抗新型冠状病毒受体结合域IgG定量ELISA检测方法的建立、验证及应用 被引量：1

1

作者 韩韧 李陶敬 +12 位作者 何彦林 侯继峰 周志军 张化俊 彭诚 高晓霄 邓琨 喻剑虹 郑宵蓓 龚钦 冯璐 邢延涛 李策生 《国际生物制品学杂志》 CAS 2021年第5期248-254,共7页

目的初步建立抗新型冠状病毒受体结合域(receptor-binding domain,RBD)IgG定量ELISA检测方法,用于COVID19静注人免疫球蛋白生产中原料血浆、原液和成品的效价检测。方法将已知的具有中和活性的COVID19康复者恢复期血浆作为参比标准品,选... 目的初步建立抗新型冠状病毒受体结合域(receptor-binding domain,RBD)IgG定量ELISA检测方法,用于COVID19静注人免疫球蛋白生产中原料血浆、原液和成品的效价检测。方法将已知的具有中和活性的COVID19康复者恢复期血浆作为参比标准品,选用RBD抗原包被的间接ELISA试剂盒,采用双对数拟合曲线建立定量ELISA,确定其最佳线性范围;制备室内质控品,并对其进行标定;对该方法进行稀释线性、平行性、准确度、精密度验证。用建立的方法对3批COVID静注人免疫球蛋白的原料血浆、原液及成品进行检测,并与化学发光法及中和实验结果进行相关性分析。结果确定标准曲线线性范围为稀释倍数1〜8、批内准确度88.50%〜108.58%,批间准确度1IKI.63%〜103.98%;批内精密度3.83%〜14.68%,批间精密度5.67%〜13.15%;标准品和原料血浆、原液、半成品的平行性好。ELISA效价与化学发光法及中和实验相关性较好。结论成功建立抗新型冠状病毒RBD IgG定量ELISA检测方法,可用于COVID静注人免疫球蛋白的效价检测,作为内部放行方法。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 新型冠状病毒肺炎 中和抗体 恢复期血浆 免疫球蛋白类 静脉内 酶联免疫吸附测定

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不同种类预过滤膜对纳米膜（DV20 nm）过滤人免疫球蛋白效果的影响 被引量：3

2

作者 彭焱 李陶敬 +2 位作者 邹浩勇 陈克金 胡勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第12期1418-1420,1424,共4页

目的比较不同种类预过滤膜对纳米膜(DV20 nm)过滤人免疫球蛋白效果的影响。方法以A、B、C厂家生产的纳米膜(DV20 nm)和不同预过滤膜对1 000 mL 5. 3%IgG样品进行膜通量筛选实验,比较蛋白回收率及通量;应用筛选的预过滤膜和纳米膜对样品... 目的比较不同种类预过滤膜对纳米膜(DV20 nm)过滤人免疫球蛋白效果的影响。方法以A、B、C厂家生产的纳米膜(DV20 nm)和不同预过滤膜对1 000 mL 5. 3%IgG样品进行膜通量筛选实验,比较蛋白回收率及通量;应用筛选的预过滤膜和纳米膜对样品中滴度为6. 50 LgTCID50/0.1 mL猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)进行去除病毒验证。结果选取A厂Minisart预过滤膜,120 min通量为7. 68 L/(m^2·h),蛋白回收率为96. 1%;B厂FTKDJL预过滤膜,120、300及400 min通量分别为9.87、3. 93和1. 85 L/(m^2·h),蛋白回收率为97. 6%。A及B厂的纳米膜过滤约1 200 min,通量分别为2. 39和3. 74 L/(m^2·h),指示病毒PPV下降滴度分别为≥4. 63和≥4.25 LgTCID50/0. 1 mL,均能在有效过滤量之内完全去除PPV,蛋白回收率均在96%以上。结论不同预过滤膜对纳米膜过滤通量有明显影响,筛选的预过滤膜及纳米膜均可有效去除PPV,可用于人免疫球蛋白规模化生产工艺。 展开更多

关键词 预过滤膜 纳米膜 人免疫球蛋白 猪细小病毒 通量

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一种抗新型冠状病毒灭活血浆的制备及质量标准的建立 被引量：1

