棘皮动物天然产物的研究进展 被引量：13

1

作者 李海芳 陈瑶 +1 位作者 杨梦照 蔡国平 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2008年第4期52-59,共8页

海洋中存在大量具特殊化学结构且有独特生理活性和功能的物质,是开发新型药物和功能食品的巨大天然产物宝库。棘皮动物是海洋药物和功能食品研究的一大重点,本文分海星纲、海参纲和海胆纲三个部分对其天然产物的研究进展加以综述,并对... 海洋中存在大量具特殊化学结构且有独特生理活性和功能的物质,是开发新型药物和功能食品的巨大天然产物宝库。棘皮动物是海洋药物和功能食品研究的一大重点,本文分海星纲、海参纲和海胆纲三个部分对其天然产物的研究进展加以综述,并对其发展前景做进一步的分析与展望。 展开更多

关键词 海星纲 海参纲 海胆纲 天然产物 研究进展

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番石榴叶天然成分抑制3T3-L1细胞成脂分化的研究 被引量：4

2

作者 杨蕾 李晓帆 +1 位作者 张雅鸥 蔡国平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期705-708,共4页

目的观察番石榴叶天然成分槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-芥子酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-eru-coyl)-β-D-galactopyranoside,QEG)及槲皮素-3-O-(6″-阿魏酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-feruloyl)-β-D-ga-lactop... 目的观察番石榴叶天然成分槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-芥子酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-eru-coyl)-β-D-galactopyranoside,QEG)及槲皮素-3-O-(6″-阿魏酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-feruloyl)-β-D-ga-lactopyranoside,QFG)对小鼠3T3-L1细胞成脂分化的影响。方法诱导3T3-L1细胞成脂分化,油红O染色法测定脂滴含量,实时定量PCR(Q-PCR)检测丝氨酸蛋白酶脂肪因子adipsin,CCTTA增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)mRNA表达,Western blot检测C/EBPα和PPARγ的蛋白表达。结果 QFG和槲皮素都能抑制3T3-L1细胞成脂分化,而QEG对此没有作用。QFG能够剂量依赖性地抑制成脂分化,并且降低adipsin、C/EBPα和PPARγmRNA及后两者蛋白表达,而对ERα和ERβmRNA的表达没有影响。结论 QFG抑制细胞成脂分化的能力比槲皮素强,其作用主要是通过抑制C/EBPα和PPARγ的表达而实现的,而且可能与雌激素受体途径无关。 展开更多

关键词 番石榴叶 槲皮素-3-O-(6″-阿魏酸)-β-D-吡喃半乳糖苷 槲皮素 成脂分化 C/EBPΑ PPARγ 雌激素受体

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强抗原决定簇hAFP542-550在真核细胞膜定位表达研究 被引量：2

3

作者 羊东晔 李彩虹 +4 位作者 蓝方 张扬清 卢放根 杨峥嵘 黄来强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期592-595,599,共5页

目的:构建包含甲胎蛋白强抗原决定簇hAFP542-550、EGFP和GPI锚定蛋白GPC3三者组成的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达质粒pGPC3-EGFP,确定其定位表达在真核细胞膜上,以强化靶细胞的免疫原性。方法:①采用RT-PCR方法从人胎盘组织总RNA... 目的:构建包含甲胎蛋白强抗原决定簇hAFP542-550、EGFP和GPI锚定蛋白GPC3三者组成的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达质粒pGPC3-EGFP,确定其定位表达在真核细胞膜上,以强化靶细胞的免疫原性。方法:①采用RT-PCR方法从人胎盘组织总RNA中调取GPC3基因,化学合成基因片段-KOZAK-GPCN+afp542-550-,并从pEG-FP-N1质粒中扩增EGFP基因,三者嵌合构建融合蛋白的表达质粒pcDNA3.1(+)/GPCN+afp542-550-EGFP-GPCC(pG-PC3-EGFP);②以Lipofectamine 2000转染质粒pGPC3-EGFP入肝癌细胞株HepG2(GPC3+AFP+),转染后24h和48h引物GPCN-F和EGFP-rRT-PCR及Western blot检测融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达;③对照质粒pEGFP-N1和pG-PC3-EGFP转染HepG2,荧光显微镜观察比较两种质粒EGFP蛋白表达的部位;pGPC3-EGFP转染人胚肾HEK293细胞(GPC3-AFP-),提取细胞膜蛋白和可溶蛋白Westernblot检测融合蛋白表达。结果:①成功构建pGPC3-EGFP质粒;②融合蛋白可在HepG2中表达;③与pEGFP-N1不同,融合蛋白主要在胞膜上出现荧光反应,胞质内仅见散在零星荧光;转染后HEK293细胞的膜蛋白中检测到融合蛋白表达,而可溶蛋白中未检出。结论:pGPC3-EGFP可以在真核细胞中表达,表达的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP仍然定位表达在细胞膜,是一种新型GPI再锚定蛋白。 展开更多

