牛血清中27kDa蛋白的免疫学特性研究 被引量：2

1

作者 邵先安 沈燕 +3 位作者 徐薇 王缨 胡新美 熊思东 《中国病毒学》 CSCD 2004年第1期6-9,共4页

为探讨牛血清中存在的HBsAg样蛋白的性质,给HBV的发病机制、治疗、预防等研究提供依据,我们采集93份牛血清,以SDS-PAGE、WesternBlot对血清中HBsAg样蛋白进行研究,发现其分子量约为27kDa;以SDS-PAGE分离牛血清中的HBsAg样蛋白,经皮下多... 为探讨牛血清中存在的HBsAg样蛋白的性质,给HBV的发病机制、治疗、预防等研究提供依据,我们采集93份牛血清,以SDS-PAGE、WesternBlot对血清中HBsAg样蛋白进行研究,发现其分子量约为27kDa;以SDS-PAGE分离牛血清中的HBsAg样蛋白,经皮下多点免疫小鼠,可产生与人HBV编码蛋白HBsAg反应的抗体。表明该27kDa蛋白可能存在与HBsAg相似的免疫学特性。 展开更多

关键词 牛血清 鉴定 抗原性 乙型肝炎病毒

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C3d-P28增强乙肝病毒基因免疫诱导的特异性细胞免疫应答 被引量：6

2

作者 王立新 徐薇 +1 位作者 关庆东 熊思东 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期242-244,共3页

目的 :研究补体C3d中P2 8分子对HBV基因免疫诱导的细胞免疫应答的调节作用 ,为增强基因疫苗细胞免疫的效果寻求新方法。方法 :分别分离获取C3d P2 8和HBV preS2 /S编码基因 ,并克隆入真核表达载体 pVAON33中 ,构建相应重组质粒pVAON33 S... 目的 :研究补体C3d中P2 8分子对HBV基因免疫诱导的细胞免疫应答的调节作用 ,为增强基因疫苗细胞免疫的效果寻求新方法。方法 :分别分离获取C3d P2 8和HBV preS2 /S编码基因 ,并克隆入真核表达载体 pVAON33中 ,构建相应重组质粒pVAON33 S2 /S (仅含HBV preS2 /S编码基因 )和pVAON33 S2 /S P2 8.4 (含HBV preS2 /S和 4拷贝C3d P2 8的编码基因 ) ,并以PCR、酶切和DNA序列测定进行鉴定。以肌肉注射法对BALB/c小鼠实施 3次基因免疫 ( 10 0 μg/10 0 μL·只 ) ,间隔 3wk ,并以空质粒免疫小鼠作为对照。免疫小鼠脾细胞体外经HBsAg刺激后 ,用3 H TdR掺入法和同位素释放法 ,分别检测特异性淋巴细胞增殖和CTL杀伤活性。结果 :pVAON33 S2 /S和 pVAON33 S2 /S P2 8.4免疫小鼠的脾细胞 ,均显示较强的特异性增殖活性和CTL杀伤活性 ,但后者显著强于前者 (P <0 .0 5 )。结论 :C3d P2 8可增强HBV preS2 展开更多

关键词 基因免疫 细胞免疫应答 补体C3d 乙型肝炎病毒表面抗原

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不同免疫途径对chitosan-DNA疫苗诱导CVB3特异性免疫应答的影响及其意义 被引量：3

3

作者 徐薇 沈燕 +2 位作者 张进平 王缨 熊思东 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期250-253,共4页

