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电穿孔法转染猪胎儿成纤维细胞条件优化 被引量：3
1
作者 张庆晓 王慧利 +2 位作者 孟春花 王锋 曹少先 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第12期202-204,共3页
以增强型绿色荧光蛋白为报告基因,采用L9(33)正交试验设计,对质粒浓度、电压、脉冲时间等3个因素进行优化,并比较了不同温度处理对转染效率的影响,以及电压对细胞存活率的影响。结果表明,3个因素中质粒浓度对转染效率的影响最大,质粒浓... 以增强型绿色荧光蛋白为报告基因,采用L9(33)正交试验设计,对质粒浓度、电压、脉冲时间等3个因素进行优化,并比较了不同温度处理对转染效率的影响,以及电压对细胞存活率的影响。结果表明,3个因素中质粒浓度对转染效率的影响最大,质粒浓度和电压对转染效率均有显著影响,脉冲时间对转染效率的影响不显著。不同温度处理下的转染效率无显著差异,电压显著影响细胞存活率。质粒浓度40 g/mL、电压280 V、脉冲时间800 s条件下,转染效率最高,为89.8%。 展开更多
关键词 猪 胎儿成纤维细胞 电穿孔 转染 效率 增强型绿色荧光蛋白
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波尔山羊MC4R胞内3环基因片段单核苷酸多态性对体重的影响 被引量：2
2
作者 张俊 钱勇 +3 位作者 钟声 孟春花 王慧利 曹少先 《江苏农业科学》 北大核心 2014年第3期13-15,共3页
为探讨黑素皮质素受体4(melanocortin receptor-4,MC4R)基因多态性对波尔山羊生长性状的影响,对波尔山羊MC4R基因进行了克隆测序,筛选多态性位点。结果表明:MC4R胞内3环基因片段存在2个碱基颠换,分别是编码区663 bp处C/A颠换、693 bp处... 为探讨黑素皮质素受体4(melanocortin receptor-4,MC4R)基因多态性对波尔山羊生长性状的影响,对波尔山羊MC4R基因进行了克隆测序,筛选多态性位点。结果表明:MC4R胞内3环基因片段存在2个碱基颠换,分别是编码区663 bp处C/A颠换、693 bp处C/T颠换;其中693 bp处C/T存在于Csp6Ⅰ酶切位点内,以此建立了基于Csp6Ⅰ酶切的PCR-RFLP检测方法,并对163只波尔山羊进行检测分析;在受检波尔山羊中检测到CC、CT 2种基因型,2种基因型在波尔山羊各月龄体重方面差异均不显著,且在群体中表现为低度多态,群体遗传杂合度较低,表明C693T位点在波尔山羊群体中的遗传一致性较高。 展开更多
关键词 黑素皮质素受体4 克隆 PCR-RFLP 波尔山羊 生长
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山羊Kiss-1基因克隆、表达模式和SNPs筛选 被引量：1
3
作者 李隐侠 张俊 +4 位作者 钱勇 孟春花 王慧利 钟声 曹少先 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期151-157,共7页
Kiss-1在雌性动物生殖过程中发挥重要的作用。为了探讨其在山羊中的功能,本研究以波尔山羊、苏淮山羊新品系和海门山羊为研究对象,通过PCR扩增、测序和序列拼接获得Kiss-1基因编码区序列,利用生物信息学软件分析山羊Kiss-1基因序列特征,... Kiss-1在雌性动物生殖过程中发挥重要的作用。为了探讨其在山羊中的功能,本研究以波尔山羊、苏淮山羊新品系和海门山羊为研究对象,通过PCR扩增、测序和序列拼接获得Kiss-1基因编码区序列,利用生物信息学软件分析山羊Kiss-1基因序列特征,RT-PCR试验鉴定其在山羊中的组织表达模式,采用DNA池测序筛选Kiss-1基因编码区SNPs位点。结果发现3种山羊Kiss-1基因编码区序列长度均为408 bp,编码135个氨基酸残基;海门山羊与苏淮山羊新品系Kiss-1核苷酸序列一致性为100%,与波尔山羊的一致性为98.80%;系统进化发育分析发现海门山羊与苏淮山羊新品系首先聚在一起,然后再与波尔山羊聚在一起;组织表达谱显示Kiss-1基因在肺脏中表达量相对较高,在其他内脏和肌肉组织中表达量很少;DNA池测序发现2个SNPs位点,其中A175C位点突变引起了苏氨酸到脯氨酸的突变,G256A位点突变引起了丙氨酸到苏氨酸的改变。研究结果为进一步研究山羊Kiss-1基因的进化、功能及其与生产性能特别是繁殖性能的关系提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 山羊 KISS-1 基因克隆 组织表达 SNPS