关键词 人AFP542-550 glypican3 增强绿色荧光蛋白EG-FP 真核细胞 蛋白质工程

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脂多糖诱导成骨细胞中CHI3L1表达的分子机制研究 被引量：3

4

作者 高磊 蔡国平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期574-579,共6页

慢性骨髓炎因其病程漫长、易出现并发症以及复发率高成为临床上棘手的难题,其主要致病原因是金黄色葡萄球菌等革兰氏阴性菌感染.脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的重要成分,用LPS在体外刺激骨组织相关细胞在一定程度上可以模拟骨髓... 慢性骨髓炎因其病程漫长、易出现并发症以及复发率高成为临床上棘手的难题,其主要致病原因是金黄色葡萄球菌等革兰氏阴性菌感染.脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的重要成分,用LPS在体外刺激骨组织相关细胞在一定程度上可以模拟骨髓炎患者的病理特征.实时荧光定量PCR和Western blot等试验结果表明,在骨髓炎患者的骨组织和LPS刺激的成骨细胞中,几丁质酶家族成员CHI3L1的表达均有明显升高.核因子κB(NF-κB)萤光素酶报告载体检测结果显示,LPS能诱导细胞的NF-κB活化,NF-κB活化抑制剂Bay11-7082能抑制LPS诱导的CHI3L1表达升高.用抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)的抗体预处理细胞,或采用siRNA干扰的方法抑制TNF-α受体的表达,都能明显抑制LPS诱导的CHI3L1表达上调.同时,NF-κB活化抑制剂Bay11-7082预处理细胞能抑制LPS对TNF-α表达的诱导作用.结果提示,LPS通过激活NF-κB诱导TNF-α分泌上调,刺激CHI3L1表达.提出骨髓炎及脂多糖刺激条件下CHI3L1表达上调,并在细胞水平上初步探讨了脂多糖诱导CHI3L1表达的分子机制. 展开更多

关键词 骨髓炎 脂多糖 CHI3L1 成骨细胞

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大鼠透明质酸合成酶-3基因真核表达载体的构建及趋化作用研究

5

作者 聂勇 蔡国平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期751-753,共3页

目的:构建透明质酸合成酶-3(hyaluronan synthase-3)真核表达载体,转染真核细胞并检测重组蛋白酶活性。方法:提取损伤大鼠坐骨神经总RNA,RT-PCR扩增HAS-3编码框cDNA,构建于真核表达载体pcDNA3.1D中,并亚克隆到荧光载体pEGFP-N1中。将构... 目的:构建透明质酸合成酶-3(hyaluronan synthase-3)真核表达载体,转染真核细胞并检测重组蛋白酶活性。方法:提取损伤大鼠坐骨神经总RNA,RT-PCR扩增HAS-3编码框cDNA,构建于真核表达载体pcDNA3.1D中,并亚克隆到荧光载体pEGFP-N1中。将构建好的质粒转染大鼠施旺细胞RSC96,检测HAS-3的表达及酶活性。研究转染细胞培养上清对巨噬细胞的趋化作用。结果:HAS-3真核表达载体pcDNA3.1D-HAS3及pEGFP-HAS3测序结果显示片段插入正确,序列与GenBank公布数据一致,转染RSC96细胞并检测到重组蛋白的表达和酶活性,过表达HAS-3细胞的培养上清对巨噬细胞的趋化作用显著高于未转染细胞上清。结论:成功地构建HAS-3真核表达载体且真核表达的重组HAS-3具有合成HA活性,HAS-3过表达培养上清能趋化巨噬细胞,在体内可能参与到炎症反应中。 展开更多

