足细胞自噬的调控作用。方法将小鼠肾脏足细胞分为对照组与Hcy组(40、60、80、100μmol/L的Hcy刺激48 h),采用qRT-PCR检测TRPC6mRNA水平,筛选出Hcy的最佳浓度后,后续均以此浓度进行实验。采用Western blotting检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ、p62,以及足细胞结构蛋白Nephrin、Podocin的表达水平;采用qRT-PCR、Western blotting及免疫荧光检测两组TRPC6 mRNA及蛋白的表达水平。转染过表达或干扰TRPC6的细胞分别设置为:(1)对照组(不做处理)、TRPC6过表达阴性对照组、TRPC6过表达组;(2)对照组(不做处理)、TRPC6干扰阴性对照组和TRPC6干扰组(si-1、si-2、si-3),并采用qRT-PCR检测TRPC6表达水平。再将过表达或干扰TRPC6后的细胞分别设置为:(1)对照组(不做处理)、Hcy组(加入80μmol/L Hcy)、TRPC6过表达对照+Hcy组、TRPC6过表达+Hcy组;(2)对照组(不做处理)、Hcy组、TRPC6干扰对照+Hcy组、TRPC6干扰+Hcy组,并采用Western blotting检测p62、LC3Ⅱ、TRPC6蛋白的表达水平。结果qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,TRPC6 mRNA表达水平随Hcy浓度增加而升高,其中80μmol/L Hcy干预后的表达水平最高,因此将80μmol/L作为Hcy的最佳干预浓度。此时,自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达水平升高、p62表达水平降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Hcy组中足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin的表达水平明显降低(P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,Hcy组中TRPC6 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与TRPC6过表达阴性对照组比较,TRPC6过表达组的TRPC6 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与TRPC6干扰阴性对照组比较,TRPC6干扰组的TRPC6 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与TRPC6过表达对照组相比,TRPC6过表达+Hcy组中自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达水平明显升高,p62表达水平明显降低(P<0.05);与TRPC6干扰对照+Hcy组相比,TRPC6干扰+Hcy组中自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达水平明显降低,p62表达水平明显升高(P<0.05)。结论Hcy可诱导小鼠肾脏足细胞自噬,抑制TRPC6的表达可明显减轻足细胞的自噬性损伤。 展开更多

关键词 足细胞自噬 同型半胱氨酸 瞬时感受电位通道6

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METTL3在同型半胱氨酸诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用

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作者 马凌桔 汪乐新 +7 位作者 迟宏扬 张竞文 彭红建 高春兰 姜怡邓 黄晖 杨力 马胜超 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第26期4221-4225,共5页

背景:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血症与胰岛β细胞功能密切相关,但其具体分子机制尚不完全明确。目的:探讨METTL3在Hcy诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用。方法:取第3,4代小鼠胰岛β细胞进行实验。①细胞模型建立和分组:对照组细... 背景:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血症与胰岛β细胞功能密切相关,但其具体分子机制尚不完全明确。目的:探讨METTL3在Hcy诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用。方法:取第3,4代小鼠胰岛β细胞进行实验。①细胞模型建立和分组:对照组细胞不加入Hcy,Hcy组细胞加入浓度为100µmol/L Hcy干预48h;②按Lipofectamine^(TM) 2000说明书将过表达质粒Ad-METTL3及si-METTL3转染小鼠胰岛β细胞,设计3种不同干扰片段,PCR验证、筛选出干扰效率最好的干扰片段;③转染后实验分组:对照组、Hcy组、Ad-NC(阴性对照)+Hcy组、Ad-METTL3+Hcy组、si-NC(阴性对照)+Hcy组和si-METTL3+Hcy组;④采用qRT-PCR及Western blot检测细胞中METTL3及细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;ELISA法测定胰岛素水平来评价胰岛β细胞胰岛素分泌能力;分别过表达和干扰METTL3后检测细胞自噬相关蛋白及胰岛素水平。结果与结论:①与对照组相比,Hcy组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平升高(P<0.05),而p62表达明显降低(P<0.05),胰岛素分泌能力明显下降(P<0.05);②与对照组相比,Hcy组中METTL3蛋白及mRNA水平表达均降低(P<0.05);③胰岛β细胞中沉默METTL3后,Hcy进一步上调了细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的表达(P<0.05),而p62表达显著下降(P<0.05),细胞中胰岛素水平增加(P<0.05);过表达METTL3后,Hcy则使LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低且p62表达则增高(P<0.05);④结论:METTL3参与了Hcy诱导的胰岛β细胞自噬调控,对胰岛素的分泌发挥着调控作用。 展开更多

