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题名流感病毒ns1基因的克隆及其原核表达载体的构建
被引量：3
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作者
张志珍
洪文珊
李康生
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机构
汕头大学医学院-香港大学医学院联合流感研究中心汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室
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出处
《中国病毒学》
CSCD
2004年第5期449-453,共5页
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基金
世界卫生组织资助项目(HQ/01/144185)
中国博士后科学基金(2003034460)
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文摘
为了解H5N1亚型流感病毒株的ns1基因特性及其规模制备NS1蛋白,首先将病毒在鸡胚中传代,从收获的尿囊液中提取RNA,采用RT-PCR技术扩增流感病毒全长ns基因。测序显示H5N1亚型流感病毒NS1cDNA全长678bp,编码225个氨基酸。BLAST分析表明,Qa/ST/852/01(H5N1)病毒株ns1基因与近年来从华南地区分离的禽H5N1毒株的ns1基因有很高的同源性。之后采用PCR方法扩增ns1基因的cDNA片段,将其克隆到pGEX-4T-3载体中,与谷胱甘肽巯基转移酶(GST)基因融合,构建重组质粒pGEX-4T-3/NS1cDNA,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达。SDS-PAGE和凝胶扫描分析,GST-NS1融合蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,并且以可溶形式存在,重组融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的28.5%,表达产物经亲和层析纯化后蛋白质纯度达96%以上。经免疫印记证实重组融合蛋白可以被GST特异性抗体所识别。该表达载体的构建为获得大量NS1蛋白进行功能研究及抗体制备提供了基础。
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关键词
流感病毒
nsl基因
序列分析:克隆
诱导表达
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Keywords
Avian influenzaAvirus
ns1 gene
Sequence analysis
Cloning
Induction expression
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分类号
R346
[医药卫生—基础医学]
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