3

作者 胡勇 余鼎 +31 位作者 何彦林 段凯 杨汇川 侯继锋 梁洪 彭焱 周志军 林连珍 吴晓 喻剑虹 韩韧 梁小龙 邢延涛 刘莹 郑宵蓓 卢奎林 吴强 江砚芳 丁亚凌 李伟 张勇 朱晨 邓志军 陈克金 詹骞 李陶敬 王泽鋆 孟胜利 卢佳 杨晓明 李策生 付道兴 《国际生物制品学杂志》 CAS 2021年第1期17-21,共5页

目的建立一种以新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆为原料制备抗新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)灭活血浆的工艺及其质量标准。方法采集2020年1—3月期间中国武汉441人份COVID-19康复者捐献的恢复期血浆,开展2... 目的建立一种以新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆为原料制备抗新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)灭活血浆的工艺及其质量标准。方法采集2020年1—3月期间中国武汉441人份COVID-19康复者捐献的恢复期血浆,开展2019-nCoV、HIV和梅毒螺旋体等病原体的筛查,进行亚甲蓝光照灭活,并通过检测蛋白含量、抗2019-nCoV抗体、凝血因子Ⅷ活性等,判断亚甲蓝光照灭活对血浆的影响并建立质量标准。结果亚甲蓝光照灭活前后灭活血浆的蛋白含量没有发生明显变化,血浆的凝血因子Ⅷ含量≥0.50 IU/ml,抗体滴度未出现明显下降,各项检测结果均符合质量要求。结论确立了以COVID-19康复者恢复期血浆制备抗2019-nCoV灭活血浆的关键质量控制及工艺参数。 展开更多

关键词 新型冠状病毒肺炎 新型冠状病毒 亚甲蓝 病毒灭活

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发色底物检测法用于人纤维蛋白溶酶原纯化工艺的可行性分析 被引量：3

4

作者 胡勇 彭焱 +5 位作者 陈克金 詹骞 周雁翔 岳胜兰 容胜 周志军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第10期1131-1137,共7页

目的分析发光底物检测法用于人纤维蛋白溶酶原(plasminogen,Pg)纯化工艺的可行性。方法采用纤溶酶原测定试剂盒对ACL7000血凝仪运行发色底物法的性能进行确认;并对该方法的线性范围、准确度、精密度、选择性进行验证;应用Softmax及Stati... 目的分析发光底物检测法用于人纤维蛋白溶酶原(plasminogen,Pg)纯化工艺的可行性。方法采用纤溶酶原测定试剂盒对ACL7000血凝仪运行发色底物法的性能进行确认;并对该方法的线性范围、准确度、精密度、选择性进行验证;应用Softmax及Statistic软件分析定标血浆及Pg纯化样品检测结果的平行性;采用验证的方法检测Pg全层析工艺样品的效价及目标样品存贮稳定性。结果ACL7000血凝仪运行发色底物法的性能稳定。定标血浆标准曲线线性范围为0.128~1.28 U/mL,稀释样品回收率在92%~103%之间,R2≥0.99;定标血浆的高、中、低值、检测下限及正常质控血浆(control plasma normal,CPN)效价回收率批内及批间分别在91%~108%和94%~107%之间,批内及批间CV分别在0.5%~1.9%和0.3%~1.4%之间;Pg纯化各段层析缓冲液所含特殊组分除1%Tween80+0.3%磷酸三丁酯外对Pg效价检测无影响。纯化样品Pg效价检测曲线与定标血浆曲线平行。全层析工艺Pg半成品的比活性达8 U/mg以上,效价总回收率达50%以上;Pg亲和层析洗脱液在-30℃保存42 d、18~25℃及2~8℃保存7 d效价稳定,Pg半成品在-30℃保存68 d、18~25℃及2~8℃保存38 h效价稳定。结论纤溶酶原测定试剂盒(发色底物法)具有较好的线性范围、准确度、精密度和选择性,ACL7000血凝仪运行该方法可用于Pg全层析工艺样品的效价检测,本实验为Pg纯化工艺研究奠定了基础。 展开更多

关键词 人纤维蛋白溶酶原 发色底物法 效价 验证

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SARS-Co V-2抗原检测用样品盘的建立及其在胶体金测试卡研发和质量评估中的应用 被引量：1

5

作者 施金荣 周志军 +6 位作者 程小玲 杨爽 李茜 罗敏 石艳红 李策生 李陶敬 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期293-298,303,共7页

