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富血小板血浆对白细胞介素-1β诱导大鼠髓核细胞凋亡的影响
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作者 张国腾 王毅 +2 位作者 周沛 邱世诚 周剑鹏 《国际医药卫生导报》 2025年第4期591-596,共6页
目的探讨富血小板血浆(PRP)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导大鼠髓核细胞凋亡的影响。方法研究时间为2023年7月至2024年10月。采取SD大鼠血液,使用两步离心法提取PRP,用于后续实验。常规培养大鼠髓核细胞。采用不同浓度PRP对髓核细胞进行... 目的探讨富血小板血浆(PRP)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导大鼠髓核细胞凋亡的影响。方法研究时间为2023年7月至2024年10月。采取SD大鼠血液,使用两步离心法提取PRP,用于后续实验。常规培养大鼠髓核细胞。采用不同浓度PRP对髓核细胞进行不同时间点的处理,用细胞活力检测试剂盒检测髓核细胞的活性。通过IL-1β诱导建立髓核细胞退变模型,随机分为3组:对照组(未经IL-1β和PRP处理)、IL-1β组(加入10μg/L IL-1β溶液)和PRP组(加入10μg/L IL-1β溶液和PRP)。干预72 h后,Western blot检测髓核组织中Bcl-2家族相关x蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2)以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3蛋白(Caspase-3)表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Bax、Bcl-2以及Caspase-3 mRNA的表达。采用单因素方差分析及LSD-t检验进行数据分析。结果Western blot检测结果显示,IL-1β组的Bax和Caspase-3蛋白表达量、Bax/Bcl-2均高于对照组(2.43±0.22比1.04±0.07、1.96±0.09比1.06±0.12、3.76±0.34比1.00±0.10),Bcl-2蛋白表达量低于对照组(0.65±0.05比1.05±0.17),差异均有统计学意义(均P<0.05)。PRP组的Bax和Caspase-3蛋白表达、Bax/Bcl-2低于IL-1β组,Bcl-2蛋白表达量高于IL-1β组,差异均有统计学意义(均P<0.05);qRT-PCR检测结果显示,IL-1β组的Bax和Caspase-3 mRNA表达量均高于对照组(1.15±0.12比1.00±0.03、1.22±0.09比1.00±0.11),Bcl-2 mRNA表达量低于对照组(0.51±0.05比1.00±0.04),差异均有统计学意义(均P<0.05)。PRP组的Bax和Caspase-3 mRNA表达量低于IL-1β组,Bcl-2 mRNA表达量高于IL-1β组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论PRP可能抑制IL-1β诱导的髓核细胞凋亡和炎症反应,增强细胞活性,有效延缓椎间盘退变疾病进展。 展开更多
关键词 富血小板血浆 白细胞介素-1Β 炎症反应 细胞凋亡 髓核细胞 椎间盘退变 动物实验
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小鼠髓核细胞体外衰老模型的建立及评价
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作者 甘延池 何嘉辉 +7 位作者 龚焱 程招军 尚奇 陈弘林 沈耿杨 梁德 江晓兵 任辉 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期808-814,共7页
目的:建立并评价小鼠髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)体外衰老模型.方法:取8周龄C57BU6雄性小鼠,体外分离培养小鼠NPCs,并采用细胞免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测NPCs标志蛋白聚集蛋白聚糖(aggrecan)的表达进行细胞鉴定.... 目的:建立并评价小鼠髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)体外衰老模型.方法:取8周龄C57BU6雄性小鼠,体外分离培养小鼠NPCs,并采用细胞免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测NPCs标志蛋白聚集蛋白聚糖(aggrecan)的表达进行细胞鉴定.取不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L)的叔丁基过氧化氢(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)干预NPCs,采用CCK8法检测干预2h、4h后的细胞活性,筛选TBHP的最佳干预浓度及时间.应用最佳干预浓度TBHP、最佳干预时间干预P1代NPCs后换成完全培养基继续培养24h、48h、72h,采用衰老相关β半乳糖苷酶染色(senescence-associatedβ-galactosidase staining,SA-β-gal)检测各时间点的衰老NPCs阳性率,观察不同时间点NPCs的衰老变化.