关键词 N6-甲基腺苷甲基转移酶3 胰岛Β细胞 同型半胱氨酸 细胞自噬 LC3Ⅱ/Ⅰ

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特异性lncSLC25a6在同型半胱氨酸诱导的大鼠心肌细胞铜死亡中的作用

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作者 李淑娟 黄晖 +9 位作者 迟宏扬 汪乐新 何天宇 马福军 田彦成 赵彩齐 彭红建 姜怡邓 杨力 马胜超 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1399-1407,共9页

目的:探讨特异性长链非编码RNA SLC25a6(long noncoding RNA SLC25a6,lncSLC25a6)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的心肌细胞铜死亡中作用。方法:体外培养大鼠心肌细胞并分为对照(control)与Hcy组,干预细胞48 h后,采用Western blo... 目的:探讨特异性长链非编码RNA SLC25a6(long noncoding RNA SLC25a6,lncSLC25a6)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的心肌细胞铜死亡中作用。方法:体外培养大鼠心肌细胞并分为对照(control)与Hcy组,干预细胞48 h后,采用Western blot及免疫荧光染色方法检测铜死亡相关蛋白铁氧还蛋白1(ferredoxin 1,FDX1)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)等的表达水平;利用荧光染色检测心肌细胞氧化应激状态;采用铜离子试剂盒测定心肌细胞内Cu^(2+)水平;进一步将lncSLC25a6过表达后,分析Hcy对心肌细胞铜死亡相关蛋白表达的影响。结果:与control组相比,80μmol/L Hcy显著加速了心肌细胞损伤,且lncSLC25a6呈低表达(P<0.05)。Western blot检测结果显示:与control组相比,Hcy干预组FDX1表达水平明显降低(P<0.05),而HSP70表达水平明显增高(P<0.05),且Hcy组心肌细胞铜离子表达水平增高(P<0.05)。免疫荧光染色发现,Hcy组FDX1荧光强度明显减弱,HSP70的荧光强度明显增强;进一步过表达lncSLC25a6后,Hcy诱导的心肌细胞铜死亡显著缓解,细胞铜死亡相关蛋白FDX1呈高表达,HSP70呈低表达(P<0.05)。Pearson相关性分析发现,lncSLC25a6的表达水平与FDX1蛋白表达呈负相关(r=−0.676,P=0.046),而与HSP70表达则呈正相关(r=0.680,P=0.044)。结论:lncSLC25a6可显著缓解Hcy诱导的心肌细胞铜死亡,可作为Hcy诱导心肌损伤的潜在治疗靶点。 展开更多

关键词 lncSLC25a6 同型半胱氨酸 心肌细胞 铜死亡

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LncRNA SNHG1在同型半胱氨酸致足细胞焦亡中的作用

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作者 张正皓 马芳 +8 位作者 张晴 夏童童 刘虹麟 白志刚 卢冠军 张竞文 彭红建 姜怡邓 马胜超 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期476-482,共7页

目的探讨lncRNA SNHG1在同型半胱氨酸诱导足细胞焦亡中的作用。方法选取Cbs^(+/-)小鼠随机分成2组,设置正常饮食组(ND)和高蛋氨酸饮食组(HMD),Western blot检测Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3的蛋白表达水平。体外培养小鼠肾小球... 目的探讨lncRNA SNHG1在同型半胱氨酸诱导足细胞焦亡中的作用。方法选取Cbs^(+/-)小鼠随机分成2组,设置正常饮食组(ND)和高蛋氨酸饮食组(HMD),Western blot检测Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3的蛋白表达水平。体外培养小鼠肾小球足细胞,设置对照组(Control,0μmol/L Hcy)和同型半胱氨酸干预组(Hcy,80μmol/L Hcy);足细胞转染慢病毒后设置lncSNHG1过表达阴性对照组(OE-NC)和lncSNHG1过表达组(OE-SNHG1);lncSNHG1过表达阴性对照+同型半胱氨酸干预组(OE-NC+Hcy)和lncSNHG1过表达+同型半胱氨酸干预组(OE-SNHG1+Hcy),干预细胞48 h后,实时荧光定量PCR检测Hcy干预的足细胞中lncSNHG1表达水平;Western blot和免疫荧光技术检测足细胞中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1、NLRP3及GSDMD和GSDMD-N表达水平;ELISA检测足细胞中焦亡介导的炎症相关因子IL-1β和IL-18含量。结果(1)动物实验中:与正常饮食组(ND)相比,高蛋氨酸饮食组(HMD)中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3及GSDMD、GSDMD-N表达水平增高;(2)细胞实验中:与对照组(Control)相比,同型半胱氨酸干预组(Hcy)中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3及GSDMD、GSDMD-N表达水平增高,焦亡介导炎症因子IL-1β和IL-18含量增高;(3)细胞实验中:与对照组(Control)相比,同型半胱氨酸干预组(Hcy)中lncSNHG1表达水平增高;足细胞转染lncSNHG1慢病毒后,与Control组及OE-NC组相比,OE-SNHG1组lncSNHG1表达水平增高;(4)细胞实验中:与OE-NC+Hcy组相比,OE-SNHG1+Hcy组中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3及GSDMD、GSDMD-N表达水平增高,焦亡介导炎症因子IL-1β和IL-18含量增高。结论lncRNA SNHG1在Hcy诱导的足细胞焦亡过程中起到促进作用。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 足细胞 核仁小RNA宿主基因1 焦亡