目的建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)抗原检测用样品盘,并应用于SARS-CoV-2抗原胶体金测试卡的研发及质量评估。方法以12种非SARS-CoV-2灭活疫苗原液及黏蛋白作为阴性样品... 目的建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)抗原检测用样品盘,并应用于SARS-CoV-2抗原胶体金测试卡的研发及质量评估。方法以12种非SARS-CoV-2灭活疫苗原液及黏蛋白作为阴性样品盘,重组SARS-CoV-2 N蛋白、2批SARS-CoV-2灭活疫苗原液(B1、B2)及1批灭活SARS-CoV-2培养液(S1)作为阳性样品盘,二者结合建立SARS-CoV-2抗原检测用样品盘。采用B1对4个厂家(A、B、C、D)的胶体金测试卡进行阳性评估,并对厂家A胶体金测试卡的研发进行全程检测。通过阴性样品盘评价5个厂家(A、C、E、F、G)胶体金测试卡的特异性,阳性样品盘(B2、S1和重组N蛋白)评价其灵敏度。采用市售SARS-CoV-2核酸检测试剂盒检测灭活SARS-CoV-2培养物S1,并与厂家A的胶体金测试卡进行对比。结果通过阳性评估,确定N蛋白为检测SARS-CoV-2抗原的主要位点。厂家A研发的胶体金测试卡对B1的灵敏度达1:2×10^(3)。5个厂家的胶体金测试卡对非SARS-CoV-2灭活疫苗原液无交叉反应,表明特异性均良好。厂家A的胶体金测试卡对B2的灵敏达1:10^(6),对S1的灵敏度达1:2×10^(7);厂家E、F、G的胶体金测试卡对B2的灵敏度达1:10^(3)以上,对S1的灵敏度达1:10^(4)~1:10^(5);厂家C的胶体金测试卡对B2的灵敏度达1:10^(4),对S1的灵敏度达1:10^(6)。厂家A的胶体金测试卡对重组N蛋白的灵敏度为100 pg/mL,其他4家均为10 pg/mL。市售核酸检测试剂盒对S1的灵敏度为1:10^(7),与厂家A的胶体金测试卡(1:2×10^(7))相当。结论成功建立了SARS-CoV-2抗原检测用样本盘,其具有良好的特异性及灵敏性,可用于SARS-CoV-2抗原胶体金测试卡的研发及质量评估。 展开更多

关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 胶体金测试卡 抗原检测样品盘 质量评估

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紫外-可见分光光度法检测高纯度人C1酯酶抑制剂蛋白质含量的经验公式 被引量：1

6

作者 汪菲菲 李娟 +7 位作者 陈克金 朱晨 纪德铭 王上 彭焱 李策生 胡勇 周志军 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第3期28-35,共8页

目的建立高纯度人C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor,C1-INH)蛋白质含量(质量浓度)检测的紫外-可见光分光光度法(简称A_(280 nm)法),得到双对数方程的经验公式,用于C1-INH精纯阶段含目标蛋白样品的蛋白质含量在线检测。方法以1批高效... 目的建立高纯度人C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor,C1-INH)蛋白质含量(质量浓度)检测的紫外-可见光分光光度法(简称A_(280 nm)法),得到双对数方程的经验公式,用于C1-INH精纯阶段含目标蛋白样品的蛋白质含量在线检测。方法以1批高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)纯度98.49%的C1-INH原液作为对照品,用注射用水稀释获得不同质量浓度的稀释品,分别检测稀释品A_(280 nm)值,以稀释品的A_(280 nm)值与理论质量浓度进行不同方程的线性拟合,选取回收率在理论值100%±10%、R^(2)>0.99的质量浓度区间建立最佳拟合方程。在此线性范围内,用原始值和消光值分别拟合得到不同的方程,对2种拟合方程的准确度、精密度和稳定性进行验证。通过原始值均值方程和不同基质液的检测均值来建立经验公式,用该经验公式计算不同批次纯化工艺中间样品的蛋白质质量浓度并与免疫比浊法和凯氏定氮法的检测结果进行比较,确定其准确性。用该经验公式指导C1-INH精纯样品的检测。结果建立的A_(280 nm)法采用双对数方程拟合标准曲线的线性范围为0.214~3.567 mg/mL;在此线性范围内,用原始值和消光值分别拟合双对数方程,2个标准曲线的重复性和稳定性均较好,且高、中、低值质控品及检测下限的准确度(即回收率)<100%±7%,精密度CV<3%。含目标蛋白质的多种基质液按照原始均值方程计算得到对应的蛋白质质量浓度在0.044~0.064 mg/mL,均值为0.051 mg/mL;经验公式为:蛋白质质量浓度x={10(lg(y)+0.3820.764)-0.051}×稀释倍数,用该公式计算的添加了对照品的各基质的回收率在96.636%~109.533%。检测不同批次纯化工艺中间样品的结果显示,对于精纯样品,该经验公式与凯氏定氮法的结果比值在0.93~1.12,免疫比浊法结果与凯氏定氮法的结果比值在1.19~2.33。用该经验公式计算的不同精纯阶段中间样品的结果与凯氏定氮法结果更接近。结论建立的A_(280 nm)法经验公式可用于精纯阶段的高纯度C1-INH样品的蛋白质含量在线快速检测。 展开更多