将P2代NPCs分为对照组和模型组,对照组在完全培养基中培养,模型组加入最佳干预浓度TBHP干预最佳时间干预后换成完全培养基培养,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测两组细胞衰老相关基因p53、p21、p16以及Aggrecan、Ⅱ型胶原蛋白(collagen Ⅱ)、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs-5,ADAMTS-5)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)mRNA表达,免疫印迹法(Western blot,WB)检测Aggrecan、Collagen Ⅱ、MMP-3、MMP-13、p53、p21蛋白表达水平.结果:分离培养的细胞高表达Aggrecan,为NPCs.TBHP最佳干预浓度为100μmol/L,最佳干预时间为4h.在100μmol/L TBHP干预4h后培养24h、48h、72h,NPCs的SA-β-gal染色阳性率均显著性增加(P<0.05),三个时间点间无统计学差异(P>0.05),后续模型组加入最佳干预浓度TBHP干预最佳时间干预后换成完全培养基培养24h,对照组培养相同时间.RT-qPCR检测模型组p53、p21、p16、MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5 mRNA表达较对照组显著性升高(P<0.05),Aggrecan、Collagen Ⅱ mRNA表达较对照组显著性降低(P<0.05);WB检测模型组MMP-3、MMP-13、p53、p21蛋白表达较对照组显著性升高(P<0.05),Aggrecan、Collagen Ⅱ蛋白表达较对照组显著性降低(P<0.05).结论:采用TBHP诱导能成功构建小鼠NPCs体外衰老模型,可为椎间盘退行性变的发病机制研究提供良好的研究样本. 展开更多
关键词 髓核细胞 叔丁基过氧化氢 衰老 小鼠
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短节段颈椎前路椎间盘切除融合术术前C_(2)倾斜角与术后两年疗效相关性分析
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作者 程招军 龚焱 +4 位作者 甘延池 何嘉辉 梁德 任辉 江晓兵 《中国修复重建外科杂志》 北大核心 2025年第3期341-345,共5页
目的探讨短节段颈椎前路椎间盘切除融合术(anterior cervical discectomy and fusion,ACDF)术前C_(2)倾斜角(C_(2)slope,C2S)与术后2年疗效的相关性,以期为预测手术结局提供可靠指标。方法以2018年1月—2022年12月接受短节段ACDF治疗的... 目的探讨短节段颈椎前路椎间盘切除融合术(anterior cervical discectomy and fusion,ACDF)术前C_(2)倾斜角(C_(2)slope,C2S)与术后2年疗效的相关性,以期为预测手术结局提供可靠指标。方法以2018年1月—2022年12月接受短节段ACDF治疗的脊髓型颈椎病患者作为研究对象,其中118例符合选择标准纳入研究。其中,男46例,女72例;年龄26~80岁,平均53.6岁。手术时间(127.57±33.46)min,术中出血量(34.75±30.40)mL。术后均获随访2年。记录手术前后颈椎功能障碍指数(NDI)、日本骨科协会(JOA)评分、疼痛视觉模拟评分(VAS);基于颈椎正侧位X线片,测量颈椎矢状位参数[C_(2)~C_(7) Cobb角、C_(0)~C_(2)Cobb角、T1倾斜角、C2S、手术节段前凸角(sagittal segmental angle,SSA)、手术节段平均椎间隙高度(average surgical disc height,ASDH)],统计分析上述指标手术前后差异以及术前C2S与术后2年JOA评分、NDI及VAS评分相关性。根据术前C2S中位数(11.73°)将患者分为A组(>11.73°)及B组(≤11.73°),对两组术前及术后2年JOA评分、NDI、VAS评分以及手术前后差值(变化值)进行比较。结果118例患者术后即刻T1倾斜角、C_(2)~C_(7) Cobb角、C_(0)~C_(2)Cobb角、SSA、ASDH以及术后2年JOA评分、NDI、VAS评分均较术前改善(P<0.05)。Pearson相关分析示,术前C2S与术后2年JOA评分、NDI无相关(P>0.05),与术后2年VAS评分成负相关(P<0.05)。118例患者中,59例术前C2S>11.73°(A组)、59例≤11.73°(B组)。两组患者术前JOA评分、NDI、VAS评分差异均无统计学意义(P>0.05)。术后2年VAS评分及变化值A组均优于B组,差异有统计学意义(P<0.05);JOA评分、NDI组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论脊髓型颈椎病患者术前C2S越大,短节段ACDF术后2年疼痛程度越轻,远期疗效更好。 展开更多
关键词 C_(2)倾斜角 颈椎前路椎间盘切除融合术 脊髓型颈椎病 矢状位参数
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