利用PCR技术检测537份新疆结核病人痰标本中的结核分枝杆菌 被引量：1

1

作者 蔡宏 李君莲 +5 位作者 呼西旦 李淑霞 黄丽茜 陈银华 许苗 朱玉贤 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第4期65-67,共3页

目的　提高聚合酶链反应在检测人结核分枝杆菌中的特异性和敏感性。方法　在聚合酶链反应中对 4种DNA片段即结核杆菌特异插入序列IS6 110 ,IS10 81,和 16SrRNA ,6 5kDa摸板进行了比较 ;为获取较多的细菌DNA ,临床痰标本处理采用了国际... 目的　提高聚合酶链反应在检测人结核分枝杆菌中的特异性和敏感性。方法　在聚合酶链反应中对 4种DNA片段即结核杆菌特异插入序列IS6 110 ,IS10 81,和 16SrRNA ,6 5kDa摸板进行了比较 ;为获取较多的细菌DNA ,临床痰标本处理采用了国际标准化方法主要包括用一定量的N -乙酰 -L半胱胺酸和氢氧化钠处理痰标本 ;改进了RCR混和液的成份即添加了甘油 ,dUTP -尿嘧啶糖基化酶。结果　选择IS6 110作为结核杆菌特异性摸板用于检测细菌DNA ,制备出了 6批人结核杆菌PCR检测试剂盒 ,在对来自新疆结核病研究所的 5 37份痰标本的检测中发现 ,该试剂盒检测的特异性为 6 5 .97% ,敏感性为 93 .5 3 %。结论改良TB -PCR试剂盒显示有较高的敏感性 ,特异性还有待于进一步完善 ,该试剂盒在临床诊断中有一定的价值。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 痰标本 聚合酶链式反应 结核杆菌PCR检测试剂盒 结核病

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PCR指印技术对新疆结核病病原Bacter460液体培养标本进行菌株分型

2

作者 李淑霞 蔡宏 +4 位作者 呼西旦 黄丽茜 张玲 李君莲 许苗 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期84-86,共3页

以结核分枝杆菌特异插入序列IS6 110两端序列为模板 ,设计一对外向PCR引物进行PCR扩增 ,从而建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型技术 ,该试验的基础是利用IS6 110在结核分枝杆菌染色体DNA中反复重复且IS6 110序列之间相距较近 ,... 以结核分枝杆菌特异插入序列IS6 110两端序列为模板 ,设计一对外向PCR引物进行PCR扩增 ,从而建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型技术 ,该试验的基础是利用IS6 110在结核分枝杆菌染色体DNA中反复重复且IS6 110序列之间相距较近 ,经PCR扩增呈现多条带型构成DNA指印。在对新疆结核病人的 31份液体培养标本的PCR检测呈现 6种指印 ,该PCR分型技术对结核分枝杆菌的分型所需时间短 ,不需细菌再培养 ,DNA纯化和酶切、萨瑟恩转印或核酸杂交等繁琐步骤。证明该法是一种快速。 展开更多

关键词 人结核分枝杆菌 PCR扩增 指印分析 结核病

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结核分枝杆菌中插入序列的研究 被引量：14

3

作者 蔡宏 李君莲 +2 位作者 武坚 张曼夫 陈永福 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期120-126,共7页

用人型复合分枝杆菌的特异插入序列ＩＳ６１１０和ＩＳ１０８１制备探针，对５种限制性内切酶消化的结核分枝杆菌ＤＮＡ进行杂交。结果表明，经ＰｖｕⅡ酶消化的结核分枝杆菌ＤＮＡ，用ＩＳ６１１０制备的探针进行杂交呈现高度多态性，... 用人型复合分枝杆菌的特异插入序列ＩＳ６１１０和ＩＳ１０８１制备探针，对５种限制性内切酶消化的结核分枝杆菌ＤＮＡ进行杂交。结果表明，经ＰｖｕⅡ酶消化的结核分枝杆菌ＤＮＡ，用ＩＳ６１１０制备的探针进行杂交呈现高度多态性，说明ＩＳ６１１０对于人型复合分枝杆菌分型研究和结核病流行病学研究具有很大价值。用ＩＳ６１１０制备的３１７ｂｐ探针对４６株人结核分枝杆菌分离株多态性分析研究证实，这些菌株呈现高度ＤＮＡ多态性，而且所含拷贝数也极为不同，一般含７～１８个拷贝。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 插入序列 RFLP IS6110 IS1081

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采用限制性酶切片段长度多态性和PCR指印技术对牛结核分枝杆菌分型研究 被引量：7