目的　确定新型chitosan DNA疫苗的有效免疫途径。方法　将chitosan pcDNA3 VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻 3种免疫方式免疫Balb c小鼠 ;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA ,评估其特异性体液免疫应答 ;以特异性淋巴细胞增殖反应... 目的　确定新型chitosan DNA疫苗的有效免疫途径。方法　将chitosan pcDNA3 VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻 3种免疫方式免疫Balb c小鼠 ;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA ,评估其特异性体液免疫应答 ;以特异性淋巴细胞增殖反应和CTL活性反映其诱导细胞免疫 ;以 5LD50 致死剂量CVB3攻击免疫小鼠 ,评价不同免疫途径的免疫保护效果。结果　①在诱导CVB3特异性体液免疫方面 :chitosan pcDNA3 VP1疫苗肌注组诱生了高水平IgM和IgG ,但未能诱生黏膜IgA ;口服免疫组仅诱生低水平的黏膜IgA ,未能诱生特异性IgM和IgG ;滴鼻组可诱生低水平的IgM及高水平的IgG和黏膜IgA。②在诱导CVB3特异性细胞免疫方面 :仅滴鼻组诱导了较高水平的淋巴细胞特异性增殖反应和CTL活性 ;口服组的淋巴细胞增殖活性和CTL活性稍弱 ;肌注组几乎不能诱导特异性细胞免疫应答。③免疫保护作用 :滴鼻组可保护 33.3%小鼠长期存活 ;口服组仅达到 16 .7%的保护率 ;肌注组无保护作用。结论　滴鼻免疫途径可能是chitosan pcDNA3 展开更多

关键词 chitosan-DNA疫苗 诱导 CVB3 特异性 免疫应答 影响 滴鼻

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CVB3-VP1基因免疫诱导特异性抗病毒免疫应答及保护作用 被引量：2

4

作者 徐薇 沈燕 +3 位作者 王立新 许从峰 郑秀娟 熊思东 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期239-241,251,共4页

目的 :构建表达柯萨奇病毒B3(CVB3)主要包膜蛋白VP1的基因疫苗 ,并研究该疫苗诱导CVB3特异性免疫应答及免疫保护的作用。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增VP1基因 ,克隆于真核表达载体 pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1。将该质粒转染Hela... 目的 :构建表达柯萨奇病毒B3(CVB3)主要包膜蛋白VP1的基因疫苗 ,并研究该疫苗诱导CVB3特异性免疫应答及免疫保护的作用。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增VP1基因 ,克隆于真核表达载体 pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1。将该质粒转染Hela细胞 ,观察其表达情况 ;以 5 0 μgpcDNA3 VP1质粒DNA肌注免疫BALB/c小鼠 3次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答。间隔 4wk以 5×LD50 的CVB3攻击小鼠 ,观察攻击后小鼠的存活情况。结果 :构建了重组质粒 pcDNA3 VP1,并在体外获得有效表达。以该质粒肌肉免疫BALB/c小鼠 ,可诱生高水平的IgM和IgG ,VP1多肽特异性淋巴细胞增殖反应及CTL活性均显著高于 pcDNA3免疫的对照组。病毒攻击试验表明 ,pcDNA3 VP1免疫组33.3%小鼠可长期存活 ,其心肌组织未见明显的病理学改变 ;而对照小鼠平均仅存活 6 .7d ,心肌显示大量的局灶性坏死和炎性细胞浸润。结论 :pcDNA3 VP1免疫可诱生CVB3特异性体液及细胞免疫应答 。 展开更多

关键词 CVB3 VPI 基因免疫 免疫保护

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C3d对原癌基因HER-2/neu基因免疫的调节作用 被引量：1

5

作者 关庆东 倪晶 +3 位作者 王立新 乔滨 储以微 熊思东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期727-731,共5页

目的:研究C3d对HER2/neu基因疫苗诱导的免疫应答的调节作用。方法:分别构建含人HER2/neu胞外区(hECD)的重组质粒TR421hECD和hECD与C3d的融合质粒TR421hECDC3d3、pcDNA3hECDC3d3。以质粒基因免疫小鼠,定期收集血清,以ELISA法检测抗HER2/... 目的:研究C3d对HER2/neu基因疫苗诱导的免疫应答的调节作用。方法:分别构建含人HER2/neu胞外区(hECD)的重组质粒TR421hECD和hECD与C3d的融合质粒TR421hECDC3d3、pcDNA3hECDC3d3。以质粒基因免疫小鼠,定期收集血清,以ELISA法检测抗HER2/neu抗体,3HTdR掺入法检测细胞免疫应答,观察C3d对hECD免疫应答的调节作用,并以C3d对HBV免疫应答的调节作为对照。结果:hECDC3d3融合质粒诱导的抗HER2/neu抗体水平显著低于hECD质粒诱导的抗体水平,其诱导的淋巴细胞增殖反应也显著低于hECD质粒免疫组,但C3d能增强HBV基因免疫诱导的免疫应答。结论:C3d负调控HER2/neu基因免疫诱导的免疫应答。 展开更多

