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GC/MS同时检测人体尿液中β-雌二醇、双酚A、己烯雌酚和沙丁胺醇的含量 被引量：10
1
作者 吴鸳鸯 施卫星 陈枢青 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期235-241,共7页
目的：建立一种同时检测人尿样中β-雌二醇（β-E2）、双酚A（BPA）、己烯雌酚（DES）和沙丁胺醇（SAL）含量的GC/MS分析方法。方法：采用GC/MS法,EI检测器,色谱柱为DB-5MS毛细管柱。进样前尿样分别经过cleanert PCX和cleanert PEP固相... 目的：建立一种同时检测人尿样中β-雌二醇（β-E2）、双酚A（BPA）、己烯雌酚（DES）和沙丁胺醇（SAL）含量的GC/MS分析方法。方法：采用GC/MS法,EI检测器,色谱柱为DB-5MS毛细管柱。进样前尿样分别经过cleanert PCX和cleanert PEP固相萃取,吹干后衍生化。结果：β-E2在1-300 ng.ml^-1呈线性关系,BPA在1-200 ng.ml^-1呈线性关系,DES在2-300 ng.ml^-1呈线性关系,SAL在0.01-1.2μg.ml^-1呈线性关系,最低检测限分别为0.15 ng.ml^-1、0.19 ng.ml^-1、0.23 ng.ml^-1和1.0 ng.ml^-1,回收率分别为93.4%-110.5%、84.7%-104.9%、87.0%-105.4%和81.8%-96.8%。结论：本实验室合并了β-E2、BPA、DES和SAL这两类环境污染物的检测方法,而且最低检测限与单个检测方法相当,可用于同时监控和测定β-E2、BPA、DES和SAL对人体的危害。 展开更多
关键词 环境污染物 碎片质谱法/方法 色谱法 气相 雌二醇/尿 乙底酚/尿 沙丁胺醇/尿 酚类/尿
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GC/MS同时检测人体尿液中可的宁和苯乙醇酸及苯乙醛酸的含量 被引量：9
2
作者 吴鸳鸯 施卫星 陈枢青 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期229-234,共6页
目的：建立一种同时检测人尿样中可的宁（COT）、苯乙醛酸（PA）和苯乙醇酸（MA）含量的GC/MS分析方法。方法：采用GC/MS法,EI检测器,色谱柱为DB-5MS毛细管柱。进样前尿样先经过氯仿萃取,吹干后用MSTFA衍生化。结果：COT在0.0002-3.5μg... 目的：建立一种同时检测人尿样中可的宁（COT）、苯乙醛酸（PA）和苯乙醇酸（MA）含量的GC/MS分析方法。方法：采用GC/MS法,EI检测器,色谱柱为DB-5MS毛细管柱。进样前尿样先经过氯仿萃取,吹干后用MSTFA衍生化。结果：COT在0.0002-3.5μg.ml^-1呈线性关系,PA和MA在1.25-160μg.ml^-1呈线性关系,定量限分别为0.0002μg.ml^-1、1.25μg.ml^-1和1.25μg.ml^-1,回收率分别为89.53%-102.4%、84.88%-91.46%和83.46%-113.6%。结论：本实验室合并了尼古丁和苯乙烯这两种环境污染物的检测方法,而且定量下限与单个检测方法相当,可用于同时监控和测定尼古丁和苯乙烯对人体的危害。 展开更多
关键词 可替宁/尿 苯乙基醇/尿 苯乙烯/尿 醛类/尿 碎片质谱法/方法 色谱法 气相 环境污染物
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重组金葡菌肠毒素O的克隆表达及生物学活性分析 被引量：3
3
作者 潘映秋 丁丁 +1 位作者 孙红颖 陈枢青 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期943-948,共6页
克隆金葡菌肠毒素O(SEO)的全长基因,实现其可溶性表达,并对纯化的表达产物进行生物学活性分析。从金葡菌FRI 100菌株基因组中得到SEO基因,克隆至谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌,获高效表达。融合蛋白GST-SEO... 克隆金葡菌肠毒素O(SEO)的全长基因,实现其可溶性表达,并对纯化的表达产物进行生物学活性分析。从金葡菌FRI 100菌株基因组中得到SEO基因,克隆至谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌,获高效表达。融合蛋白GST-SEO经Glutathione Sepharose 4B亲和纯化和凝血酶消化获重组SEO(rSEO)后,MTT法检测脾淋巴细胞的增殖作用,分析纯化后rSEO的生物学活性。测序结果表明,得到正确的肠毒素SEO基因序列,并获高效表达的融合蛋白;MTT结果表明,rSEO具有与SEC相当的显著的促淋巴细胞增殖以及抑制肿瘤细胞生长的能力。本研究成功克隆、表达、纯化了具有抗肿瘤生物学活性的rSEO蛋白,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤机制奠定了基础,并有望成为一种新的超抗原制剂用于肿瘤的临床治疗。 展开更多
关键词 肠毒素 超抗原 重组蛋白 细胞增殖