4

作者 蔡宏 李淑霞 +3 位作者 呼西旦 李君莲 许苗 朱玉贤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期175-179,共5页

5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后 ,用来自IS10 81中的 2 48bp荧光探针杂交后进行限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)分型 ,5株牛分离株中有 4株具有相同杂交带型 ,剩余的 1株在 3.6kb处多了 1条带。将 2 48bp探针对北京牛结核分枝杆菌... 5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后 ,用来自IS10 81中的 2 48bp荧光探针杂交后进行限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)分型 ,5株牛分离株中有 4株具有相同杂交带型 ,剩余的 1株在 3.6kb处多了 1条带。将 2 48bp探针对北京牛结核分枝杆菌分离株的RFLP分型法结果与直接反向PCR分型法对上述分离株分型结果比较发现 :5株牛结核分枝杆菌分离株中有 2株具有相同的PCR指印带型 ,剩余 3株牛结核分枝杆菌分离株则PCR指印带型各不相同 ,上述结果显示出 ,直接反向PCR分型法较标准的RFLP分型法分型能力强。直接PCR法对新疆牛结核分枝杆菌分离株的分型结果显示出 ,PCR指印带型中带数较少 ,且与北京牛结核分枝杆菌分离株的PCR指印带型截然不同。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 插入序列 限制性酶切片段长度多态性 直接反向PCR 分型

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人结核分枝杆菌特异性核酸探针制备及结核病PCR检测技术的初步临床应用 被引量：1

5

作者 蔡宏 陈东 +2 位作者 徐治新 李君莲 周文来 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期466-470,共5页

采用人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberulosis TB)染色体DNA为模板,选择位于插入片段IS6110中884～865和568～588碱基对处的两个片段为引物,扩增出317bp的特异性片段,将其克隆进pUC19载体。酶切图谱分析和DNA序列测定证实为目的片段... 采用人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberulosis TB)染色体DNA为模板,选择位于插入片段IS6110中884～865和568～588碱基对处的两个片段为引物,扩增出317bp的特异性片段,将其克隆进pUC19载体。酶切图谱分析和DNA序列测定证实为目的片段。该片段经DIG标记,分别与11种分枝杆菌DNA进行Southern杂交,结果证明只与人型复合分枝杆菌发生杂交反应。利用该对引物建立的PCR检测技术对74份结核病痰液标本进行检测,并与临床细菌快速培养结果相比较,发现48份临床阳性均为PCR阳性,在26份临床阴性标本中亦发现11份PCR检测阳性。将标本PCR产物与克隆探针进行杂交,显示两者结果完全一致。说明PCR检测体系结果可靠,其灵敏度明显高于目前临床所采用的方法,可作为一种常规技术用于结核病的临床检测。 展开更多

关键词 人结核分枝杆菌 特异性核酸探针 PCR 结核病

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人结核病病原菌型的PCR指印分析

6

作者 呼西旦 蔡宏 +3 位作者 李淑霞 张玲 李君莲 许苗 《西北农业学报》 CSCD 2000年第2期11-14,共4页

以结核分枝杆菌特异插入序列 IS61 1 0两端序列为模板 ,设计一对外向 PCR引物进行 PCR扩增 ,从而建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型技术 ,该试验的基础是利用 IS61 1 0在结核分枝杆菌染色体DNA中反复重复且 IS61 1 0序列之间相... 以结核分枝杆菌特异插入序列 IS61 1 0两端序列为模板 ,设计一对外向 PCR引物进行 PCR扩增 ,从而建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型技术 ,该试验的基础是利用 IS61 1 0在结核分枝杆菌染色体DNA中反复重复且 IS61 1 0序列之间相距较近 ,经 PCR扩增呈现多条带型构成 DNA指印。采用 PCR指印技术 ,对人结核病患者痰标本中的结核分枝杆菌进行分型 ,57份痰标本呈现 7种 PCR指印。该 PCR分型技术对结核分枝杆菌的分型所需时间短 ,不需细菌再培养、DNA纯化和酶切 ,萨瑟恩转印或核酸杂交等繁琐步骤。经过对 57份标本的检测 ,证明该法是一种快速、准确的鉴定与分析方法 。 展开更多