关键词 C3D HER-2/NEU 基因免疫 负调控

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复合HA-2氨基多肽可增强chitosan-DNA疫苗的免疫保护效果

6

作者 徐薇 沈燕 +2 位作者 陈瑞珍 王缨 熊思东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期93-98,共6页

目的 :以具有促黏膜黏附吸收功能的脱乙酰多糖chitosan包裹质粒DNApcDNA3-VP1构建的新型chitosan-DNA疫苗 ,已证实可诱生CVB3特异性黏膜IgA和抗CVB3保护力 ,在此基础上 ,引入具有内体破坏功能的流感病毒HA 2氨基多肽(融内体多肽 ) ,构建... 目的 :以具有促黏膜黏附吸收功能的脱乙酰多糖chitosan包裹质粒DNApcDNA3-VP1构建的新型chitosan-DNA疫苗 ,已证实可诱生CVB3特异性黏膜IgA和抗CVB3保护力 ,在此基础上 ,引入具有内体破坏功能的流感病毒HA 2氨基多肽(融内体多肽 ) ,构建chitosan-DNA HApLys16疫苗 ,以期增强chitosan-DNA疫苗的免疫保护效果。方法 :将融内体多肽与多聚赖氨酸顺序合成为“载体多肽”HA pLys16 ,将其与DNA、chitosan依次复合形成chitosan DNA HApLys16疫苗。以 5 0 μgDNA剂量的chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫BALB c小鼠 4次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答 ;隔 4周以致死性 5×LD50 CVB3攻击小鼠 ,观察攻击后存活情况。以免疫组化法检测了小鼠心肌内CVB3载量 ;并检测了黏膜IgA中和效价的改变。结果 :chitosan DNA-HApLys16疫苗滴鼻免疫不仅诱生了高水平的IgG ,而且诱生了高水平的黏膜IgA抗体。其诱生的IgG水平以及特异性CTL杀伤活性与chitosan DNA疫苗无统计差别 ,而其IgA水平显著高于chitosan DNA疫苗。CVB3攻击后 ,chitosan DNA HAp Lys16可保护 5 0 .0 %小鼠长期存活 ,高于chitosan DNA组 4 2. 9%的免疫保护率。病理学研究显示 :chitosan-DNA HApLys16免疫小鼠心肌炎症状况好于chitosan-DNA免疫小鼠。 展开更多

关键词 CVB3 clritosan-DNA HApLysl6 滴鼻 免疫保护 中和效价

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SARS-CoV N蛋白的原核表达及其免疫原性研究

7

作者 高海峰 熊凌云 +3 位作者 汪晓华 储以微 王缨 熊思东 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期196-199,共4页

为了研究SARS-CoV病毒N蛋白基因的原核表达及其免疫原性,为进一步的研究奠定基础,我们以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长N基因,分别克隆到pcDNA3和pET32a载体中获得重组质粒pcDNA3-N和pET32a-N。以亲和层析方法分离纯化pET32a-N转... 为了研究SARS-CoV病毒N蛋白基因的原核表达及其免疫原性,为进一步的研究奠定基础,我们以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长N基因,分别克隆到pcDNA3和pET32a载体中获得重组质粒pcDNA3-N和pET32a-N。以亲和层析方法分离纯化pET32a-N转化的BL21细菌裂解液中的重组N融合蛋白,并以ELISA方法检测pcDNA3-N质粒基因免疫小鼠诱导后血清中的特异性抗体。结果pET32a-N转化BL21细菌后可检测到重组SARS-CoVN融合蛋白表达并分离纯化,pcDNA3-N基因免疫能够诱导产生N特异的体液免疫应答。研究的结果表明,SARS-CoVN蛋白可以在原核细胞中有效表达并有良好免疫原性,可以为进一步的功能研究和血清学诊断提供条件。 展开更多

