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靶向VEGF的miRNA对恶性黑色素细胞增殖和凋亡的影响 被引量：6
1
作者 蒋源 韩永智 孙建 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期358-363,共6页
目的研究靶向血管内皮生长因子(VEGF)基因的外源性miRNA对恶性黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法根据VEGF基因序列设计合成4对miRNA干扰片段,构建质粒真核表达载体,分别为X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,测序分析鉴定插入... 目的研究靶向血管内皮生长因子(VEGF)基因的外源性miRNA对恶性黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法根据VEGF基因序列设计合成4对miRNA干扰片段,构建质粒真核表达载体,分别为X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,测序分析鉴定插入序列的完整性;脂质体法将该4个重组表达载体转染黑色素瘤细胞株SKmel-28,RT-PCR检测转染细胞中VEGF基因的mRNA表达变化,Western blotting检测miRNA对VEGF蛋白表达水平的调控效应,明确抑制效果最为显著的miRNA干扰序列。MTS法和流式细胞仪分别检测人工合成的靶向VEGF的miRNA对SKmel-28生长的抑制作用,以及对肿瘤细胞凋亡的影响。结果测序分析证实4个重组体插入片段的碱基序列均完全正确,成功转染SKmel-28细胞后,均能显著抑制肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。抑制效应最强的重组载体是X-26-2n-1,MTS法和流式细胞仪检测显示,SKmel-28细胞转染X-26-2n-1后,细胞增殖受到明显抑制,增殖抑制效应具有时间依赖性,与阴性对照组比较差异具有显著性(P<0.05),与空白组比较细胞增殖抑制更加明显(P<0.01);肿瘤细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率也显著高于对照组(P<0.01)。结论外源性靶向VEGF的miRNA能够显著降低黑色素瘤细胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的表达水平,抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 黑色素瘤 血管内皮生长因子 细胞增殖 凋亡
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microRNA抑制黑色素瘤VEGF基因表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响 被引量：3
2
作者 蒋源 韩永智 孙建 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期207-214,共8页
【目的】研究外源性靶向microRNA对恶性黑色素瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的抑制作用,以及对癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响。【方法】根据VEGF基因序列人工设计合成4对microRNA干扰片段,构建质粒真核表达载体,分别为:X-26-... 【目的】研究外源性靶向microRNA对恶性黑色素瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的抑制作用,以及对癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响。【方法】根据VEGF基因序列人工设计合成4对microRNA干扰片段,构建质粒真核表达载体,分别为:X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,测序分析鉴定插入序列的完整性;脂质体法将该四个重组表达载体转染黑色素瘤细胞株SKmel-28,RT-PCR检测转染细胞中VEGF基因的mRNA表达变化,Western Blot检测microRNA对VEGF蛋白表达水平的调控效应,明确抑制效果最为显著的microRNA干扰序列。MTS和EDU法分别检测靶向VEGF的microRNA对SKmel-28生长的抑制作用,流式细胞仪观察转染对肿瘤细胞凋亡的影响,Transwell检测细胞侵袭和迁移能力变化。【结果】测序分析证实4个重组体插入片段的碱基序列均完全正确,成功转染SKmel-28细胞后,均能显著抑制肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。抑制效应最强的重组载体是X-26-2n-1;MTS和EDU检测显示,SKmel-28细胞转染X-26-2n-1后,细胞增殖受到明显抑制,与对照组相比有统计学差异(P<0.05),增殖抑制效应具有时间依赖性,细胞侵袭和迁移能力也显著减弱(P<0.01);流式细胞仪检测显示肿瘤细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率也显著高于对照组(P<0.01)。【结论】外源性靶向VEGF的microRNA能够显著降低黑色素瘤细胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的表达水平,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的体外增殖和侵袭迁移能力。 展开更多
关键词 黑色素瘤 MICRORNA 血管内皮生长因子 基因治疗
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