关键词 透明质酸合成酶 载体构建 真核表达 趋化

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金钗石斛中的酚性成分(英文) 被引量：62

6

作者 张雪 高昊 +1 位作者 王乃利 姚新生 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期652-655,共4页

目的对金钗石斛茎的化学成分进行研究.方法运用多种色谱学技术对金钗石斛的化学成分进行分离,并根据光谱数据鉴定化合物的结构.结果从该植物中分离得到12个酚性化合物,其结构分别为二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯（Ⅰ）,香草醛（Ⅱ）,罗... 目的对金钗石斛茎的化学成分进行研究.方法运用多种色谱学技术对金钗石斛的化学成分进行分离,并根据光谱数据鉴定化合物的结构.结果从该植物中分离得到12个酚性化合物,其结构分别为二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯（Ⅰ）,香草醛（Ⅱ）,罗布麻宁（Ⅲ）,对羟基苯甲醛（Ⅳ）,丁香醛（Ⅴ）,丁香酸（Ⅵ）,丁香乙酮（Ⅶ）,α-羟基丁香丙酮（Ⅶ）,松柏醛（Ⅸ）,二氢松柏醇（Ⅹ）,2-羟基苯丙醇（Ⅺ）和3-羟基-4-甲氧基苯乙醇（Ⅻ）.结论上述化合物均为首次报道从金钗石斛中分离得到,化合物Ⅰ,Ⅲ～Ⅻ为首次报道从石斛属植物中分离得到. 展开更多

关键词 金钗石斛 兰科 酚性成分

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脉冲电磁场对骨质疏松的生物效应 被引量：12

7

作者 关志成 杨小卫 +2 位作者 王黎明 张雅鸥 刘瑛岩 《高电压技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第2期1-6,共6页

电磁场作为非创伤性疗法在骨病治疗中已得到广泛的关注,故清华大学深圳研究生院以近10年的工作为基础,从细胞水平、动物模型和临床研究3个方面总结了脉冲电磁场应用于防治骨质疏松研究所取得的成果。研究发现,电磁场能够促进DNA的合成... 电磁场作为非创伤性疗法在骨病治疗中已得到广泛的关注,故清华大学深圳研究生院以近10年的工作为基础,从细胞水平、动物模型和临床研究3个方面总结了脉冲电磁场应用于防治骨质疏松研究所取得的成果。研究发现,电磁场能够促进DNA的合成和影响成骨细胞的增殖和分化,且其效果存在一定的窗口效应;骨质疏松动物模型研究显示,脉冲电磁场能够改善去势诱导骨质疏松模型骨密度;初步临床实验证实了细胞研究和动物模型研究的作用效果,并且能够有效改善骨质疏松病人的疼痛和改善骨密度水平。因此认为脉冲电磁场将在骨质疏松的防治中发挥重要作用。 展开更多

关键词 脉冲电磁场 骨质疏松 机理 成骨细胞 动物模型 临床研究

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表面等离子体共振成像生物芯片检测系统 被引量：10

8

作者 李莹 钟金钢 +2 位作者 张永林 顾大勇 张雅鸥 《光子学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2290-2293,共4页

根据表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)原理,提出基于表面等离子体共振成像(Surface Plasmon Resonance imaging,SPRI)的生物芯片检测系统构建方法.介绍了SPRI生物芯片检测系统的原理、自行组建的SPRI生物芯片检测系统... 根据表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)原理,提出基于表面等离子体共振成像(Surface Plasmon Resonance imaging,SPRI)的生物芯片检测系统构建方法.介绍了SPRI生物芯片检测系统的原理、自行组建的SPRI生物芯片检测系统的结构.采用Kretschmann型棱镜耦合结构激励SPR,偏振的平行光经棱镜投射到生物芯片上,发生表面等离子体共振,由CCD摄像机采集反射光芯片图像.以巯基修饰淋病奈瑟氏菌探针为例验证该系统,利用自组装单分子层技术(Self-Assembled Monolayer,SAM)固定探针.应用该检测系统采集了探针共振、非探针处共振、探针和非探针处都不共振时的生物芯片图像. 展开更多

关键词 光检测技术 表面等离子体共振成像 生物芯片 高通量微量分析

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基于表面等离子体共振检测原理的基因芯片的构建 被引量：3