关键词 蛋白质含量检测的紫外-可见光分光光度法 免疫比浊法 凯氏定氮法 人C1酯酶抑制剂 线性范围

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新型冠状病毒胶体金检测卡产品的性能评估

7

作者 朱辉煌 曹中森 +2 位作者 曹家敏 胡征 周志军 《生物技术》 CAS 2023年第4期476-481,共6页

[目的]参考新型冠状病毒抗原/抗体检测试剂注册技术审评要点,对新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)胶体金免疫层析检测卡的产品性能进行评估。[方法]通过双抗体制备的胶体金免疫层析检测卡,针... [目的]参考新型冠状病毒抗原/抗体检测试剂注册技术审评要点,对新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)胶体金免疫层析检测卡的产品性能进行评估。[方法]通过双抗体制备的胶体金免疫层析检测卡,针对其检测限、特异性、稳定性等方面进行测试。[结果]检测卡产品对新型冠状病毒N蛋白的灵敏度(最低检测限)为50 ng/mL;检测10种呼吸道重要病原菌、12种病毒无阳性反应;检测结果不受内源性、外源性干扰物质的影响;试纸在室温保存1 a仍然具有良好的稳定性;且同一批次内、3个批次间稳定性良好。[结论]制备的胶体金免疫层析检测卡产品,检测22种非新型冠状病毒结果为阴性,具有较高特异性;检测结果不受25种干扰物质影响;产品批内、批间质量稳定,可在15 min内获取检测结果。产品性能指标符合评审要求,可进行临床试验验证对真病毒的特异性与灵敏性。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 胶体金免疫层析检测卡 灵敏度 特异性 干扰试验 稳定性

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COVID-19康复者恢复期血浆及COVID-19静注人免疫球蛋白的IgG亚类检测分析 被引量：3

8

作者 邢延涛 韩韧 +12 位作者 梁小龙 曾双迎 黄锡安 彭焱 高斌 王霖慧 周志军 梅峰 吴强 喻剑虹 胡勇 何彦林 李策生 《国际生物制品学杂志》 CAS 2021年第4期181-185,共5页

目的探讨COVID-19康复者恢复期血浆及COVID-19静注人免疫球蛋白(human intravenous immunoglobulin,IVIG)(COVID-19-IVIG)IgG及亚类的水平。方法选择2020年2月至3月国药集团武汉血液制品有限公司采集的COVID-19康复者恢复期血浆及制备的... 目的探讨COVID-19康复者恢复期血浆及COVID-19静注人免疫球蛋白(human intravenous immunoglobulin,IVIG)(COVID-19-IVIG)IgG及亚类的水平。方法选择2020年2月至3月国药集团武汉血液制品有限公司采集的COVID-19康复者恢复期血浆及制备的COVID-19-IVIG作为研究组,选择健康者单采血浆及IVIG作为对照组。采用免疫比浊法检测并比较免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)及IgG亚类水平。分析COVID-19-IVIG中IgG亚类与其他蛋白之间的相关性。结果健康者单采血浆的IgG3、IgG4水平显著高于恢复期血浆(P<0.05),但IgG1、IgG2水平差异无统计学意义(P>0.05)。恢复期血浆IgM水平与血型〔相关系数(r)=0.649〕、抗体效价(r=0.696)呈正相关(P<0.05),IgG1(r=0.745)、IgG2(r=0.952)水平与IgG呈正相关(P<0.05)。COVID-19-IVIG的IgG1/∑^(4)_(i)=1 IgGn显著高于恢复期血浆(t=3.633,P<0.05),而IgG4/∑^(4)_(i)=1 IgGn显著低于康复者混合血浆(t=-4.899,P<0.05),两组间IgG2/∑^(4)_(i)=1 IgGn和IgG3/∑^(4)_(i)=1 IgGn差异无统计学意义(t值分别为-0.974和-0.280,P值均大于0.05)。COVID-19-IVIG与IVIG的IgG亚类分布差异无统计学意义(P>0.05)。在COVID-19-IVIG中,仅IgG2水平与α2巨球蛋白呈负相关(P<0.05)。结论恢复期血浆IgG亚类水平与健康者单采血浆有一定差异。COVID-19-IVIG制备过程中存在IgG亚类水平的变化,COVID-19-IVIG IgG亚类齐全,与IVIG IgG亚类水平相近。 展开更多

