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干扰NaV1.9对RAW264.7细胞增殖、吞噬和迁移的影响 被引量：3
1
作者 罗悦晨 周欣 +4 位作者 姬文婕 孙海英 卢芮伊 姜铁民 李玉明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期225-228,共4页
目的应用RNA干扰技术沉默RAW264.7小鼠巨噬细胞中电压门控性钠通道(VGSCs/NaVs)α亚单位NaV1.9基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能的影响。方法通过LipofectamineTM2000将短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转... 目的应用RNA干扰技术沉默RAW264.7小鼠巨噬细胞中电压门控性钠通道(VGSCs/NaVs)α亚单位NaV1.9基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能的影响。方法通过LipofectamineTM2000将短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选获得稳定细胞株。用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定干扰效率,CCK-8法测定稳定细胞株的增殖活性,流式细胞术检测细胞的细胞周期及吞噬能力,Transwell小室法检测细胞的迁移功能。结果成功建立稳定干扰NaV1.9的细胞株,RT-PCR法鉴定干扰效率达80%。CCK-8法及流式细胞术结果显示,降低NaV1.9的表达使细胞增殖活性下降(P<0.05);流式细胞术结果显示,抑制NaV1.9的表达使细胞吞噬能力降低(P<0.05);Transwell小室法结果显示,干扰NaV1.9的表达使细胞迁移能力减弱(P<0.05)。结论建立了稳定干扰NaV1.9的RAW264.7细胞株,下调NaV1.9的表达使巨噬细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能显著降低。 展开更多
关键词 NAV1 9 RAW264 7 增殖 吞噬能力 迁移能力
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重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser逆转录病毒载体的构建及表达
2
作者 杨国红 姬文婕 +2 位作者 周欣 毕莹 李玉明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期677-679,共3页
目的:构建重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser(ddVEGF-C)逆转录病毒载体,建立稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,并验证其表达。方法:利用PCR从pSecTag-ddVEGF-C中获取大鼠ddVEGF-C基因,克隆到pLPCX逆转录病毒载体,经PCR、双酶切和测序验... 目的:构建重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser(ddVEGF-C)逆转录病毒载体,建立稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,并验证其表达。方法:利用PCR从pSecTag-ddVEGF-C中获取大鼠ddVEGF-C基因,克隆到pLPCX逆转录病毒载体,经PCR、双酶切和测序验证,转染PT67包装细胞,嘌呤霉素筛选出稳定表达目的基因的包装细胞株,用反转录PCR(RT-PCR)和Western blot方法验证其在RAW 264.7细胞中的表达。结果:构建的pLPCX-ddVEGF-C逆转录病毒载体经双酶切和PCR鉴定正确,测序结果与ddVEGF-C序列一致,病毒滴度为2×107CFU/mL,RT-PCR和Western blot结果提示重组病毒感染RAW264.7细胞能正确表达ddVEGF-C。结论:成功构建了pLPCX-ddVEGF-C逆转录病毒载体,并建立了稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,为以VEGF-C基础的实验研究提供了新工具。 展开更多
关键词 ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser 逆转录病毒载体PT67 pLPCX RAW264.7
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Sonoclot凝血分析法评价冠心病血小板氯吡格雷反应性研究 被引量：2
3
作者 孙海英 周欣 +7 位作者 卢芮伊 杨国红 郭兆增 石 蕊 曾山 姬文婕 姜铁民 李玉明 《中国实用内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期50-53,共4页
目的探讨Sonoclot凝血分析法评价冠心病患者氯吡格雷反应性的有效性。方法选取2012年武警后勤学院附属医院心脏中心收治的82例冠心病患者,分别用Sonoclot凝血分析法和舒血管刺激磷蛋白(VASP)法检测血小板反应性。以血小板VASP测定的血... 目的探讨Sonoclot凝血分析法评价冠心病患者氯吡格雷反应性的有效性。方法选取2012年武警后勤学院附属医院心脏中心收治的82例冠心病患者,分别用Sonoclot凝血分析法和舒血管刺激磷蛋白(VASP)法检测血小板反应性。以血小板VASP测定的血小板反应指数≥50%为氯吡格雷低反应性的标准,探讨Sonoclot凝血分析法与血小板VASP磷酸化法的相关性。结果 Sonoclot凝血分析法中ADP和NON通路中凝血速率差值与凝血酶原时间呈正相关(r=0.22,P<0.05);血小板功能的差值与血小板VASP磷酸化呈正相关(r=0.38,P<0.01);受试者工作特征曲线分析,Sonoclot凝血分析法判定氯吡格雷反应性的曲线下面积为0.67(P<0.01),敏感度为72.34%,特异度为57.14%。结论 Sonoclot凝血分析法与血小板VASP磷酸化法之间存在相关性,可以用于氯吡格雷反应性的评价。 展开更多
关键词 冠心病 凝血功能 血小板反应性 流式细胞术
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四色流式分析冠心病患者外周血单核细胞亚群及单核细胞-血小板聚集体的变化 被引量：8
4
作者 杨国红 卢芮伊 +6 位作者 孙海英 张玲 姬文婕 周欣 石蕊 姜铁民 李玉明 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期29-33,共5页
目的:建立基于四色的流式细胞术检测外周血单核细胞亚群及各亚群单核细胞-血小板聚集体(MPA)的方法,并观察冠心病患者外周血单核细胞亚群及各亚群MPA的变化特点。方法:本研究纳入经冠状动脉造影证实的冠心病患者和健康对照者各25例,记... 目的:建立基于四色的流式细胞术检测外周血单核细胞亚群及各亚群单核细胞-血小板聚集体(MPA)的方法,并观察冠心病患者外周血单核细胞亚群及各亚群MPA的变化特点。方法:本研究纳入经冠状动脉造影证实的冠心病患者和健康对照者各25例,记录所有研究对象的一般临床资料,并采集外周静脉血,依据单核细胞和血小板的标志性分子CD86、CD14、CD16和CD41对单核细胞亚群和MPA进行四色的流式细胞术(FCM)分析。利用抗CD86-PE-Cy5圈出总的单核细胞(总Mon)群,利用抗CD14-FITC和抗CD16-PE将总Mon分为:经典型(CD14++CD16-,Mon1)、中间型(CD14++CD16+,Mon2)和非经典型(CD14+CD16++,Mon3)3个亚群,最后应用CD41-PE-Cy7分析总Mon和各个亚群的MPA,并应用Flow-count TM荧光微球对各个亚群及MPA的绝对量进行计数,比较两组研究对象外周血单核细胞各亚群及各亚群MPA的差异。结果:冠心病组患者外周血Mon2和Mon3所占百分比和绝对计数均显著高于对照组(P<0.05),而Mon1和总Mon两组间比较差异无统计学意义;与对照组相比,冠心病患者总MPA和Mon2相关MPA所占百分比和绝对计数亦显著增高(P<0.05),而Mon1相关MPA和Mon3相关MPA的百分比及绝对计数两组间比较差异无统计学意义。结论:基于CD14、CD16、CD86和CD41的四色流式分析能够有效定量分析外周血单核细胞各亚群及各亚群MPA。中间型单核细胞及其形成的MPA水平显著升高,为临床上冠心病患者的诊治策略提供了新思路。 展开更多
关键词 单核细胞 亚群 血小板 单核细胞-血小板聚集体 流式细胞术
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