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LncRNA Neat1调控miR-128-3p表达对创伤性脑损伤小鼠认知功能和神经炎症的影响 被引量:2
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作者 余秋男 刘京让 宋海龙 《河北医药》 CAS 2023年第4期490-494,共5页
目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)Neat1靶向调节微小RNA(miR)-128-3p表达对创伤性脑损伤(TBI)小鼠认知功能和神经炎症的影响。方法 通过自由落体法建立TBI小鼠模型。将建模后的小鼠随机分为模型组、腺病毒空载体组(Ad-NC)组、Neat1过表... 目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)Neat1靶向调节微小RNA(miR)-128-3p表达对创伤性脑损伤(TBI)小鼠认知功能和神经炎症的影响。方法 通过自由落体法建立TBI小鼠模型。将建模后的小鼠随机分为模型组、腺病毒空载体组(Ad-NC)组、Neat1过表达腺病毒(Ad-Neat1)组、miR-128-3p抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、miR-128-3p抑制物(miR-128-3p inhibitor)组、Ad-Neat1+miR-128-3p模拟物(Ad-Neat1+miR-128-3p mimic)组、Ad-Neat1+miR-128-3p模拟物阴性对照(Ad-Neat1+mimic NC)组,10只/组,另取10只假手术组小鼠。水迷宫实验检测小鼠认知能力;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠伤灶周围脑组织病理学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Neat1、miR-128-3p表达水平;酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;双荧光素酶实验验证Neat1、miR-128-3p的靶向关系;蛋白免疫印迹(western blot)法检验伤灶周围脑组织中半胱天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、磷酸化核因子-κB p65/核因子-κB p65(p-NF-κB p65/NF-κB p65)表达水平。结果 Neat1和miR-128-3p存在靶向关系。模型组伤灶周围脑组织炎性浸润及细胞坏死较为严重,TNF-α、IL-6水平、miR-128-3p、平均逃避潜伏期、p-NF-κB p65/NF-κB p65、caspase-1表达较假手术组均显著增加(P<0.05),而穿越原平台次数、Neat1表达显著降低(P<0.05)。与Ad-NC组比较,Ad-Neat1组伤灶周围脑组织病理程度得到缓解,TNF-α、IL-6水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、平均逃避潜伏期、caspase-1表达均显著降低(P<0.05),穿越原平台次数、Neat1表达显著升高(P<0.05);与inhibitor NC组比较,miR-128-3p inhibitor组病理程度得到缓解,TNF-α、IL-6水平、平均逃避潜伏期、miR-128-3p、p-NF-κB p65/NF-κB p65、caspase-1表达均显著降低(P<0.05),穿越原平台次数显著升高(P<0.05);miR-128-3p mimic可逆转过表达LncRNA Neat1发挥的作用(P<0.05)。结论 LncRNA Neat1过表达可通过靶向抑制miR-128-3p表达,抑制炎性反应,改善TBI小鼠认知功能。 展开更多
关键词 LncRNA Neat1 miR-128-3p 创伤性脑损伤 认知功能 炎症
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miR-105-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖迁移的影响
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作者 宋海龙 徐东为 +4 位作者 余秋男 荆彦平 李世冲 刘建中 刘京让 《河北医学》 CAS 2023年第6期906-912,共7页
目的:分析微小RNA-105-5p(miR-105-5p)通过调控细胞分裂周期蛋白5样蛋白抗体(CDC5L)对胶质瘤细胞增殖、迁移的影响。方法:收集本院35例经手术治疗的人脑胶质瘤组织及因脑外伤行减压术的正常脑组织样本。取对数生长期U251细胞,分为对照(c... 目的:分析微小RNA-105-5p(miR-105-5p)通过调控细胞分裂周期蛋白5样蛋白抗体(CDC5L)对胶质瘤细胞增殖、迁移的影响。方法:收集本院35例经手术治疗的人脑胶质瘤组织及因脑外伤行减压术的正常脑组织样本。取对数生长期U251细胞,分为对照(control)组、转染miR-105-5p阴性对照(miR-NC)组、转染miR-105-5p模拟物(miR-105-5p mimics)组、转染沉默CDC5L阴性对照(si-NC)组、转染沉默CDC5L(si-CDC5L)组、共转染miR-105-5p mimics及pcDNA(pcDNA)组以及共转染miR-105-5p mimics及pcDNA-CDC5L(miR-105-5p mimics+pcDNA-CDC5L)组。