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刚地弓形虫抑制蛋白的原核表达与免疫反应性分析 被引量：3
1
作者 原飞 刘转转 +3 位作者 张波 曹建平 郑葵阳 王德广 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期21-24,共4页
目的克隆并表达刚地弓形虫抑制蛋白(Tg PRF)基因,并分析其免疫反应性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据Tg PRF的基因编码序列设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入p ET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α,经双酶切... 目的克隆并表达刚地弓形虫抑制蛋白(Tg PRF)基因,并分析其免疫反应性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据Tg PRF的基因编码序列设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入p ET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落。p ET30a(+)-Tg PRF转化至E.coli BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。重组蛋白经镍亲和层析法纯化后,以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析r Tg PRF蛋白的免疫反应性。结果 Tg PRF基因RT-PCR扩增产物约为492 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒p ET30a(+)-Tg PRF构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约35 000的可溶性重组蛋白。Western blotting结果显示,r Tg PRF蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论本研究克隆的Tg PRF基因序列能在原核表达系统中表达,且具有免疫反应性。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 抑制蛋白 基因克隆 原核表达 免疫反应性
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TRAIL联合水飞蓟素对人肝癌Huh7细胞凋亡的影响 被引量：4
2
作者 徐志辉 赵金金 +6 位作者 尤红娟 胡磊 罗文雅 李向阳 郑葵阳 陈明 汤仁仙 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期562-565,共4页
目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合水飞蓟素(Sili)对人肝癌Huh7细胞凋亡的影响。方法 CCK8法检测细胞增殖抑制;分光光度法检测细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9相对活性;Western blot检测细胞表面死亡受体4(DR4)、... 目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合水飞蓟素(Sili)对人肝癌Huh7细胞凋亡的影响。方法 CCK8法检测细胞增殖抑制;分光光度法检测细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9相对活性;Western blot检测细胞表面死亡受体4(DR4)、死亡受体5(DR5)的表达。结果 Sili与TRAIL联合作用Huh7细胞后,联合用药组与对照组及单独用药组相比,Huh7细胞的增殖率明显下降;caspase-3、caspase-8、caspase-9的相对活性明显提高。Sili作用Huh7细胞后能明显提高DR4、DR5蛋白表达。结论 Sili可通过上调死亡受体DR4、DR5表达而促进TRAIL诱导的Huh7细胞凋亡,为肝细胞癌的临床治疗提供了新的思路和方法。 展开更多
关键词 TRAIL 水飞蓟素 肝细胞癌 凋亡
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甘西鼠尾草总酚酸提取物抗嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激损伤 被引量：3
3
作者 刘翔 任红旗 +9 位作者 杨阳 戴德淑 柳云 李向阳 颜超 华慧 刘瀛 戴春 尹忠诚 汤仁仙 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期322-329,共8页
