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科教协同、小组化讨论在基础医学教学中的运用 被引量：1
1
作者 郑莉灵 周龙 +6 位作者 张汕 Kol Jia Yong 于淼 诗音 李笑雨 王国珍 周以侹 《基础医学教育》 2024年第10期895-899,共5页
基础医学是医学院的一门重要基础学科。目前不少高校师资老化,基础医学教科书更新不够快,教学方式仍是传统“填鸭式”的灌输教学,缺乏科研思维能力的培养和思政教育。针对这些不足,浙江大学基础医学院引入优质青年师资,提倡以科研反哺教... 基础医学是医学院的一门重要基础学科。目前不少高校师资老化,基础医学教科书更新不够快,教学方式仍是传统“填鸭式”的灌输教学,缺乏科研思维能力的培养和思政教育。针对这些不足,浙江大学基础医学院引入优质青年师资,提倡以科研反哺教学,开展小组讨论的教学模式,通过最新文献补充教材,由浅入深引导学生了解最新的科研进展,逐步培养学生的科研思维能力。这种科教协同与小组化讨论模式在基础医学教育中的融合运用将有助于提高教育质量,培养适应现代化科学发展的高素质医学生。 展开更多
关键词 基础医学 科教协同 小组化讨论 生物化学与分子生物学 综合能力
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基于PiggyBac转座子优化稳定表达细胞系的新型瞬时受体电位M2通道抑制剂筛选
2
作者 应凯悦 华宁 +3 位作者 骆燕萍 刘星宇 刘敏 杨巍 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期604-614,共11页
目的:使用PiggyBac(PB)转座系统建立稳定表达瞬时受体电位M2(TRPM2)通道的人胚胎肾细胞HEK293T,并进行TRPM2通道抑制剂筛选,为治疗脑缺血等疾病寻找潜在的药物。方法:根据PB转座原理,构建pPB-hTRPM2真核表达载体。将重组质粒和辅助质粒... 目的:使用PiggyBac(PB)转座系统建立稳定表达瞬时受体电位M2(TRPM2)通道的人胚胎肾细胞HEK293T,并进行TRPM2通道抑制剂筛选,为治疗脑缺血等疾病寻找潜在的药物。方法:根据PB转座原理,构建pPB-hTRPM2真核表达载体。将重组质粒和辅助质粒共同转染至HEK293T细胞中,利用系统携带的荧光与膜片钳鉴定TRPM2基因表达,通过Z'因子评估细胞模型是否适用于钙成像法的高通量筛选。利用钙成像法和膜片钳对11个先导化合物分子进行初步活性评价,测定化合物分子对TRPM2通道的抑制活性。利用氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤模型和细胞计数试剂盒8(CCK-8)方法验证筛选得到的化合物分子对损伤细胞的保护作用。利用流式细胞术检测细胞活性氧水平。利用小鼠短暂性大脑中动脉栓塞(tMCAO)模型评价化合物的神经保护作用。结果:成功构建pPB-hTRPM2真核表达载体,构建出可高效表达TRPM2基因的HEK293T细胞系,并同时表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。在筛选获得的嘌呤霉素抗性细胞中,所有细胞荧光明亮可见,诱导后细胞表现出经典的TRPM2通道电流特征,TRPM2通道电流值与瞬时转染对照组差异无统计学意义(P>0.05)。该筛选系统进行钙成像实验的Z'因子为0.5416,表明其适用于高通量筛选。通过钙成像法结合膜片钳筛选出化合物6,其具有显著的TRPM2通道抑制作用,且1.0μmol/L的化合物6能够显著提高OGD/R后SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.05),降低活性氧水平(P<0.05),0.3、1.0 mg/kg的化合物6能降低tMCAO小鼠脑梗死体积百分比(均P<0.05)。结论:利用PiggyBac基因编辑技术成功构建了TRPM2基因稳定表达细胞系,利用钙成像法和膜片钳在候选化合物中成功筛选出一个高亲和力的新的TRPM2通道抑制剂。该抑制剂可以通过降低细胞活性氧水平缓解OGD/R后细胞损伤,并对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 PiggyBac转座系统 瞬时受体电位M2型 高通量筛选 膜片钳 氧糖剥夺/再灌注损伤 短暂性大脑中动脉栓塞 小鼠
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瞬时受体电位M2抑制剂A10对缺糖缺氧后复糖复氧细胞的保护作用 被引量：1
3
作者 黄卓群 余夏飞 +5 位作者 刘星宇 马康 黄敏华 李芳芳 杨巍 牛建国 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期106-112,共7页
目的:探讨瞬时受体电位M2(TRPM2)抑制剂A10对缺糖缺氧后复糖复氧(OGD/R)细胞模型的保护作用。方法:采用SH-SY5Y细胞系制备OGD/R损伤模型。将细胞随机分为空白对照组、模型对照组和A10组。细胞计数试剂盒8检测细胞存活率;活性氧检测试剂... 目的:探讨瞬时受体电位M2(TRPM2)抑制剂A10对缺糖缺氧后复糖复氧(OGD/R)细胞模型的保护作用。方法:采用SH-SY5Y细胞系制备OGD/R损伤模型。将细胞随机分为空白对照组、模型对照组和A10组。细胞计数试剂盒8检测细胞存活率;活性氧检测试剂盒检测细胞活性氧水平;四甲基罗丹明甲酯法检测线粒体膜电位;一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测凋亡细胞数量;蛋白质印迹法测定cleaved caspase 3蛋白表达。结果:相对于3、20、30、50和100μmol/L,10μmol/L浓度的A10具有较低的细胞毒性及较好的通道活性抑制作用。与模型对照组比较,A10组活性氧水平降低(P<0.05),线粒体膜电位降低程度改善(P<0.05),凋亡细胞数减少(P<0.05),凋亡相关蛋白cleaved caspase 3表达减少(P<0.05)。结论:A10可以通过抑制TRPM2通道功能、减少细胞外钙离子内流、降低细胞活性氧水平、稳定线粒体膜电位水平和减少细胞凋亡缓解OGD/R后细胞的损伤。 展开更多