9

作者 顾大勇 石磊 +5 位作者 禹华伟 王华 鲁卫平 梁冰 周元国 张雅鸥 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1415-1419,共5页

我们首先采用Frens法制备纳米金胶体液,然后以氯金酸/羟胺法铺制二维纳米金单膜层,进行单分子自组装层技术(Self-assembled monolayer,SAM)固定探针,从而制备出具有表面等离子体共振(Surface plasmon reso-nance,SPR)响应的基因检测芯片... 我们首先采用Frens法制备纳米金胶体液,然后以氯金酸/羟胺法铺制二维纳米金单膜层,进行单分子自组装层技术(Self-assembled monolayer,SAM)固定探针,从而制备出具有表面等离子体共振(Surface plasmon reso-nance,SPR)响应的基因检测芯片,并进一步对芯片的自组装时间、探针浓度、灵敏度、特异性等指标进行优化验证。结果表明2.5 nm胶体金所铺金膜芯片具有较好的SPR响应特性,且当固定探针浓度为1 500 nmol/L,自组装时间为4.5 h时,可以获得较好的SPR检测效率,能够准确识别碱基的错配,其检测灵敏度大约为10 fmol/L,可应用于SPR传感器的检测中。 展开更多

关键词 表面等离子体共振 基因芯片 单分子自组装层技术

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Ghrelin抑制小鼠骨髓基质细胞成脂分化 被引量：5

10

作者 周华 杨曦 +1 位作者 张雅鸥 蔡国平 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第8期886-890,共5页

目的观察胃促生长素ghrelin对原代培养小鼠骨髓基质细胞成脂分化的影响。方法体外培养小鼠骨髓基质细胞,MDI诱导剂诱导细胞成脂分化,显微镜观察细胞形态变化;油红O染色法检测细胞甘油三酯含量,化学比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;MTT法... 目的观察胃促生长素ghrelin对原代培养小鼠骨髓基质细胞成脂分化的影响。方法体外培养小鼠骨髓基质细胞,MDI诱导剂诱导细胞成脂分化,显微镜观察细胞形态变化;油红O染色法检测细胞甘油三酯含量,化学比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;MTT法检测细胞克隆化扩增活动,RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)和丝氨酸蛋白酶脂肪因子adipsinmRNA表达,Westernblot检测PPARγ2蛋白表达。结果Ghrelin能够剂量依赖性(10-9、10-8、10-7mol/L)地抑制骨髓基质细胞成脂分化,升高ALP活性(P<0·05或P<0·01)。Gh-relin能够降低PPARγ2和adipsinmRNA以及PPARγ2蛋白表达(P<0·05)。Ghrelin对细胞成脂分化早期的克隆化扩增没有显著影响。结论Ghrelin能够显著抑制体外培养小鼠骨髓基质细胞成脂分化,该作用可能与抑制PPARγ2表达有关。 展开更多

关键词 GHRELIN 骨髓基质细胞 成脂分化

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葡萄糖苷酶在毕赤酵母中的重组表达及一步纯化 被引量：3

11

作者 周进 银鹏 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期981-986,共6页

从绿色木霉中克隆了葡萄糖苷酶bg基因,构建入表达载体pPIC9k-His6中,然后在AOX1启动子的控制下,在毕赤酵母GS115菌株中表达.在5L发酵罐中发酵120h,重组P.pastorisMut+菌株湿重达360.6g/L,葡萄糖苷酶浓度和酶活分别为2.1mg/mL和73.5U/mL... 从绿色木霉中克隆了葡萄糖苷酶bg基因,构建入表达载体pPIC9k-His6中,然后在AOX1启动子的控制下,在毕赤酵母GS115菌株中表达.在5L发酵罐中发酵120h,重组P.pastorisMut+菌株湿重达360.6g/L,葡萄糖苷酶浓度和酶活分别为2.1mg/mL和73.5U/mL.经亲和层析一步纯化后,得到了电泳纯的葡萄糖苷酶.HPLC分析显示其纯度为95.6%,比酶活为71.9U/mg.纯化过程酶得率为73.6%,纯化倍数为42.6.纯酶的等电点为5.0,最适温度为50℃,最适pH为6.5.金属离子Ag+,Ca2+,Cu2+,Fe2+及SDS对葡萄糖苷酶活性有抑制作用,而Mg2+,Mn2+,K+能增强葡萄糖苷酶活性,其中1mol/LMg2+能使酶活提高20%. 展开更多