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血清及山羊卵丘细胞共培养对猪胚胎体外发育的促进作用
4
作者 王慧利 李静心 +5 位作者 王婧 孟春花 朱前明 张俊 钱勇 曹少先 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期73-79,共7页
为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后... 为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后添加10%胎牛血清培养至第6天,体外发育能力得到显著改善,卵裂率、囊胚率、囊胚孵化率、囊胚细胞数分别达到95.1%、56.5%、27.3%、79.3;在此基础上,利用山羊卵丘细胞与猪胚胎进行共培养,将囊胚孵化率进一步提高至36.6%,初步建立了一套高效稳定的猪胚胎体外发育系统。 展开更多
关键词 猪胚胎 体外发育 血清 共培养 凋亡
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激活素A对大鼠肌细胞增殖分化的作用
5
作者 赵为民 涂枫 +5 位作者 任守文 方晓敏 李碧侠 赵芳 付言峰 王学敏 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第12期287-289,共3页
激活素A（ActivinA）是转化生长因子β（transforming/mLgrowthfactor-β,TGF-β）超家族中的-员,具有重要的生物学功能.为研究ActivinA在肌肉发育中的作用,以大鼠肌细胞L6为研究模型,通过时空表达谱、CCK-8以及流式细胞周期分析等方法... 激活素A（ActivinA）是转化生长因子β（transforming/mLgrowthfactor-β,TGF-β）超家族中的-员,具有重要的生物学功能.为研究ActivinA在肌肉发育中的作用,以大鼠肌细胞L6为研究模型,通过时空表达谱、CCK-8以及流式细胞周期分析等方法来进行研究.结果表明ActivinA随着肌细胞由增殖转向分化状态,其表达量呈下降趋势.添加不同浓度的ActivinA（5～25ng/mL）均能显著促进L6细胞的增殖速度,且这种促进细胞增殖的效应随着ActivinA浓度的增大而逐渐增强.ActivinA能显著增加S期在细胞周期中的比例,同时缩短G1和G2期在细胞周期中所占的比例.此外,通过添加ActivinA显著抑制了肌肉分化标记基因Myog的表达.以上结果为进一步研究ActivinA在肌肉发育中的作用机制奠定了基础. 展开更多
关键词 大鼠 激活素A(ActivinA) 肌细胞 增殖 细胞周期
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重组猪抑制素的高密度发酵生产条件优化
6
作者 李辉 翟颖超 施振旦 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第8期207-210,共4页
抑制素(INH)是性腺组织分泌的一种糖蛋白,可通过抑制促卵泡素分泌和性腺组织发育,在动物繁殖活动中起着重要的调控作用。通过对INHα亚基免疫,中和动物体内的INH,可解除INH对动物繁殖活动的抑制作用,从而提高动物的繁殖力。为获得大量... 抑制素(INH)是性腺组织分泌的一种糖蛋白,可通过抑制促卵泡素分泌和性腺组织发育,在动物繁殖活动中起着重要的调控作用。通过对INHα亚基免疫,中和动物体内的INH,可解除INH对动物繁殖活动的抑制作用,从而提高动物的繁殖力。为获得大量重组的INHα亚基蛋白,满足生产的需要,本研究对发酵罐高密度发酵工艺进行探索,并分别对发酵培养基的类型、乳糖诱导浓度、诱导时间进行优化。结果表明,采用TB培养基发酵至20 h,菌体D600 nm值达到最大,为22.84,菌体总湿质量为25.48 g/L,显著高于其他2种培养基,综合比较细菌生长趋势、菌体总湿质量以及培养基成本等因素,TB培养基较适用于重组INH的发酵罐生产;终浓度为10 g/L的乳糖诱导5 h可达到最高蛋白表达量,占菌体总蛋白的50%以上,发酵结束时D600 nm值达到36,细菌总湿质量达到28.66 g/L。 展开更多
关键词 抑制素 高密度发酵 乳糖诱导 发酵罐
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