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同型半胱氨酸经PI3K-AKT-mTOR信号通路对巨噬细胞自噬及脂质沉积的影响

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作者 胡舒彤 刘秋君 +6 位作者 马非亚 杨安宁 郝银菊 熊建团 焦运 姜怡邓 李桂忠 《宁夏医科大学学报》 2024年第2期109-117,共9页

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对巨噬细胞自噬及脂质沉积的影响。方法将18只雄性ApoE-/-小鼠分为对照组、Hcy组、Hcy+Rap组,通过蛋白质免疫印迹检测自噬相关蛋白LC3BⅡ、p62、PI3K-AKT-mTOR信号通路中总蛋白及磷酸化蛋白水平;采用mRFP-GFP-... 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对巨噬细胞自噬及脂质沉积的影响。方法将18只雄性ApoE-/-小鼠分为对照组、Hcy组、Hcy+Rap组,通过蛋白质免疫印迹检测自噬相关蛋白LC3BⅡ、p62、PI3K-AKT-mTOR信号通路中总蛋白及磷酸化蛋白水平;采用mRFP-GFP-LC3腺病毒感染细胞,观察自噬流的改变;Dil-ox-LDL染色及油红O染色检测Hcy对巨噬细胞内脂质沉积的影响;组织油红O染色观察小鼠主动脉根部斑块的脂质沉积情况;免疫组化检测小鼠主动脉根部斑块中巨噬细胞自噬改变。结果Western blot检测和自噬流实验结果显示,与对照组相比较,给予Hcy干预后,巨噬细胞自噬被抑制,PI3K、AKT、mTOR表达差异均无统计学意义(P均>0.05),但PI3K、AKT、mTOR磷酸化水平均升高(P均<0.05);与Hcy组相比较,Hcy+Rap组LC3BⅡ表达增高(P<0.05),p62表达降低(P<0.01);Dil-ox-LDL染色与油红O染色结果显示,与对照组相比较,Hcy组巨噬细胞内脂质沉积增加(P<0.01),而给予Rap干预后,细胞内脂质沉积减少(P<0.01);与对照组相比较,HMD组小鼠主动脉根部斑块中脂质沉积增多(P<0.01),注射Rap后,脂质沉积减少(P<0.01);免疫组化结果显示,与对照组相比较,HMD组自噬被抑制,注射Rap后,自噬得到恢复。结论Hcy能够抑制巨噬细胞自噬并促进脂质沉积,与PI3K-AKT-mTOR信息通路有关。 展开更多

关键词 巨噬细胞 同型半胱氨酸 PI3K-AKT-mTOR信号通路 自噬 动脉粥样硬化 雷帕霉素

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高同型半胱氨酸通过Notch1/Hes1信号通路促进HT22细胞自噬和凋亡 被引量：1

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作者 张竞文 何静 +3 位作者 米晓娟 许贤瑞 田英 燕茹 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1796-1803,共8页