关键词 葡萄糖苷酶 绿色木霉 毕赤酵母 表达 一步纯化

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一种新型光谱表面等离子体共振二维探测方法在DNA微阵列中的应用 被引量：1

12

作者 刘乐 何永红 +4 位作者 马绥华 鲁卫平 赵欣 张雅鸥 郭继华 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第1期154-158,共5页

在此前曾提出过一种新型二维折射率探测方法——并行扫描光谱表面等离子体共振(surface plasmonresonance,SPR)成像方法。在这种方法中,使用线形光照明,CCD得到的图像包含SPR光谱信息和一维空间信息,进而通过计算可得到折射率的一维分... 在此前曾提出过一种新型二维折射率探测方法——并行扫描光谱表面等离子体共振(surface plasmonresonance,SPR)成像方法。在这种方法中,使用线形光照明,CCD得到的图像包含SPR光谱信息和一维空间信息,进而通过计算可得到折射率的一维分布信息。通过一维扫描,就能够得到整个被扫描区域内的折射率二维分布信息。该方法具有高灵敏、高通量的优点,适合微阵列(microarray)的检测,并完善了这种方法的数据处理过程,使用空气折射率作为参考,消除了无法精确控制入射角的难题。使用该方法对手工点制的军团菌mip DNA探针微阵列进行了检测,证明了这种方法高灵敏无标记地探测微阵列的可行性。我们得到的军团菌mip DNA探针制备浓度与其等效折射率的关系,这对基于SPR的微阵列技术的发展有着重要的参考意义。 展开更多

关键词 SPR 光谱 成像 微阵列 生物芯片

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长距离输水过程中微生物安全的分子生物学分析 被引量：1

13

作者 王爽 张锡辉 +4 位作者 王慧 张广 庄美琪 林素斌 邢学联 《给水排水》 CSCD 北大核心 2006年第12期33-37,共5页

应用PCR-DGGE分子生物学方法对东江水源工程沿途水样中的微生物群落结构的动态变化以及种群多样性进行了研究。结果表明,采用分子生物学方法能够检测出水中多样性的细菌。相似性分析表明,采用涵管方式远距离引水,其沿途水中微生物群落... 应用PCR-DGGE分子生物学方法对东江水源工程沿途水样中的微生物群落结构的动态变化以及种群多样性进行了研究。结果表明,采用分子生物学方法能够检测出水中多样性的细菌。相似性分析表明,采用涵管方式远距离引水,其沿途水中微生物群落结构变化并不是很大,优势菌大致相同;16SrDNA鉴定表明,分子生物学方法能够检测出传统人工培养方法不能检测出来的细菌,原水不含致病菌,这能够对原水输送工程微生物安全性进行更准确的评价。 展开更多

关键词 长距离输水 PCR—DGGE 微生物安全 群落结构 多样性

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极低频电磁场和超声波驱鼠装置的研制 被引量：1

14

作者 刘春晓 顾大勇 +4 位作者 赵纯中 史蕾 徐云庆 何建安 吴剑 《中华卫生杀虫药械》 CAS 2015年第1期34-36,共3页

目的研制发射极低频电磁波和超声波驱鼠装置。方法采用高性能的嵌入式单片机AT89C2051来控制超声频率和低频电磁波的发射,系统采用时钟芯片HT1380/1381,用于计时、提供时间基准和给单片机提供时间数据。结果通过实际检测,电磁波强度在1... 目的研制发射极低频电磁波和超声波驱鼠装置。方法采用高性能的嵌入式单片机AT89C2051来控制超声频率和低频电磁波的发射,系统采用时钟芯片HT1380/1381,用于计时、提供时间基准和给单片机提供时间数据。结果通过实际检测,电磁波强度在10 m内稳定,磁场在15 m外有显著衰减,电场在20 m外有显著衰减。结论装置性能可靠,技术成熟,可在一定的范围动态变频同时发射极低频电磁场和超声波,可达到实用要求。 展开更多

关键词 极低频电磁场 超声波 驱鼠

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白细胞介素-8抑制3T3-L1细胞分化克隆化扩增

15

作者 周华 杨曦 +1 位作者 张雅鸥 蔡国平 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期243-247,共5页