关键词 人结核分枝杆菌 PCR扩增 指印分析

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牛结核分枝杆菌特异性核酸探针的克隆与分析 被引量：8

7

作者 蔡宏 陈东 +3 位作者 李君莲 周文来 谷登峰 陈永福 《中国畜禽传染病》 CSCD 1996年第6期13-16,共4页

牛结核分枝杆菌是引占结核病的致病源，其染色体ＤＮＡ中含有插入序列ＩＳ１０８１，属于结核杆菌类特异性基因片段，在牛结核杆菌染色体中含有６个拷贝。目前国外普遍有杉该片段作为探针对牛结核病进行鉴定和诊断。本试验采用牛结核分... 牛结核分枝杆菌是引占结核病的致病源，其染色体ＤＮＡ中含有插入序列ＩＳ１０８１，属于结核杆菌类特异性基因片段，在牛结核杆菌染色体中含有６个拷贝。目前国外普遍有杉该片段作为探针对牛结核病进行鉴定和诊断。本试验采用牛结核分枝杆菌染色体Ｄ避的特民插入片段即ＩＳ１０８１为模闰于ＩＳ１０８１中４３８－４５９和６６４－６８５碱基 的两个片段为引物。利用ＰＣＲ技术扩增出一段２４８ｂｐ的特异性片段。 展开更多

关键词 牛病 结核分枝杆菌 结核病 核酸探针 克隆

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牛结核分枝杆菌基因文库的构建 被引量：2

8

作者 蔡宏 陈东 +3 位作者 李淑霞 呼西旦 李君莲 陈永福 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期114-116,共3页

以国际标准牛型结核分枝杆菌（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）ＴＭＣ４１０为材料，制备其总ＤＮＡ，经过限制性内切酶Ｓａｕ３Ａ部分消化后，纯化回收９～２５Ｋｂ片段，并将其用Ｔ４ＤＮＡ连接酶与经ＢａｍＨＩ酶切为粘性末端的ＬａｍｂｄａＥＭＢ... 以国际标准牛型结核分枝杆菌（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）ＴＭＣ４１０为材料，制备其总ＤＮＡ，经过限制性内切酶Ｓａｕ３Ａ部分消化后，纯化回收９～２５Ｋｂ片段，并将其用Ｔ４ＤＮＡ连接酶与经ＢａｍＨＩ酶切为粘性末端的ＬａｍｂｄａＥＭＢＬ３左右臂连接。用噬菌体包装蛋白包装，再进行连续稀释，然后将不同稀释度的噬菌体转移到宿主菌ＬＥ３９２。所获重组子为６×１０４，因为牛结核杆菌基因组大小约为４×１０６Ｋｂ则以９９％概率筛到任一基因，要求的重组子数为１．０８×１０３。 展开更多

关键词 牛 结核分枝杆菌 基因文库

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动员全社会、积极开展防痨科普工作——新疆防痨科普工作经验介绍

9

《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2002年第z1期55-57,共3页

　　新疆属于结核病疫情较高的省区之一,作为卫V项目贷款者,在各级政府领导下和各级卫生行政部门医疗单位支持协作下,结核病控制工作取得了一定的成绩.在各项工作中,我们深深感到防痨科普宣传教育工作确实起到了排头兵的作用,甚至关系... 　　新疆属于结核病疫情较高的省区之一,作为卫V项目贷款者,在各级政府领导下和各级卫生行政部门医疗单位支持协作下,结核病控制工作取得了一定的成绩.在各项工作中,我们深深感到防痨科普宣传教育工作确实起到了排头兵的作用,甚至关系到防痨事业的成败.众所周知,防痨科普宣传教育工作是以控制结核病为目标的专业性宣传鼓动与健康教育工作,同时也是一项广泛的社会性群众性及艺术性很强的科普教育工作,其目的是通过广泛的宣传教育,使不同人群改变不正确的认识与行为、提高结核病防治的知识水平,这也是结核病控制工作的一项战略性措施.…… 展开更多

关键词 结核病防治 结防工作 卫生行政 科普宣传活动 新疆 宣传教育工作

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新疆开展中心登记工作的经验

10

作者 黄毓邦 葛淑艳 徐洁 《结核病健康教育》 1993年第1期21-22,共2页

中心登记是结核病防治的基础工作。通过建立健全中心登记工作制度,实行科学管理,保证治疗效果;及时、准确、完整、系统地搜集防治信息,对防治工作实施系统监测研究;可以经常性地取得结核病发病、患病趋势资料,从而不断完善工作计划,调... 中心登记是结核病防治的基础工作。通过建立健全中心登记工作制度,实行科学管理,保证治疗效果;及时、准确、完整、系统地搜集防治信息,对防治工作实施系统监测研究;可以经常性地取得结核病发病、患病趋势资料,从而不断完善工作计划,调整防治对策。自1989年起,自治区所在全疆开展中心登记工作,取得一些初步的经验和体会: 一、开展中心登记工作的基本条件:首先必须建立健全各级结防机构。 展开更多