关键词 新型冠状病毒肺炎 康复者恢复期血浆 免疫球蛋白G 免疫球蛋白亚类

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新型冠状病毒肺炎康复者恢复期血浆中新型冠状病毒核酸检测方法的验证 被引量：3

9

作者 王月 喻剑虹 +13 位作者 刘莹 罗艳 郭佳茹 张林林 李璞 赵传波 陈玲 向阳 张雪 陈鄂湘 彭干 李耀雄 何彦林 李策生 《国际生物制品学杂志》 CAS 2021年第1期7-12,共6页

目的对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆中新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)核酸检测方法进行系统性验证。方法根据血浆样本实际情况,并结合试剂盒要求,建立COVID-19康复者恢复期血浆中2019-nCoV核酸的实时... 目的对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆中新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)核酸检测方法进行系统性验证。方法根据血浆样本实际情况,并结合试剂盒要求,建立COVID-19康复者恢复期血浆中2019-nCoV核酸的实时荧光定量PCR检测方法,并从专属性、检测限(limit of detection, LOD)、重复性及中间精密度对该方法进行系统性的验证,对20份COVID-19康复者恢复期血浆样本进行性能确认。结果专属性:阳性样本及阴性样本均能被有效检出;检测限:1×LOD~2×LOD企业参考品19次检测开放阅读框1a/b和/或核衣壳蛋白基因为阳性;重复性和中间精密度:两种阳性对照基因以及内部质控在不同荧光通道的循环阈值的相对标准偏差均符合要求。性能确认:康复者恢复期血浆2019-nCoV核酸检测结果均为阴性。结论该检测方法专属性强、稳定可靠、重复性好,适用于COVID-19康复者恢复期血浆2019-nCoV核酸检测。 展开更多

关键词 新型冠状病毒肺炎 新型冠状病毒 核酸检测 恢复期血浆

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人C1酯酶抑制剂初步纯化过程pH值和聚乙二醇含量的优化 被引量：1

10

作者 纪德铭 彭焱 +5 位作者 詹骞 周志军 汪菲菲 陈克金 胡勇 李策生 《国际生物制品学杂志》 CAS 2020年第3期126-131,共6页

目的探讨pH值、聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)含量和离心条件对PEG4000粉末用于去除人C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor,C1-INH)制备原料中的IgM效果的影响,并通过对羧甲基(carboxymethyl,CM)离子交换层析中洗脱盐离子浓度的筛... 目的探讨pH值、聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)含量和离心条件对PEG4000粉末用于去除人C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor,C1-INH)制备原料中的IgM效果的影响,并通过对羧甲基(carboxymethyl,CM)离子交换层析中洗脱盐离子浓度的筛选,分离活性与非活性C1-INH。方法向不同pH值的C1-INH制备原料中加入不同质量分数的PEG4000,于不同条件下离心后,用特定蛋白检测仪对离心后上清液中IgM和C1-INH含量进行检测,确定PEG沉淀法纯化C1-INH的最佳条件。将离心后上清液调节pH后作为CM离子交换层析上样样品,使用不同盐离子浓度的洗脱液对活性C1-INH进行分离,确定最佳的盐离子浓度。结果在弱酸性pH(6.8)下,当PEG4000质量分数为12%,离心条件15000×g、25℃、20 min时,IgM去除率>99%,且C1-INH的回收率>80%;在盐离子浓度为200 mmol/L时,产物中C1-INH的比活性最大(4.43 IU/mg),且绝大多数杂质蛋白得以去除。结论优化条件下,PEG4000能有效去除C1-INH制备原料中的IgM,且能保持较高的C1-INH回收率;CM离子交换层析能对活性与非活性C1-INH进行有效分离,并去除大多数杂质蛋白。 展开更多

关键词 聚乙烯二醇类 PH值 离心法 色谱法 离子交换 羧甲基纤维素钠 人C1酯酶抑制剂

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人C1酯酶抑制剂抗原含量ELISA检测方法的建立、验证及应用