关键词 瞬时受体电位M2通道 缺糖缺氧/复糖复氧 活性氧 线粒体膜电位 细胞凋亡 Cleaved caspase 3 SH-SY5Y细胞
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TRPM2对小鼠脑缺血再灌注损伤中星形胶质细胞活化的影响 被引量：1
4
作者 王芳姣 焦岩 +7 位作者 和祯泉 张燕 张瑞 余建强 何仲义 杨巍 李芳芳 牛建国 《宁夏医科大学学报》 2022年第7期689-695,共7页
目的 探究瞬时受体电位M2(transient receptor potential melastatin 2,TRPM2)在小鼠脑缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)过程中对星形胶质细胞活化的影响。方法 在体实验:设置野生假手术(WT-sham)组、TRPM2敲除假手术(TRPM2^(-/-)-... 目的 探究瞬时受体电位M2(transient receptor potential melastatin 2,TRPM2)在小鼠脑缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)过程中对星形胶质细胞活化的影响。方法 在体实验:设置野生假手术(WT-sham)组、TRPM2敲除假手术(TRPM2^(-/-)-sham)组、野生脑缺血再灌注(WT-I/R)组、TRPM2敲除脑缺血再灌注(TRPM2^(-/-)-I/R)组,采用“线栓法”建立小鼠大脑中动脉I/R模型,采用Bederson评分方法评价小鼠神经功能缺损情况;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色评价小鼠脑梗死体积;免疫荧光染色观察小鼠缺血侧海马区及皮层缺血半暗带区星形胶质细胞的活化情况。离体实验:纯化培养原代星形胶质细胞并建立氧糖剥夺再灌注(oxygen and glucose deprivation-reperfusion,OGD/R)模型,Western blot检测各组细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达情况。结果 在体实验中,与WT-sham组相比,WT-I/R组小鼠Bederson评分较高(P<0.05),脑梗死体积较大(P<0.05),缺血侧海马CA1、CA3、DG区及皮层缺血半暗带区GFAP荧光强度及阳性细胞数量增多(P<0.05);与WT-I/R组相比,TRPM2-/--I/R组小鼠Bederson评分降低(P<0.05),脑梗死体积减小(P<0.05),缺血侧GFAP荧光强度及阳性细胞数量显著减少(P<0.05)。离体实验中,与WT-CTRL(control,CTRL)组相比,WT-OGD/R组细胞GFAP蛋白表达量增高(P<0.05);与WT-OGD/R组相比,TRPM2^(-/-)-OGD/R组GFAP蛋白表达量降低(P<0.05)。结论 TRPM2敲除可抑制星形胶质细胞活化从而降低脑I/R损伤。 展开更多
关键词 瞬时受体电位M2 脑缺血再灌注损伤 星形胶质细胞 氧糖剥夺再灌注 胶质纤维酸性蛋白
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TRPM2通道对氧糖剥夺再灌注后小胶质细胞活化的影响及机制
5
作者 焦岩 王芳姣 +7 位作者 和祯泉 张燕 王鹏 余建强 何仲义 杨巍 李芳芳 牛建国 《宁夏医科大学学报》 2022年第7期669-676,共8页
目的探究瞬时受体电位M2(transient receptor potential melastatin 2,TRPM2)通道对氧糖剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)后小胶质细胞活化的影响及分子机制。方法采用线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞/再灌注模... 目的探究瞬时受体电位M2(transient receptor potential melastatin 2,TRPM2)通道对氧糖剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)后小胶质细胞活化的影响及分子机制。方法采用线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞/再灌注模型(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R),分为野生假手术组、TRPM2敲除假手术组、野生模型组和TRPM2敲除模型组,灌注切片,免疫荧光观察在体小胶质细胞形态。提取原代小胶质细胞,免疫荧光鉴定纯度,利用原代小胶质细胞建立(OGD/R)模型,将细胞分为野生对照组、野生模型组、野生模型+TRPM2通道抑制剂(ACA)组、TRPM2敲除对照组、TRPM2敲除模型组,使用免疫荧光观察OGD/R造模后小胶质细胞活化形态改变。在BV2细胞中建立OGD/R模型,将细胞分为空白对照组、模型组、模型+TRPM2通道抑制剂(ACA)组,利用活性氧检测试剂盒检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,使用酶联免疫吸附试剂盒检测细胞炎性因子分泌情况,钙成像检测细胞胞内钙含量。结果小鼠MCAO/R造模后,野生模型组在体小胶质细胞激活显著,TRPM2敲除模型组在体小胶质细胞激活受到抑制。原代小胶质细胞OGD/R造模后,野生模型组活化形态明显,TRPM2敲除模型组、野生模型+ACA组细胞活化受到抑制。BV2细胞OGD/R造模后,与空白对照组相比,模型组ROS水平上调(P<0.05),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)分泌量增多(P<0.05)、胞内钙含量升高(P<0.05);与模型组相比,模型+ACA组的ROS水平下降(P<0.05)、TNF-α和IL-6分泌量减少(P<0.05)、胞内钙含量降低(P<0.05)。结论TRPM2通过钙离子在OGD/R中调控小胶质细胞活化及炎性因子分泌量。 展开更多
关键词 氧糖剥夺再灌注 瞬时受体电位M2 小胶质细胞活化 炎性因子 CA^(2+)
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