目的研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)在体内和体外对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠足细胞以及PAN诱导小鼠足细胞氧化应激损伤的作用。方法 (1)建立PAN肾病大鼠动物模型,给予SPE和他克莫司干预,分别在第5、10、15、21天留取肾组织标本,... 目的研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)在体内和体外对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠足细胞以及PAN诱导小鼠足细胞氧化应激损伤的作用。方法 (1)建立PAN肾病大鼠动物模型,给予SPE和他克莫司干预,分别在第5、10、15、21天留取肾组织标本,WT1染色计数足细胞数目,免疫荧光观察8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)荧光强度。(2)体外采用PAN致足细胞损伤模型,PAN作用小鼠足细胞24h,分别加入含SPE、丹酚酸B(SalB)、迷迭香酸(RA)及他克莫司的培养基培养6、12、24、48h,观察足细胞骨架相关蛋白F-actin的表达,流式细胞仪分析细胞内活性氧(ROS)荧光强度。结果 (1)肾小球WT1细胞计数结果显示,PAN组第5天时足细胞数已开始下降,第15天达(14.4±0.7)个/肾小球切面,较正常组(37.2±1.5)个/肾小球切面减少(P<0.05),SPE组与阳性对照组(他克莫司组)各时间点足细胞数量高于PAN组;第15天时,阳性对照组肾小球WT1细胞计数与SPE高剂量组较为接近(P>0.05)。第5天时PAN组大鼠肾组织8-OHdG荧光强度较正常组增强,第10天上升至高峰,而后开始减弱,第15天时仍高于正常组;给予药物干预后,大鼠肾组织的8-OHdG荧光强度降低,其中阳性对照组与SPE高剂量组8-OHdG荧光强度较为接近。(2)体外研究发现,PAN作用24h后,F-actin几乎完全解聚,少数细胞尚有残存的被切断的丝状结构,给予SPE、SalB、RA及他克莫司治疗后,PAN诱导的足细胞损伤明显减弱,细胞内重新出现极性分布的微丝。与正常组相比,PAN作用小鼠足细胞24h后ROS荧光强度增加(P<0.05)。给予药物干预后足细胞内ROS荧光强度降低,24hSPE低剂量组、SalB高剂量组和RA高剂量组与阳性对照组足细胞内ROS的荧光强度降低程度相近(P>0.05),24hSalB降低足细胞内ROS荧光强度效果优于RA,且与药物剂量呈正相关。结论本研究从体内及体外证实,SPE对PAN所致足细胞氧化应激损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 嘌呤霉素氨基核苷 足细胞 甘西鼠尾草 总酚酸提取物 丹酚酸B 迷迭香酸 8-羟基脱氧鸟苷 活性氧
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细粒棘球蚴感染小鼠单核髓源抑制性细胞精氨酸酶的表达和活性研究 被引量：6
4
作者 曹胜魁 潘伟 +2 位作者 刘华 曹建平 沈玉娟 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期27-31,共5页
目的分析细粒棘球蚴感染小鼠单核髓源抑制性细胞(M-MDSC)精氨酸酶的表达和活性变化。方法 12只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组和感染组。感染组小鼠腹腔注射活原头节2 000个/只,对照组小鼠注射等体积生理盐水。于感染后120 d采集小鼠眼... 目的分析细粒棘球蚴感染小鼠单核髓源抑制性细胞(M-MDSC)精氨酸酶的表达和活性变化。方法 12只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组和感染组。感染组小鼠腹腔注射活原头节2 000个/只,对照组小鼠注射等体积生理盐水。于感染后120 d采集小鼠眼眶静脉丛外周血,解剖并观察小鼠腹腔和各脏器的病变。无菌取小鼠脾组织,制备单细胞悬液后,利用免疫磁珠分离M-MDSC。提取并纯化M-MDSC RNA,合成c DNA,芯片检测筛选感染组和对照组的M-MDSC差异基因,荧光定量PCR验证差异基因的表达。精氨酸酶检测试剂盒检测小鼠外周血中的精氨酸酶活性。结果BALB/c小鼠感染细粒棘球蚴原头节后120 d,腹腔和内脏器官中形成单性包囊。免疫磁珠分离获得M-MDSC。芯片杂交和荧光定量PCR检测结果显示,感染组小鼠M-MDSC源精氨酸酶相对表达量分别为7.92±0.85和11.97±5.39,均高于对照组小鼠(1.65±0.19和1.00±0.57)(P<0.05)。检测结果表明,感染组小鼠外周血中的精氨酸酶活性为(3.83±0.44)U/L,高于对照组小鼠[(1.57±0.57)U/L](P<0.05)。结论细粒棘球蚴感染小鼠M-MDSC精氨酸酶的表达量和活性显著升高。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 精氨酸酶 荧光定量PCR 芯片杂交 髓源抑制性细胞
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TLR4在华支睾吸虫感染致小鼠肝纤维化作用的研究 被引量：3
5
作者 张文娟 付琳琳 刘宜升 《中国热带医学》 CAS 2014年第5期541-544,共4页