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5种人细胞色素P450 2A13突变体的异源表达及其香豆素代谢活性 被引量：1
4
作者 刘亭 李朝辉 +1 位作者 徐迎春 陈枢青 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期591-598,共8页
目的重组表达人细胞色素P450（CYP）2A13突变体CYP2A13＊2,CYP2A13＊5,CYP2A13＊6,CYP2A13＊8和CYP2A13＊9,并研究CYP2A13突变体与野生型CYP2A13（CYP2A13＊1）对香豆素的代谢活性上的差异。方法通过点突变法构建各CYP2A13突变体。用杆... 目的重组表达人细胞色素P450（CYP）2A13突变体CYP2A13＊2,CYP2A13＊5,CYP2A13＊6,CYP2A13＊8和CYP2A13＊9,并研究CYP2A13突变体与野生型CYP2A13（CYP2A13＊1）对香豆素的代谢活性上的差异。方法通过点突变法构建各CYP2A13突变体。用杆状病毒表达系统制备含各突变体c DNA的重组病毒,并将其与含人源还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸P450氧化还原酶（POR,野生型）的重组杆状病毒共转染昆虫草地夜蛾细胞（sf9）,共表达CYP2A13突变体和POR重组蛋白。将表达产物制备成微粒体与香豆素（0.25~25μmol·L-1）体外孵育30 min,高效液相色谱法测定各重组酶对香豆素的代谢活性。结果Western蛋白印迹结果表明,各重组酶在sf9细胞中得到了表达。体外代谢实验显示,CYP2A13野生型及其突变体蛋白代谢香豆素在Km值上无显著差异,而在Vmax（mol·min-1·mol-1CYP）上,CYP2A13＊2（0.58±0.05,P〈0.05）、CYP2A13＊5（0.71±0.08,P〈0.01）、CYP2A13＊6（0.84±0.09,P〈0.01）、CYP2A13＊9（0.58±0.04,P〈0.05）等突变体与CYP2A13＊1（0.33±0.06）相比有显著性差异,使得这4个突变体的代谢效率增加了40%~108%。结论体外成功表达了具有活性的CYP2A13＊2,CYP2A13＊5,CYP2A13＊6,CYP2A13＊8和CYP2A13＊9重组蛋白。CYP2A13＊2,CYP2A13＊5,CYP2A13＊6和CYP2A13＊9等突变体的香豆素代谢活性明显高于CYP2A13＊1。 展开更多
关键词 细胞色素P450 CYP2A13 突变体 杆状病毒表达系统 香豆素
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密码子优化提高重组金葡菌肠毒素O在大肠杆菌中的表达水平
5
作者 黄鹏 孙红颖 陈枢青 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期297-303,共7页
目的:优化稀有密码子提高重组肠毒素O的表达量。方法:将带H is标签的肠毒素O成熟肽克隆至pET28a质粒上,采用PCR方法对15个稀有密码子进行突变,将突变后的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),并进行蛋白表达及活性鉴定。结果:通过稀有密码... 目的:优化稀有密码子提高重组肠毒素O的表达量。方法:将带H is标签的肠毒素O成熟肽克隆至pET28a质粒上,采用PCR方法对15个稀有密码子进行突变,将突变后的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),并进行蛋白表达及活性鉴定。结果:通过稀有密码子优化,重组肠毒素O的表达量由菌液总蛋白的7.49%提高至19.8%;小鼠淋巴细胞增殖试验表明,通过密码子优化的肠毒素O具有刺激淋巴细胞增殖的作用,并且其增殖作用与未优化前的肠毒素O相当。结论:稀有密码子优化能够有效增加肠毒素O的表达量。 展开更多
关键词 葡萄球菌 金黄色/免疫学 肠毒素类/免疫学 密码子 基因表达 遗传载体 质粒 突变 细胞增殖 淋巴细胞
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同时检测人体尿液中三甲基氯化锡和盐酸氯丙嗪含量的GC/MS分析法探讨
6
作者 吴鸳鸯 施卫星 陈枢青 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期420-421,共2页
三甲基氯化锡作为无铅塑料的稳定剂、防腐剂的替代品,广泛地用于塑料工业中。三甲基氯化锡具有高度毒性,可通过呼吸道、消化道和皮肤黏膜进入人体,然后主要经尿样和粪便排出[1]。氯丙嗪,又称冬眠灵,属于吩噻嗪类,是抗精神病类药中的经... 三甲基氯化锡作为无铅塑料的稳定剂、防腐剂的替代品,广泛地用于塑料工业中。三甲基氯化锡具有高度毒性,可通过呼吸道、消化道和皮肤黏膜进入人体,然后主要经尿样和粪便排出[1]。氯丙嗪,又称冬眠灵,属于吩噻嗪类,是抗精神病类药中的经典性药物。氯丙嗪的主要作用机理是通过阻断脑内多巴胺受体而产生镇静作用,在体内代谢主要是氧化过程, 展开更多
关键词 三甲基氯化锡 盐酸氯丙嗪 GC/MS 尿样
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