qRT-PCR检测胶质瘤组织、正常脑组织及各组U251细胞中miR-105-5p及CDC5L mRNA的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移;Western blot法检测CDC5L、细胞周期蛋白(CyclinDl)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)表达;双荧光素酶报告实验验证miR-105-5p与CDC5L的靶向关系。结果:与正常脑组织比较,胶质瘤组织中miR-105-5p水平显著下降,CDC5L mRNA显著升高(P<0.05)。miR-105-5p表达水平与CDC5L表达水平呈负相关(r=-0.512,P=0.002)。与control组、si-NC组比较,si-CDC5L组细胞p21蛋白表达量升高(P<0.05),24h、48h、72h OD值、迁移细胞数、CDC5L mRNA表达量及CDC5L、CyclinDl、MMP-2、MMP-9蛋白表达量均降低(P<0.05);与control组、miR-NC组比较,miR-105-5p mimics组miR-105-5p表达量和p21蛋白表达量升高(P<0.05),24h、48h、72h OD值、迁移细胞数、CDC5L mRNA表达量以及CDC5L、CyclinDl、MMP-2、MMP-9蛋白表达量均降低(P<0.05);过表达CDC5L逆转miR-105-5p对U251细胞的增殖、迁移及CyclinDl、MMP-2、MMP-9、p21蛋白蛋白的影响(P<0.05)。双荧光素酶实验验证,CDC5L是miR-105-5p的下游靶点。结论:miR-105-5p通过靶向下调CDC5L抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移。 展开更多
关键词 微小RNA-105-5p 细胞分裂周期蛋白5样蛋白抗体 胶质瘤 增殖 迁移
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紫花牡荆素调节cAMP/PKA信号通路对OGD/R诱导的神经元损伤的影响 被引量:2
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作者 宋海龙 徐东为 +4 位作者 余秋男 荆彦平 李世冲 刘建中 刘京让 《卒中与神经疾病》 2023年第6期557-562,576,共7页
目的 探讨紫花牡荆素(Casticin, CAS)通过调节环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号通路(Cyclic adenosine monophosphate/protein kinase A,cAMP/PKA)对氧糖剥夺/复糖复氧(Oxygen glucose deprivation/recovery, OGD/R)诱导的神经元损伤的影响。方... 目的 探讨紫花牡荆素(Casticin, CAS)通过调节环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号通路(Cyclic adenosine monophosphate/protein kinase A,cAMP/PKA)对氧糖剥夺/复糖复氧(Oxygen glucose deprivation/recovery, OGD/R)诱导的神经元损伤的影响。方法 通过体外培养海马神经元(HT-22),进行OGD/R诱导处理建立神经元损伤模型,使用2~32μmol/L的紫花牡荆素处理细胞,筛选最佳实验水平;将细胞分为对照组(Control组)、模型组(OGD/R组)、紫花牡荆素低、中、高水平组(CAS-L组、CAS-M组、CAS-H组)、紫花牡荆素+cAMP/PKA信号通路抑制剂组(CAS+H-89组);采用细胞计数试剂-8(Cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞形态,Hoechst染色及流式细胞术观察并计算细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测过氧化氢酶(Catalase, CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)以及cAMP水平,Western blot检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Aspartate-specific cysteine proteinase-3,Caspase-3)、PKA、磷酸化PKA(phosphorylated PKA,p-PKA)表达水平。结果 与Control组比较,OGD/R组HT-22细胞细胞核皱缩,细胞崩解,细胞存活率、CAT及SOD,cAMP,p-PKA表达水平显著降低,细胞凋亡率、TNF-α及IL-6,Caspase-3表达水平显著升高(P<0.05);与OGD/R组比较,CAS-L组、CAS-M组、CAS-H组HT-22细胞损伤减轻,细胞存活率、CAT及SOD、cAMP、p-PKA表达水平显著升高,细胞凋亡率、TNF-α及IL-6,Caspase-3表达水平显著降低,且呈水平依赖性(P<0.05);与CAS-H组比较,CAS+H-89组HT-22细胞损伤加重,细胞存活率、CAT及SOD,cAMP,p-PKA表达水平显著降低,细胞凋亡率、TNF-α及IL-6,Caspase-3表达水平显著升高(P<0.05)。结论 紫花牡荆素可以通过激活cAMP/PKA信号通路来减轻OGD/R诱导的神经元损伤。 展开更多
关键词 紫花牡荆素 环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号通路 氧糖剥夺/复糖复氧 神经元损伤
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