关键词 SARS-COV N蛋白 基因免疫

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自身抗原表位基因免疫诱导SLE样综合征小鼠模型的建立

8

作者 吴瑾 吴厚生 熊思东 《动物医学进展》 CSCD 2003年第6期70-72,共3页

通过自身抗原 Sm B/ B′主要表位进行基因免疫 ,诱导系统性红斑狼疮 ( SL E)样综合征的动物模型 ,为进一步探讨 SL E的发病机理奠定基础。以 RT-PCR的方法获得 Sm B/ B′主要表位编码基因 ,构建表达载体 pc DNA3 -Sm B/ B′,基因免疫后... 通过自身抗原 Sm B/ B′主要表位进行基因免疫 ,诱导系统性红斑狼疮 ( SL E)样综合征的动物模型 ,为进一步探讨 SL E的发病机理奠定基础。以 RT-PCR的方法获得 Sm B/ B′主要表位编码基因 ,构建表达载体 pc DNA3 -Sm B/ B′,基因免疫后以免疫印迹法检测抗 Sm抗体、EL ISA检测抗 ds DNA抗体、免疫荧光法检测肾脏损伤。结果显示基因免疫后小鼠均产生抗 Sm抗体、抗 ds DNA抗体 ,且能诱发动物肾小球 Ig G类免疫复合物的沉积 ,表明自身抗原表位的基因免疫能成功诱导 SL E样综合征小鼠模型。 展开更多

关键词 自身抗原 表位基因 免疫诱导 SLE样综合征 小鼠模型 系统性红斑狼疮 人类健康

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SARS—Cov M蛋白的真核表达及其免疫原性研究（摘要）

9

作者 童德妍 汪晓华 +2 位作者 郑秀娟 关庆东 熊思东 《世界感染杂志》 2005年第1期65-65,共1页

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DNA疫苗的研究进展 被引量：7

10

作者 熊思东 徐薇 《中国处方药》 2003年第2期22-26,共5页

DNA疫苗又称基因疫苗或核酸疫苗,其建立和发展极大程度上基于上世纪九十年代初新兴的一门新的免疫学理论和技术DNA免疫(DNA immunization)。由于DNA免疫免去了繁琐的蛋白纯化步骤和免疫性剂的辅助,更重要的是,基因在体内的表达及诱生免... DNA疫苗又称基因疫苗或核酸疫苗,其建立和发展极大程度上基于上世纪九十年代初新兴的一门新的免疫学理论和技术DNA免疫(DNA immunization)。由于DNA免疫免去了繁琐的蛋白纯化步骤和免疫性剂的辅助,更重要的是,基因在体内的表达及诱生免疫反应的过程,模拟了自然状态下机体感染外源病原生物表达抗原及诱导免疫的过程。因此,DNA免疫系统一经建立,便很快成为抗感染、抗肿瘤免疫等领域的研究热点。自1994年以来,美国FDA已陆续批准了HIV、流感病毒、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、疟疾和肿瘤相关抗原等DNA疫苗进入临床试验。迄今,以DNA免疫技术为关键技术,已研制出不同预防性和治疗性DNA疫苗(DNA vaccines),发展为以DNA免疫为特征的第三代疫苗。 展开更多

关键词 DNA疫苗 研究进展 作用机制 核酸疫苗

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C3d增强基因免疫诱导的小鼠抗乙型肝炎病毒特异性免疫应答 被引量：4

11

作者 关庆东 王立新 +4 位作者 郭强 张进平 徐薇 王缨 熊思东 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期101-105,共5页

目的探讨C3d对乙型肝炎病毒(HBV)基因免疫诱导的特异性免疫应答的调节作用,为增强HBV基因疫苗免疫效果寻求新途径。方法将HBVpreS2/S编码基因分别插入真核表达载体TR421和含有三拷贝C3d编码基因的TR421C3d3质粒,构建重组质粒TR421preS2/... 目的探讨C3d对乙型肝炎病毒(HBV)基因免疫诱导的特异性免疫应答的调节作用,为增强HBV基因疫苗免疫效果寻求新途径。方法将HBVpreS2/S编码基因分别插入真核表达载体TR421和含有三拷贝C3d编码基因的TR421C3d3质粒,构建重组质粒TR421preS2/S和TR421preS2/SC3d3。采用肌肉注射法对BALB/c小鼠实施基因免疫,以空质粒TR421为对照,定期采集血清。ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗HBsIgG,3HTdR掺入法检测其特异性淋巴细胞增殖活性。结果TR421preS2/SC3d3重组质粒免疫组诱导的特异性抗HBsIgG水平明显高于TR421preS2/S重组质粒免疫组(P<005),而且TR421preS2/SC3d3重组质粒基因免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性也显著高于TR421preS2/S重组质粒组(P<005)。结论C3d可增强基因免疫诱导的HBV特异性体液和细胞免疫应答,为提高HBV基因疫苗的免疫效果提供了新的途径。 展开更多