目的探讨TLR4基因在华支睾吸虫感染小鼠致肝纤维化中的作用。方法建立感染华支睾吸虫C3H/HeN(TLR4野生型)与C3H/HeJ(TLR4基因突变型)小鼠模型,在感染后1d、7d、2W、4W、8W、12W取小鼠肝脏,切片并进行HE和Masson染色,观察病理变化。结果 ... 目的探讨TLR4基因在华支睾吸虫感染小鼠致肝纤维化中的作用。方法建立感染华支睾吸虫C3H/HeN(TLR4野生型)与C3H/HeJ(TLR4基因突变型)小鼠模型,在感染后1d、7d、2W、4W、8W、12W取小鼠肝脏,切片并进行HE和Masson染色,观察病理变化。结果 C3H/HeN小鼠肝脏大体病变从2W开始,随感染时间延长而加重;C3H/HeJ小鼠从2W开始,4W加重,至8W已明显减轻。观察HE、Masson染色肝脏切片示随感染时间的延长,C3H/HeN小鼠前期肝纤维化逐渐加重,至8W起趋于稳定;2W^12W纤维化评分均高于感染前(P<0.01)。C3H/HeJ小鼠肝纤维化评分2W升高,4W达高峰并显著高于感染前(P<0.01),至8W明显下降。与C3H/HeN比较,感染后2W、4W、8W、12W C3H/HeJ小鼠肝纤维化程度轻(P<0.01)。感染后7d,C3H/HeN小鼠的HE染色切片上可见嗜酸性粒细胞,4W达高峰,此后明显减少。感染后2W、4W、8W,C3H/HeJ小鼠嗜酸性粒细胞较C3H/HeN小鼠少(P<0.05)。结论 TLR4基因缺失可能在华支睾吸虫感染致肝纤维化过程起一定的阻制作用,从而减缓肝纤维化的进程。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 TLR4 肝纤维化 炎症
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106株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析与SCCmec基因分型及pvl基因研究 被引量：15
6
作者 徐银海 纵帅 +4 位作者 顾兵 徐萍萍 丁宸 寇艳波 王莹宇 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第20期4561-4564,共4页
目的研究医院感染分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性,对葡萄球菌染色体mec(SCCmec)基因进行分型,并检测杀白细胞素(PVL)毒力基因,以明确MRSA耐药表型和流行病学特征,为临床治疗提供参考。方法收集2011-2014年金黄色葡萄球菌(S... 目的研究医院感染分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性,对葡萄球菌染色体mec(SCCmec)基因进行分型,并检测杀白细胞素(PVL)毒力基因,以明确MRSA耐药表型和流行病学特征,为临床治疗提供参考。方法收集2011-2014年金黄色葡萄球菌(SAU)179株并鉴定出MRSA,采用K-B法进行耐药表型检测,多重PCR进行SCCmec基因分型,普通PCR检测pvl基因携带情况。结果 179株SAU中共鉴定出106株MRSA,检出率为59.2%;MRSA对万古霉素、喹奴普汀/达福普汀、利奈唑胺和替考拉宁耐药率为0,对利福平、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和呋喃妥因的耐药率分别为43.4%、21.7%和4.8%,对其他抗菌药物耐药率均>50.0%;106株MRSA被分为3个型别,其中SCCmecⅢ型77株(72.6%),SCCmecⅡ型11株(10.4%),SCCmecⅣ型2株(1.9%),未分型16株(15.1%);4株MRSA被检出pvl基因阳性,携带率为3.8%。结论 MRSA总体呈严重的多药耐药性,未发现万古霉素耐药株;临床MRSA分离株以SCCmecⅢ型为主,Ⅱ型次之;应重点关注携带pvl基因的SCCmecⅢ型多药耐药MRSA株。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 葡萄球菌染色体mec盒 杀白细胞素
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刚地弓形虫抑制蛋白主要特性分析与抗原表位预测 被引量：2
7
作者 刘转转 原飞 +3 位作者 张波 郑葵阳 张小凡 马佳智 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2015年第6期352-355,共4页
目的用生物信息学方法分析刚地弓形虫抑制蛋白（ T. gondii profilin, TgPRF）的主要特性与抗原表位，筛选该蛋白的T／B细胞联合抗原表位。方法利用NCBI上的ORF finder, Prot-Param, SignalP, TMHMM. MotifScan. WoLF PSORT, PSORT Ⅱ, ... 目的用生物信息学方法分析刚地弓形虫抑制蛋白（ T. gondii profilin, TgPRF）的主要特性与抗原表位，筛选该蛋白的T／B细胞联合抗原表位。方法利用NCBI上的ORF finder, Prot-Param, SignalP, TMHMM. MotifScan. WoLF PSORT, PSORT Ⅱ, SOPMA, Bcepred. SYFPEITHI.NetCTL等生物信息学在线分析程序．结合Gene Runner和DNAMAN等生物信息学软件．分析并预测TgPRF蛋白的开放阅读框、理化性质、信号肽、跨膜区、翻译后修饰位点、亚细胞定位、二级结构、表面可及性、可塑性、亲（疏）水性及T/B细胞抗原表位。结果TgPRF基因的开放式阅读框为492个碱基的核苷酸序列。TgPRF蛋白由163个氨基酸组成，相对分子质量为17555．2，分子式为C764H^1160N204O258S7，等电点为4．40，有4个表面可及性参数≥1．9的区域、5个亲水性参数得分≥1．9的区域、3个柔韧性参数得分≥2的区域、10个翻译后修饰位点、8个潜在B细胞抗原表位和3个T／B细胞联合表位。结论TgPRF蛋白有多个优势抗原表位．为后续弓形虫免疫保护性的研究提供理论指导。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 抑制蛋白 生物信息学 抗原表位
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