目的:观察白细胞介素-8(IL-8)对3T3-L1脂肪前体细胞分化和分化过程中克隆化扩增的影响。方法:用油红O染色法观察IL-8处理后3T3-L1细胞成脂分化的细胞形态学改变,并通过比色法检测成脂分化过程中关键酶甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)活性的变... 目的:观察白细胞介素-8(IL-8)对3T3-L1脂肪前体细胞分化和分化过程中克隆化扩增的影响。方法:用油红O染色法观察IL-8处理后3T3-L1细胞成脂分化的细胞形态学改变,并通过比色法检测成脂分化过程中关键酶甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)活性的变化。用MTT和3H-TdR掺入法检测IL-8对细胞成脂分化克隆化扩增时期细胞增殖与DNA合成状况。流式细胞术分析IL-8对克隆化扩增中细胞周期的影响。结果:10 U/ml、100 U/ml、1000 U/ml IL-8能够剂量依赖性地抑制3T3-L1细胞向成熟脂肪细胞分化,降低分化过程中GPDH活性(P<0.05)。1000 U/ml IL-8可显著抑制细胞成脂分化过程中的克隆化扩增时期细胞增殖与DNA合成(P<0.05),增加G1期细胞比例,降低S期与G2期细胞比例(P<0.01)。结论:对3T3-L1脂肪细胞分化过程中克隆化扩增活动的抑制是IL-8抑制该细胞成脂分化的重要机制之一。 展开更多

关键词 白细胞介素-8 3T3-L1脂肪前体细胞 分化 细胞增殖 克隆化扩增

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大鼠透明质酸合成酶-2抗血清的制备及鉴定

16

作者 聂勇 蔡国平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期510-512,共3页

目的:制备大鼠透明质酸合成酶-2(HAS-2)抗血清并鉴定抗血清灵敏度及其特异性。方法:通过生物信息学分析选取HAS-2非保守的亲水区域作为抗原,通过原核表达纯化后免疫家兔,制备出抗血清。Western blot检测所制备抗血清的灵敏度。真核瞬时... 目的:制备大鼠透明质酸合成酶-2(HAS-2)抗血清并鉴定抗血清灵敏度及其特异性。方法:通过生物信息学分析选取HAS-2非保守的亲水区域作为抗原,通过原核表达纯化后免疫家兔,制备出抗血清。Western blot检测所制备抗血清的灵敏度。真核瞬时表达大鼠HAS-2和HAS-3,分别用抗His抗体和抗血清检测,鉴定制备抗血清的特异性。结果:通过原核表达并纯化得到抗原多肽,免疫家兔后获得ELISA效价大于1∶10000的抗血清。所制备的抗血清至少可以检测出10ng以上的抗原多肽,并且能够特异地检测HAS-2而与HAS-3无反应。结论:成功通过大鼠HAS-2非保守区域多肽的原核表达产物制备出高灵敏度和特异性的大鼠HAS-2抗血清,为研究透明质酸(HA)的病理生理意义提供了有利支持。 展开更多

关键词 透明质酸 透明质酸合成酶-2 重组表达 抗血清

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小鼠几丁质酶的重组表达和抗体制备

17

作者 高磊 蔡国平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期884-886,共3页

目的:检测脂多糖(LPS)刺激成骨细胞后,几丁质酶(chitotriosidase)基因表达变化情况。进行小鼠chitotriosi-dase的原核和真核表达,并利用原核表达纯化的蛋白,制备兔抗鼠多克隆抗体。方法:用LPS刺激MC3T3-E1细胞,提取mRNA,通过RT-PCR获得... 目的:检测脂多糖(LPS)刺激成骨细胞后,几丁质酶(chitotriosidase)基因表达变化情况。进行小鼠chitotriosi-dase的原核和真核表达,并利用原核表达纯化的蛋白,制备兔抗鼠多克隆抗体。方法:用LPS刺激MC3T3-E1细胞,提取mRNA,通过RT-PCR获得小鼠chitotriosidase的编码区全长序列,克隆进pRSET A载体,转化BL21菌株,IPTG诱导表达。获得的包涵体蛋白用镍柱纯化后,作为抗原免疫兔子,制备多克隆抗体。用该抗体检测真核表达的小鼠chitotriosi-dase蛋白,并确定抗体的灵敏度和特异性。结果:LPS明显刺激chitotriosidase表达。原核表达的包涵体蛋白经镍柱纯化后也能制备出效果较好的多克隆抗体。结论:成功地克隆表达了小鼠的chitotriosidase蛋白,并制备出高灵敏度、高特异性的多克隆抗体,为进一步阐明chitotriosidase在病理条件下的表达变化和功能提供了一条途径。 展开更多