关键词 基因 疫苗 补体 乙型肝炎表面抗原 乙型肝炎病毒 基因免疫

原文传递

巨细胞病毒感染对动脉粥样硬化的影响 被引量：6

12

作者 许从峰 陈瑞珍 +5 位作者 徐薇 沈燕 葛均波 陈灏珠 郑秀娟 熊思东 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期451-453,共3页

目的　研究巨细胞病毒 (CMV)感染和动脉粥样硬化的关系 ,并探讨其可能机制。方法　通过一个大样本从血清流行病学 (ELISA检测患者血清中抗CMV的IgG抗体 )和分子生物学 (PCR检测动脉粥样硬化病变中CMV特异性基因 )方面探讨巨细胞病毒感... 目的　研究巨细胞病毒 (CMV)感染和动脉粥样硬化的关系 ,并探讨其可能机制。方法　通过一个大样本从血清流行病学 (ELISA检测患者血清中抗CMV的IgG抗体 )和分子生物学 (PCR检测动脉粥样硬化病变中CMV特异性基因 )方面探讨巨细胞病毒感染和动脉粥样硬化的关系 ,并检测CMV感染对内皮细胞趋化因子表达的影响。结果　动脉粥样硬化组血清中CMV的阳性率显著高于非动脉粥样硬化组 (分别为 82 .2 %和 6 1.0 % ,P =0 .0 2 ) ;而且动脉粥样硬化斑块中HCMV基因出现率显著高于正常血管组织 (13 15和 2 7,P =0 .0 1) ;CMV感染还可上调内皮细胞ECV 30 4表达MCP 1。结论　CMV感染参与动脉粥样硬化的形成和发生 。 展开更多

关键词 巨细胞病毒感染 动脉粥样硬化 趋化因子 内皮细胞

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定量检测CCL20的竞争性内参照RT-PCR的建立及其初步应用 被引量：3

13

作者 叶巍 邵先安 +3 位作者 郑秀娟 陈习武 储以微 熊思东 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期359-364,共6页

目的　建立检测趋化因子CC亚家族配体2 0 (CCL2 0 )表达水平的内参照定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法。方法　将人CCL2 0编码基因克隆到pBs ΔANK质粒中(PAL 2 ) ,将一4 2bp的外源核苷酸片断插入到上述重组质粒的CCL2 0中间,构建内... 目的　建立检测趋化因子CC亚家族配体2 0 (CCL2 0 )表达水平的内参照定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法。方法　将人CCL2 0编码基因克隆到pBs ΔANK质粒中(PAL 2 ) ,将一4 2bp的外源核苷酸片断插入到上述重组质粒的CCL2 0中间,构建内参照质粒PAL- 2 - IS。在该定量系统中以PAL- 2 -IS和PAL- 2为模板,用CCL2 0的特异性引物扩增,根据扩增出的两个不同大小的条带的光密度扫描值对CCL2 0进行相对定量。结果　将PAL -2与已知不同系列浓度的PAL- 2 - IS以内参照竞争定量RT- PCR共扩增定量PAL- 2浓度,PAL- 2计算浓度与实际浓度无差异(P >0 .0 5 )。在同一细胞数量水平(10 5数量级) ,内参照竞争定量RT- PCR检测表明:CCL2 0在L0 2、HepG2、Hepal、Hepa3中表达水平高于Hepa2 ,而在HepG2 .2 .15中最低。结论　建立了检测CCL2 0表达水平的内参照定量RT -PCR方法,该方法可用于细胞中CCL2 0不同表达水平的检测。 展开更多

关键词 趋化因子CC亚家族配体20 内参照 定量 竞争 逆转录聚合酶链反应

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CVB3感染通过MCP-1介导病毒性心肌炎小鼠单个核细胞迁移 被引量：1