关键词 中心登记 建立健全 防治工作 结核病防治 新疆 防治对策 结核病人 患病趋势 工作质量 科学管理

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新疆“贷款项目”实施两年浅述

11

作者 曾庆博 哈丽达 穆合力斯 《结核病健康教育》 1994年第2期17-19,共3页

结核病控制项目是成本低,健康效益很高的举措。根据新疆自治区结核病控制实施计划,从1992年第二季度开始实施,至1994年6月底止,全自治区的96个县(市、区)及新疆生产建设兵团应全部覆盖项目的结核病控制工作,至1998年项目控制工作应告结束。

关键词 结核病控制项目 肺结核病人 管理工作 贷款项目 新疆自治区 新疆生产建设兵团 督导管理 复治涂阳 项目控制 健康效益

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新疆自治区结核病疫情和防治对策 被引量：3

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作者 赵冬芳 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期313-314,共2页

新疆自治区结核病疫情和防治对策赵冬芳１９７９年起新疆参加了三次全国结核病流行病学抽样调查，不仅掌握了全区结核病基本疫情和发展态势，为结核病防治工作的客观评价、调整、制定更有效的结核病控制对策提供了科学依据。今报告于下... 新疆自治区结核病疫情和防治对策赵冬芳１９７９年起新疆参加了三次全国结核病流行病学抽样调查，不仅掌握了全区结核病基本疫情和发展态势，为结核病防治工作的客观评价、调整、制定更有效的结核病控制对策提供了科学依据。今报告于下：新疆结核病疫情现况１．患病趋势：... 展开更多

关键词 新疆 结核病 疫情 防治

原文传递

采用PCR法和限制性内切酶分析对12种分枝杆菌进行鉴定

13

作者 蔡宏 李淑霞 +4 位作者 呼西旦 李君莲 武坚 张曼夫 陈永福 《西北农业学报》 CAS CSCD 1999年第2期6-10,共5页

采用６５ＫＤａ热激蛋白基因为模板，选择位于３９８－８３６基因序列处的一对分枝杆菌通用引物，扩增出４３９ｂｐ的基因片段。将１２种标准分枝杆菌的ＰＣＲ扩增产物即４３９ｂｐ用ＢｓｔＥⅡ限制性内切酶作酶切分析，根据酶切带型的... 采用６５ＫＤａ热激蛋白基因为模板，选择位于３９８－８３６基因序列处的一对分枝杆菌通用引物，扩增出４３９ｂｐ的基因片段。将１２种标准分枝杆菌的ＰＣＲ扩增产物即４３９ｂｐ用ＢｓｔＥⅡ限制性内切酶作酶切分析，根据酶切带型的大小、强弱以及带型数量进行分枝杆菌菌种鉴定。通过对１２种分枝杆菌的ＰＣＲ反应和限制性酶切分析，可将被检标本中大部分的分枝杆菌鉴定到种。本试验无需进行杂交或使用放射性物质，２４ｈ即可完成。 展开更多

关键词 分枝杆菌 PCR 限制性酶切分析

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新生儿卡介苗接种阳转率不稳定性问题

14

作者 曾庆博 宋敏 《结核病健康教育》 1995年第2期19-20,共2页

目前大家已公认对儿童卡介苗接种,虽不能阻止发病,但对降低儿童结核病发病率、死亡率方面有明显作用,尤其是在预防儿童血型播散肺结核及结核性脑膜炎方面作用显著。一、现状调查

关键词 新生儿卡介苗接种率 阳转率 乌鲁木齐市 结核病防治 儿童 结核性脑膜炎 现状调查 结核病发病率 肺结核病人 显著差异

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乌鲁木齐市新生儿卡介苗接种效果分析(摘要)

15

作者 曾庆博 宋敏 《新疆医学》 1996年第1期51-52,共2页

目前大家认为对儿童进行卡介苗接种,虽不能阻止发病,但对降低儿童结核病的发病率和死亡率有明显作用,尤其是在预防儿童血行播散型肺结核及结核性脑膜炎方面作用显著。据1990年全国第三次结核病流行病学抽样调查,我区儿童结核感染率为7.0... 目前大家认为对儿童进行卡介苗接种,虽不能阻止发病,但对降低儿童结核病的发病率和死亡率有明显作用,尤其是在预防儿童血行播散型肺结核及结核性脑膜炎方面作用显著。据1990年全国第三次结核病流行病学抽样调查,我区儿童结核感染率为7.03％,患病率为0.67％,涂阳患病率为0.19％,菌阳患病率为0.27％,空洞患病率为0.16％。因此,我区今后一段时期。 展开更多

关键词 卡介苗接种 新生儿 乌鲁木齐市 效果

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