目的探讨高同型半胱氨酸(HHcy)引起神经细胞损伤的相关机制。方法采用HT22细胞,分为空白对照组(简称0组),高同型半胱氨酸组(Hcy 100μmol/L,简称100组),高同型半胱氨酸维生素B干预组(Hcy 100μmol/L+叶酸+维生素B12,简称100+fv组),空白... 目的探讨高同型半胱氨酸(HHcy)引起神经细胞损伤的相关机制。方法采用HT22细胞,分为空白对照组(简称0组),高同型半胱氨酸组(Hcy 100μmol/L,简称100组),高同型半胱氨酸维生素B干预组(Hcy 100μmol/L+叶酸+维生素B12,简称100+fv组),空白对照+叶酸+维生素B12组(简称0+fv组)。通过透射电镜和流式细胞术观察自噬及凋亡;Western blotting、Real-time PCR检测Hes1、Hes5、Notch1、Jagged1、Bcl-2、Bax、P62、LC3II/LC3I表达。结果培养48 h后,高同型半胱氨酸组(100组)中死亡细胞明显增加(P<0.05)。流式细胞检测结果显示,高同型半胱氨酸组凋亡细胞比例均高于0组、100+fv组和0+fv组(P<0.05)。透射电镜观察显示,在高同型半胱氨酸组,线粒体肿胀、空泡化,自噬体增加。Western blot显示,在高同型半胱氨酸组,Bax/Bcl-2比值明显高于对照组和100+fv组(P<0.05);P62相对值明显低于对照组(P<0.05);LC3II/LC3I比值明显高于对照组和100+fv组(P<0.05);HES1、HES5、Notch1和Jagged1蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。Real-time PCR检测结果显示,在高同型半胱氨酸组,LC3 mRNA、Beclin1 mRNA明显高于对照组和100+fv组,P62mRNA明显低于100+fv组(P<0.05);Hes1 mRNA和Hes5 mRNA明显低于对照组、100+fv组和0+fv组(P<0.05)。Hes1 siRNA干扰后,Hes1和Jagged1表达量明显低于对照组,Notch1表达量无显著性差异(P>0.05)。结论高同型半胱氨酸能诱导HT22细胞自噬和凋亡增加,伴有Hes1和Jagged1基因表达下调。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 细胞 自噬 凋亡 NOTCH1 HES1 JAGGED1

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Notch1/Hes1信号通路在调控低分化胃腺癌细胞钙离子和侵袭能力中的作用

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作者 张竞文 黄菱燕 +2 位作者 秦憬 吕怀盛 景丽 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期133-138,共6页

目的探讨Notch1/Hes1信号通路对胃癌细胞钙离子水平的影响及其与侵袭的关系。方法采用免疫组化法检测32例原发性低分化胃腺癌组织及32例癌旁正常组织中Notch1、Hes1、Calpain-1和E-cadherin蛋白的表达。将MGC-803细胞分为对照组、Lipofe... 目的探讨Notch1/Hes1信号通路对胃癌细胞钙离子水平的影响及其与侵袭的关系。方法采用免疫组化法检测32例原发性低分化胃腺癌组织及32例癌旁正常组织中Notch1、Hes1、Calpain-1和E-cadherin蛋白的表达。将MGC-803细胞分为对照组、Lipofectamine 2000组、Notch1 siRNA组和Hes1 siRNA组,采用Transwell法对比分析Notch1和Hes1基因沉默MGC-803细胞侵袭能力。应用Flou-4实验检测细胞钙离子水平。运用Western blot法检测Notch1、Hes1、Calpain-1和E-cadherin蛋白的表达。结果 32例低分化胃腺癌组织中Notch1、Hes1、Calpain-1表达(93.75%、96.88%、96.88%)明显高于癌旁正常组织(21.88%、18.75%、25.0%)(P<0.05),E-cadherin表达(25.0%)明显低于癌旁正常组织(93.75%,P<0.05)。MGC-803细胞Transwell和Flou-4实验可见,Notch1 siRNA组和Hes1 siRNA组癌细胞的迁移量明显低于对照组(P<0.05),癌细胞钙离子水平也明显低于对照组(P<0.05)。Western blot检测显示,Notch1 siRNA组和Hes1 siRNA组癌细胞Calpain-1和vimentin的相对含量低于对照组(P<0.05),而E-cadherin相对含量高于对照组(P<0.05)。结论低分化胃腺癌细胞侵袭能力与Notch1/Hes1蛋白及细胞钙离子有关,Notch1/Hes1信号通路参与Calpain-1相关的细胞钙离子调控。 展开更多

关键词 胃肿瘤 NOTCH1 HES1 钙离子 Calpain-1 侵袭

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高同型半胱氨酸血症对ApoE^(-/-)小鼠脑组织的损伤

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作者 张竞文 燕茹 +4 位作者 马艳梅 杨兰 米晓娟 田英 丛广志 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2023年第5期537-544,共8页