14

作者 沈燕 陈瑞珍 +2 位作者 储以微 徐焕宾 熊思东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期325-328,共4页

目的:研究B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染与病毒性心肌炎(VMC)炎症细胞迁移的关系及机制。方法:采用差异贴壁法分离小鼠心肌细胞;趋化试验分析心肌细胞培养上清对VMC小鼠外周血单个核细胞(PMNC)的趋化性;实时定量RT PCR分析心肌细胞MCP 1的... 目的:研究B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染与病毒性心肌炎(VMC)炎症细胞迁移的关系及机制。方法:采用差异贴壁法分离小鼠心肌细胞;趋化试验分析心肌细胞培养上清对VMC小鼠外周血单个核细胞(PMNC)的趋化性;实时定量RT PCR分析心肌细胞MCP 1的表达。结果:( 1)CVB3感染心肌细胞培养上清对VMC小鼠PMNC的趋化性明显增强。( 2 )CVB3感染2小时后MCP 1的表达开始升高,至6小时达到高峰,8小时下降;随着CVB3感染量的增加,MCP 1的表达明显升高。( 3)2 5 μg/ml抗MCP 1抗体处理后,CVB3感染心肌细胞培养上清对VMC小鼠PMNC的趋化性下降5 4 % (P <0 0 1) ;5 μg/ml抗MCP 1抗体处理后,趋化性下降的幅度与2 5 μg/ml抗MCP 1抗体处理的相比未见明显差异(P >0 0 5 )。结论:CVB3感染通过MCP 1介导VMC小鼠单个核细胞迁移。 展开更多

关键词 CVB3 MCP-1 心肌细胞 趋化作用

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CCL27的不同剪切机制及其功能差异 被引量：3

15

作者 邵先安 熊思东 《生命科学》 CSCD 2005年第4期308-310,共3页

CCL27是一种CC型趋化因子,其配体为CCR10。由于mRNA剪切的不同,CCL27形成两种不同的分子,即经典CCL27和其变异体PESKY,前者含分泌肽,对活化CD4+T细胞有趋化作用,是皮肤炎症反应中扮演主要角色的趋化因子;后者含有核内定位序列,调控细胞... CCL27是一种CC型趋化因子,其配体为CCR10。由于mRNA剪切的不同,CCL27形成两种不同的分子,即经典CCL27和其变异体PESKY,前者含分泌肽,对活化CD4+T细胞有趋化作用,是皮肤炎症反应中扮演主要角色的趋化因子;后者含有核内定位序列,调控细胞骨架结构的重排,这一特性为该趋化因子所独有,可能预示着趋化因子家族的新功能。 展开更多

关键词 CCL27 PESKY 剪切机制 功能

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人ehCGβ^+肿瘤小鼠模型的建立

16

作者 王立新 关庆东 +2 位作者 吴瑾 王缨 熊思东 《动物医学进展》 CSCD 2004年第1期76-79,共4页

采用脂质体转染方法将含人 eh CGβ编码基因的重组质粒 pc DNA3 -eh CGβ转染鼠SP2 / 0细胞 ,经 G41 8选择培养和有限稀释培养获得抗性细胞克隆 ,FSCA检测显示 :该抗性细胞的 eh CGβ表达比例高达 84.75%、平均荧光强度达 2 2 .1 2 ;采... 采用脂质体转染方法将含人 eh CGβ编码基因的重组质粒 pc DNA3 -eh CGβ转染鼠SP2 / 0细胞 ,经 G41 8选择培养和有限稀释培养获得抗性细胞克隆 ,FSCA检测显示 :该抗性细胞的 eh CGβ表达比例高达 84.75%、平均荧光强度达 2 2 .1 2 ;采用相同方法获得转 HBV-pre S2 / S编码基因的 Sp2 / 0 -pre S2 / S细胞作为转染无关基因的对照细胞克隆 ,FACS检测发现该细胞表达 pre S2 / S比例为 72 .60 %、平均荧光强度为1 6.80。将不同数量的 Sp2 / 0 -eh CGβ细胞皮下接种 BAL B/ c小鼠 ,结果表明 ,接种 1× 1 0 5及以上Sp2 / 0 -eh CGβ细胞在小鼠体内能形成实体瘤 ,且实体瘤的大小与接种细胞数量呈正相关 (R值为 0 .989)。将相同数量 (5× 1 0 5个细胞 )的 Sp2 /0、Sp2 / 0 -eh CGβ和 Sp2 / 0 -pre S2 / S细胞接种同一只 BAL B/ c小鼠不同部位 ,结果发现 3种肿瘤细胞均在 BAL B/ c小鼠皮下形成了实体瘤 ,比较三组的平均瘤重量无统计学差异 (P >0 .0 5) ,提示外源性 eh CGβ基因的转染不影响Sp2 / 0细胞的致瘤特性。文章建立的人 eh CGβ+肿瘤细胞的荷瘤小鼠模型 ,为研究 eh CGβ+肿瘤细胞的生物学特征、eh 展开更多

