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嗜肺军团菌mip/ctxB融合基因体外表达与动物免疫试验的免疫原性研究 被引量：7
1
作者 王涛 陈建平 +3 位作者 郅克谦 陶大昌 杨春蕾 张雷 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第9期818-823,共6页
PCR扩增嗜肺军团菌mip基因和霍乱弧菌ctxB基因,克隆入载体pcDNA3 1( +),重组子经限制性酶切分析、PCR、序列分析鉴定正确后,命名为pcDNA3 1 mip/ctxB.脂质体法将重组质粒pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB转染NIH3T3细胞,用免疫荧光法和... PCR扩增嗜肺军团菌mip基因和霍乱弧菌ctxB基因,克隆入载体pcDNA3 1( +),重组子经限制性酶切分析、PCR、序列分析鉴定正确后,命名为pcDNA3 1 mip/ctxB.脂质体法将重组质粒pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB转染NIH3T3细胞,用免疫荧光法和蛋白质印迹鉴定瞬时表达和稳定表达产物,结果发现:重组质粒成功转入细胞并获得短暂表达,稳定转染细胞分别在 2 4ku和 35ku处检测到阳性杂交信号.将pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、IFN γ产生水平、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性等体液免疫和细胞免疫反应的指标,评价疫苗的免疫原性.结果发现:各实验组均检测到免疫原性,pcDNA3 1 mip/ctxB免疫组的免疫原性高于pcDNA3 1 mip免疫组,有显著性差异(P <0 0 1). 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 霍乱弧菌 mip/ctxB融合基因 体外表达 免疫原性
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幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的表达及其免疫原性研究 被引量：5
2
作者 吴利先 杨致邦 +1 位作者 林珊珊 刘淼 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期306-310,共5页
目的 :探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素 霍乱毒素B亚单位 (HpaA CtxB ,HCTB)经口服免疫小鼠后 ,机体产生的免疫应答。方法 :用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pET 32a( + )和pQE 30质粒上 ,然后同时插入pQE 30... 目的 :探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素 霍乱毒素B亚单位 (HpaA CtxB ,HCTB)经口服免疫小鼠后 ,机体产生的免疫应答。方法 :用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pET 32a( + )和pQE 30质粒上 ,然后同时插入pQE 30表达载体中 ,构建含双基因的的表达质粒pQE HCTB ,转化E .coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白HCTB ;West ernblot分析其免疫反应性。融合蛋白经镍离子柱纯化后 ,HCTB和HpaA分别给小鼠灌胃进行免疫 ,ELISPOT和ELISA分别检测小鼠胃粘膜、派伊尔小结 (Peyer′spatches ,PP)抗原特异性抗体分泌细胞 (ASC) ,和血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。结果 :经测序HCTB融合基因片段由 116 1bp组成 ,为编码 387个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE分析相对分子量 (Mr)约为4 0 0 0 0。可溶性表达占全菌的 2 5 %以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 92 %以上的重组蛋白。Westernblot分析其能分别与HpaA抗血清和CT抗血清特异性反应。灌胃免疫小鼠后ELISPOT和ELISA检测结果 ,胃和PPsIgA ASC、IgG ASC数量明显增加 ,尤以sIgA ASC为甚 ,同时血清IgA、IgG ,粪sIgA ,肠粘液sIgA也明显高于HpaA组和对照组 (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 :融合蛋白HCTB经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答 。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 粘附素 霍乱毒素B亚单位 融合蛋白 口服疫苗 免疫应答
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慢性乙型肝炎患者肝功能与Hp感染的相关性研究 被引量：6
3
作者 王国富 吴利先 《大理学院学报（综合版）》 CAS 2007年第4期5-6,共2页
目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)感染对慢性乙型肝炎(HB)患者肝功能相关指标的影响。方法:对126例HB患者在检测肝功能[包括血清总胆红素、谷胺酰氨基转移酶、凝血酶原时间、甲胎蛋白(AFP)水平和血氨水平]同时进行胃镜检查和Hp感染情况检测。根... 目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)感染对慢性乙型肝炎(HB)患者肝功能相关指标的影响。方法:对126例HB患者在检测肝功能[包括血清总胆红素、谷胺酰氨基转移酶、凝血酶原时间、甲胎蛋白(AFP)水平和血氨水平]同时进行胃镜检查和Hp感染情况检测。根据Hp感染情况分为Hp(+)组79例和Hp(-)组47例,比较两组患者的血清总胆素、谷胺酰氨基转移酶、凝血酶原时间、甲胎蛋白水平和血氨水平进行相关性分析。结果:血清总胆素、谷胺酰氨基转移酶、凝血酶原时间两组无显著性差异,Hp(+)组AFP水平和血氨水平显著高于Hp(-)组。结论:Hp感染可能是HB患者AFP和血氨升高的另一个原因。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎 幽门螺杆菌 肝功能 甲胎蛋白 血氨
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重症监护病房的肠球菌种类及其耐药性分析 被引量：3
4
作者 吴利先 王国富 郑行萍 《大理学院学报（综合版）》 CAS 2007年第10期28-29,32,共3页
目的:了解我院重症监护病房肠球菌的种类及对其耐药情况进行分析。方法:用法国梅里埃公司生产的全自动细菌分析仪Vitek-32进行肠球菌鉴定和K-B法进行药敏试验。结果:113株肠球菌中以粪肠球菌和屎肠球菌为主,共94株占总数的83.18%,其中... 目的:了解我院重症监护病房肠球菌的种类及对其耐药情况进行分析。方法:用法国梅里埃公司生产的全自动细菌分析仪Vitek-32进行肠球菌鉴定和K-B法进行药敏试验。结果:113株肠球菌中以粪肠球菌和屎肠球菌为主,共94株占总数的83.18%,其中粪肠球菌63株占55.75%,屎肠球菌31株占27.43%。肠球菌对替考拉宁和万古霉素的耐药性最低,但屎肠球菌对12种抗菌药物的耐药性明显高于粪肠球菌。结论:临床对肠球菌的检测应达到种的水平,屎肠球菌对抗菌药物的耐药性较粪肠球菌为高,已经检测出对糖肽类抗生素万古霉素及替考拉宁耐药的肠球菌,值得重视。 展开更多
关键词 重症监护病房 肠球菌 种类 耐药性
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肠球菌生物被膜形成的分子机制研究进展
5
作者 薛婷 吴利先 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2011年第6期399-402,共4页
肠球菌是医院感染的重要条件致病菌，随着对肠球菌致病机制研究的逐步深入，研究者们发现肠球菌与多种置入医疗器材如导尿管、静脉插管和人工瓣膜所引起的生物被膜相关感染有关。生物被膜不仅为细菌提供良好的避护所，而且机体防御系统... 肠球菌是医院感染的重要条件致病菌，随着对肠球菌致病机制研究的逐步深入，研究者们发现肠球菌与多种置入医疗器材如导尿管、静脉插管和人工瓣膜所引起的生物被膜相关感染有关。生物被膜不仅为细菌提供良好的避护所，而且机体防御系统及抗菌药物难以将其清除，因此对肠球菌生物被膜形成机制的深入研究，在感染的防治中具有重要的意义。此文对肠球菌生物被膜形成的分子机制相关研究进展做一综述。 展开更多
关键词 肠球菌属 生物被膜 分子机制 基因 群感效应
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