目的:探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对小鼠神经损伤的病理学基础。方法:ApoE^(-/-)小鼠分为对照组(control)、HHcy组(HHcy)和HHcy、叶酸及维生素B12干预组(MFB)。通过高蛋氨酸饮食诱发HHcy小鼠模型,采用组织学、组织化学、电子显微镜等... 目的:探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对小鼠神经损伤的病理学基础。方法:ApoE^(-/-)小鼠分为对照组(control)、HHcy组(HHcy)和HHcy、叶酸及维生素B12干预组(MFB)。通过高蛋氨酸饮食诱发HHcy小鼠模型,采用组织学、组织化学、电子显微镜等观察小鼠脑组织结构和神经细胞超微结构变化,免疫组化染色观察nestin和一氧化氮合酶(NOS)表达。结果:高蛋氨酸饮食导致ApoE^(-/-)小鼠血浆同型半胱氨酸水平显著升高,脑组织基本结构未见明显异常,对照组、HHcy组和MFB组之间尼氏体平均光密度值无显著性差异。免疫组化染色可见,对照组、HHcy组和MFB组脑微血管分布均匀,未见明显差异。超微结构可见,HHcy组脑毛细血管内皮细胞出现多个微绒毛样突起;HHcy组神经元自噬体及空泡化线粒体显著多于对照组和HHcy组(P<0.05)。HHcy组和MFB组TUNEL阳性细胞比例明显多于对照组(P<0.05)。免疫组化可见,HHcy组室管膜下区nestin阳性细胞比例明显低于对照组(P<0.05),MFB组与对照组及HHcy组之间nestin阳性细胞比例无显著差异;与对照组相比,HHcy组和MFB组额叶皮质nNOS阳性细胞比例明显降低(P<0.05),iNOS阳性细胞比例显著升高(P<0.05)。结论:高同型半胱氨酸可诱导小鼠神经细胞氧化应激、自噬和凋亡增加、室管膜下区神经干细胞储备减少。 展开更多

关键词 自噬 凋亡 神经细胞 高同型半胱氨酸血症 超微结构 小鼠

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LncRNA H19调控肾小球足细胞焦亡中作用 被引量：10

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作者 汪乐新 刘超 +10 位作者 马天龙 杨安宁 熊建团 吴凯 焦运 白志刚 姜怡邓 马胜超 张旭 卢冠军 无 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第1期12-20,共9页

目的探讨lncRNA H19在高糖调控肾小球足细胞焦亡中的作用。方法qRT-PCR方法检测高糖中lncRNA H19本底表达;Western blot检测高糖中肾足细胞结构性相关蛋白Nephrin、Podocin表达;Western blot及免疫荧光方法检测细胞焦亡相关蛋白NLRP3、C... 目的探讨lncRNA H19在高糖调控肾小球足细胞焦亡中的作用。方法qRT-PCR方法检测高糖中lncRNA H19本底表达;Western blot检测高糖中肾足细胞结构性相关蛋白Nephrin、Podocin表达;Western blot及免疫荧光方法检测细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达水平;qRT-PCR检测转染Ad lncRNA H19及si lncRNA H19后lncRNA H19的mRNA表达,细胞转染分别设置:(1)对照组(不做处理)、lncRNA H19过表达阴性对照组、lncRNA H19过表达组;(2)对照组(不做处理)、lncRNA H19干扰阴性对照组和lncRNA H19干扰组(si-lncRNA H19-1、si-lncRNA H19-2、si-lncRNA H19-3);Western blot检测转染Ad lncRNA H19及si lncRNA H19后NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平,细胞转染分别设置:(1)对照组(不做处理)、高糖组、lncRNA H19过表达对照+高糖组、lncRNA H19过表达+高糖组;(2)对照组(不做处理)、高糖组、lncRNA H19干扰对照+高糖组、lncRNA H19干扰+高糖组。结果(1)与对照组(不做处理)相比,lncRNA H19在高糖诱导肾足细胞损伤过程中呈低表达(P<0.05),而lncRNA H19低表达可调控细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达增高(P<0.05),lncRNA H19表达与细胞焦亡相关蛋白表达两者呈负相关;(2)与对照组(不做处理)相比,在高糖诱导肾足细胞损伤过程中,肾足细胞结构蛋白Nephrin、Podocin表达水平降低(P<0.05);(3)与lncRNA H19过表达对照+高糖组相比,过表达lncRNA H19后,缓解高糖诱导肾足细胞焦亡,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β呈低表达(P<0.05);(4)与lncRNA H19干扰对照+高糖组相比,干扰lncRNA H19后,促进高糖诱导足细胞焦亡,而焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β呈高表达(P<0.05)。结论在高糖诱导足细胞焦亡过程中lncRNA H19具有可调控细胞焦亡相关蛋白表达,为未来治疗糖尿病肾病提供一定的理论依据。 展开更多

关键词 LncRNAH19 糖尿病肾病 肾足细胞损伤 细胞焦亡

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