关键词 人ehCGβ^+肿瘤小鼠模型 模型建立 人绒毛膜促性腺激素 脂质体转染方法 抗性细胞克隆

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血清淀粉样P成分的DNA结合特性

17

作者 吴瑾 王立新 +1 位作者 郑秀娟 熊思东 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期336-338,共3页

目的 检测血清淀粉样P成分(SAP)与不同DNA的结合活性并研究SAP与DNA的结合是否有利于此类抗原的清除,探讨它在SLE发生发展中的作用及意义。方法 用亲和层析和凝胶过滤方法自小鼠和人血清中纯化SAP,分别提取来自细菌、质粒、酵母、小鼠... 目的 检测血清淀粉样P成分(SAP)与不同DNA的结合活性并研究SAP与DNA的结合是否有利于此类抗原的清除,探讨它在SLE发生发展中的作用及意义。方法 用亲和层析和凝胶过滤方法自小鼠和人血清中纯化SAP,分别提取来自细菌、质粒、酵母、小鼠淋巴细胞等不同DNA,用DOT-EIA方法检测SAP与它们的结合活性,用巨噬细胞吞噬实验观察SAP与DNA结合后对DNA清除的影响。结果 人和小鼠SAP均与细菌DNA结合最强,其次为质粒、酵母DNA,与淋巴细胞DNA和小牛胸腺DNA的结合较弱,与单链λDNA结合最弱;与来源于活化状态小鼠淋巴细胞DNA的结合力高于非活化状态;SAP与活化淋巴细胞DNA结合后可促进巨噬细胞对DNA的吞噬。结论 SAP与不同DNA结合活性各异。 展开更多

关键词 血清淀粉样P成分 DNA 系统性红斑狼疮

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糖皮质激素与炎症因子对应急时相反应蛋白SIP24/24p3的协同调控作用及其意义(英文)

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作者 刘全胜 Marit Nilsen-Hamilton 熊思东 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期525-529,共5页

小鼠应急时相反应蛋白SIP24/24p3有抗炎症和特异性诱导白细胞凋亡的功能,其在体内的表达是高度特异性的。为研究 SIP24/24p3的调控因子及机制,我们在小鼠 Balb/cT3和 BNL细胞培养中通过灵敏的^(35)S代谢标记方法检测SIP24/24p3蛋白的表... 小鼠应急时相反应蛋白SIP24/24p3有抗炎症和特异性诱导白细胞凋亡的功能,其在体内的表达是高度特异性的。为研究 SIP24/24p3的调控因子及机制,我们在小鼠 Balb/cT3和 BNL细胞培养中通过灵敏的^(35)S代谢标记方法检测SIP24/24p3蛋白的表达水平,定量观测分析了糖皮质激素化合物dexamethasone对SIP24/24p3的诱导作用及其与炎症因子白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的协同调控作用。结果显示:(1)在Balb/c 3T3和BNL细胞中,dexamethasone对SIP24/24p3都有明显诱导作用,这种诱导作用在BNL细胞中尤其显著;(2)在Balb/c3T3和BNL细胞中dexamethasone与IL-6协同诱导SIP24/24p3;(3)在Balb/c 3T3细胞中dexamethasone与TNF-α对SIP24/24p3有协同诱导效应,而在 BNL细胞中 dexamethasone与 TNF-α对 SIP24/24p3的诱导表现为相加效应;(4)在 Balb/c 3T3和BNL细胞中 dexamethasone与IL-6/TNF-α对SIP24/24p3的诱导分别表现出协同和相加效应。多种因子对SIP24/24p3的协同诱导调控有助于阐明其在体内的高度特异表达及机制,SIP24/24p3在不同细胞中的不同表达格局也对体内应急时相反应蛋白在肝脏外和肝脏内的表达方式及诱导机制有提示作用。SIP24/24p3能同时被 炎症因子和抗炎症因子诱导的事实显示了其在炎症全过程中的重? 展开更多