11

作者 李娟 汪菲菲 +6 位作者 彭焱 陈克金 朱晨 纪德铭 王上 胡勇 周志军 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第2期25-33,共9页

目的 建立C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor, C1-INH)抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,验证后用于C1-INH纯化工艺摸索。方法 用羊抗人C1-INH抗体作为捕获抗体,用过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人C1-INH抗体作为检测抗体,进行棋盘滴定... 目的 建立C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor, C1-INH)抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,验证后用于C1-INH纯化工艺摸索。方法 用羊抗人C1-INH抗体作为捕获抗体,用过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人C1-INH抗体作为检测抗体,进行棋盘滴定初步确定捕获抗体的工作质量浓度,用西门子血浆标准品进行系列稀释作为标准品经过2轮实验来确定拟合曲线和线性范围及检测抗体的工作质量浓度,用血浆标准品标定电泳C1-INH标准品(电泳纯度>92%),分析与血浆标准品的平行性来选择本方法最终使用的标准品,最终建立了C1-INH抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法。对此方法进行线性、准确度、精密度、加样回收率、电泳标准品稳定性的验证。将验证后的方法用于C1-INH纯化工艺的摸索及产品质量分析,并与特定蛋白检测仪的结果进行比较。结果 捕获抗体质量浓度为400.000 ng/mL,检测抗体质量浓度为400.000 ng/mL,标准曲线采用四参数方程拟合,电泳标准品的质量浓度为0.895 mg/mL,血浆标准品作为本方法标准品;标准曲线的线性范围为1.560~100.000 ng/mL,各质量浓度标准品回收率在83.35%~112.19%,CV<15.00%,R^(2)≥0.990;不同质量浓度质控品检测结果的批内准确度在91.90%~113.14%,批间准确度在95.93%~106.10%,批内CV在1.00%~6.70%,批间CV在2.92%~6.54%。样品添加实验的回收率在93.37%~106.44%。-25℃冻存的电泳标准品可冻融3次使用,2~8℃可保存1周;加入等体积甘油后可以在-10~-20℃保存备用。结论 本方法具有良好的线性、准确度和精密度。用该方法进行C1-INH的抗原含量检测可作为纯化工艺内部质量控制指标,主要用于工艺摸索中低质量浓度C1-INH的抗原含量检测。 展开更多

关键词 C1-INH抗原含量 双抗体夹心ELISA 棋盘滴定 验证

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包被抗原种类对抗新型冠状病毒抗体胶体金测试卡检测质量的影响

12

作者 胡勇 周志军 +8 位作者 岳胜兰 冯璐 林连珍 梅宇 谢勇 周东波 何彦林 李陶敬 李策生 《国际生物制品学杂志》 CAS 2021年第3期129-132,共4页

目的考察包被不同种类的胶体金标记(金标)抗原对抗新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)抗体快速检测测试卡检测质量的影响。方法采用抗2019-nCoV抗体样本盘检测厂家L包被有不同金标抗原的胶体金测试卡,比较产品的灵敏度、... 目的考察包被不同种类的胶体金标记(金标)抗原对抗新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)抗体快速检测测试卡检测质量的影响。方法采用抗2019-nCoV抗体样本盘检测厂家L包被有不同金标抗原的胶体金测试卡,比较产品的灵敏度、特异度、准确度和正确指数,暂时以准确度>95%、正确指数>0.85为合格标准。结果厂家L的6个批次分别包被有重组2019-nCoV的刺突(spike,S)+核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白(L002)、受体结合域(receptor-binding domain,RBD)+N蛋白(L003)、N蛋白(L004)、RBD蛋白(L006)、S蛋白(L007)、N+S蛋白(L008)的测试卡,检测IgG的准确度/正确指数分别为98.38%/0.966、97.30%/0.946、97.84%/0.954、90.82%/0.873、97.86%/0.958、95.72%/0.919;检测IgM的准确度/正确指数分别为90.51%/0.736、95.57%/0.890、73.10%/0.298、68.37%/0.331、83.96%/0.533、87.17%/0.658。结论所有金标抗原包被的测试卡检测IgG均合格,只有RBD与N蛋白组合的包被金标抗原测试卡检测IgM合格,通过优化包被的金标抗原种类可提高测试卡检测IgM的质量。 展开更多

关键词 胶体金测试卡 新型冠状病毒 免疫球蛋白M 免疫球蛋白G 准确度 正确指数

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