关键词 应急时相反应蛋白SIP24/24p3 ^35S代谢标记 糖皮质激素 白介素6 肿瘤坏死因子Α

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B7反义肽预处理脾细胞诱导异基因嵌合体形成及延长移植物存活 被引量：2

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作者 陈晋 张瑞华 +3 位作者 刘全胜 储以微 何球藻 熊思东 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期138-141,共4页

目的　尝试以B7 CD2 8/CTLA4为靶点 ,用B7反义肽 (B7AP)预处理供者的脾细胞 ,免疫受者后结合输注供者骨髓细胞 ,诱导受体形成异基因嵌合体。方法　每只用 5× 10 6/ 10 0 μlB7AP预处理的供者小鼠 (C5 7BL/ 6 )脾细胞免疫受者小鼠 (... 目的　尝试以B7 CD2 8/CTLA4为靶点 ,用B7反义肽 (B7AP)预处理供者的脾细胞 ,免疫受者后结合输注供者骨髓细胞 ,诱导受体形成异基因嵌合体。方法　每只用 5× 10 6/ 10 0 μlB7AP预处理的供者小鼠 (C5 7BL/ 6 )脾细胞免疫受者小鼠 (BALB/c) ,诱导特异性同种低免疫应答反应 ;在此基础上每只受者小鼠输注供者骨髓细胞 2× 10 7/ 10 0 μl,诱导受者形成异基因嵌合体 ,以流式细胞术 (FACS)连续动态监测嵌合状态的维持情况并用小鼠心肌移植模型研究移植物存活的影响因素。结果　在受者体内成功诱导出了特异性同种低免疫应答反应 ,应答水平只有正常未免疫组的 4 3%(n =6 ,P <0 0 0 1) ;嵌合状态可以维持到 10 0d以上 (n =6 ) ,15 0d时嵌合率仍有 3.4 5 % ;嵌合小鼠进行同种异体小鼠心肌移植存活超过 10 0d(n =6 ) ,而对照组阿霉素组只能延长至 16d(n =6 )。结论　B7AP预处理小鼠脾细胞可诱导形成异基因嵌合体 ,并显著延长同种小鼠心肌移植存活的时间 ,为移植免疫的研究提供了一个简单易行的嵌合体平台技术 ,也为用B7AP在移植免疫中的应用进行了有益的尝试。 展开更多

关键词 B7反义肽 预处理 脾细胞 异基因嵌合体 同种异体移植 移植免疫学

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系统性红斑狼疮患者血清淀粉样P成分的测定及其意义 被引量：3

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作者 吴瑾 熊思东 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期257-259,共3页

目的　检测系统性红斑狼疮 (SLE)患者血清淀粉样P成分 (SAP)含量并研究其与DNA及抗DNA抗体间的关系 ,探讨它在SLE发生发展中的作用及意义。方法　用酶联免疫吸附测定 (ELISA)方法检测SAP含量及抗dsDNA抗体 ,荧光分光光度法测定DNA水平... 目的　检测系统性红斑狼疮 (SLE)患者血清淀粉样P成分 (SAP)含量并研究其与DNA及抗DNA抗体间的关系 ,探讨它在SLE发生发展中的作用及意义。方法　用酶联免疫吸附测定 (ELISA)方法检测SAP含量及抗dsDNA抗体 ,荧光分光光度法测定DNA水平。结果　SLE患者血清SAP、DNA水平显著高于正常人 ,活动期患者明显高于缓解期 ;血清SAP含量与DNA浓度呈显著性正相关 ,但SLE患者血清SAP相对DNA水平下降 ;SAP/DNA比值与抗DNA抗体水平呈负相关。结论　SLE患者血清中SAP含量相对DNA不足 ,可能影响此类自身抗原物质的及时清除 。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 血清 淀粉样P成分 测定

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