关键词 几丁质酶 脂多糖 重组表达 多克隆抗体

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颅脑外伤后脑脊液促性腺激素释放激素的含量测定

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作者 于辉天 麦荣康 +3 位作者 叶华卫 江先福 宋彧 史小军 《中国实用神经疾病杂志》 2013年第12期17-19,共3页

目的探讨颅脑外伤患者脑脊液中促性腺激素释放激素(GnRH)含量变化及临床意义。方法临床收集130例颅脑外伤患者脑脊液标本为实验组,另选取54例健康者脑脊液标本为对照组。应用放射免疫技术测定患者24h、1周及2周脑脊液中GnRH的含量变化... 目的探讨颅脑外伤患者脑脊液中促性腺激素释放激素(GnRH)含量变化及临床意义。方法临床收集130例颅脑外伤患者脑脊液标本为实验组,另选取54例健康者脑脊液标本为对照组。应用放射免疫技术测定患者24h、1周及2周脑脊液中GnRH的含量变化。结果测试发现颅脑外伤后GnRH在脑脊液中的含量明显升高,可能与脑损伤程度关系密切。实验组所有脑脊液标本中GnRH含量显著高于健康对照组(P<0.05)。结论颅脑损伤患者脑脊液中GnRH的含量升高,有助于判定脑损伤程度。 展开更多

关键词 颅脑外伤 脑脊液 促性腺激素释放激素

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COX-2介导槲皮素对UVB辐射引起的皮肤损伤的保护 被引量：1

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作者 邓海伟 林志秀 +3 位作者 张佩 史小军 刘丹 朱永园 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期713-717,741,共6页

目的研究槲皮素对ultraviolet B(UVB)辐射引起的皮肤损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制。方法分别建立小鼠和永生化的人角质形成细胞HaCaT的UVB损伤模型,研究体内和体外模型中槲皮素对受到紫外损伤的皮肤的保护作用。结果①经形态... 目的研究槲皮素对ultraviolet B(UVB)辐射引起的皮肤损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制。方法分别建立小鼠和永生化的人角质形成细胞HaCaT的UVB损伤模型,研究体内和体外模型中槲皮素对受到紫外损伤的皮肤的保护作用。结果①经形态学观察,发现槲皮素能够显著缓解由UVB照射引起的皮肤水肿和炎症的发生。②动物组织切片免疫组织化学染色和细胞实时荧光定量PCR及Western blotting实验结果显示,UVB照射能够显著地提高皮肤组织和HaCaT细胞中COX-2的表达,而槲皮素能够在基因和蛋白水平显著地抑制UVB照射引起的COX-2的上调表达。结论槲皮素可能通过抑制诱导型环氧化酶COX-2的表达进而抑制UVB辐射引起的皮肤损伤。 展开更多

关键词 槲皮素 UVB 环氧化酶-2 皮肤损伤

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抗欧亚活血丹凝集素特异性多克隆抗体的制备(英文)

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作者 王卫芳 VAN DAMME Els 何朝族 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1113-1119,共7页

欧亚活血丹外源凝集素(Gleheda)是分离自欧亚活血丹 (Glechoma hederacea) 叶片中的一种糖基化植物新蛋白. 如同其他糖基化蛋白,通过免疫学方法探测 Gleheda 的过程中通常受到一些不相干糖蛋白的妨碍,为此制定了抗 Gleheda 特异性多克... 欧亚活血丹外源凝集素(Gleheda)是分离自欧亚活血丹 (Glechoma hederacea) 叶片中的一种糖基化植物新蛋白. 如同其他糖基化蛋白,通过免疫学方法探测 Gleheda 的过程中通常受到一些不相干糖蛋白的妨碍,为此制定了抗 Gleheda 特异性多克隆抗体的纯化方案. 免疫血清蛋白经硫酸铵选择性沉淀后,分别以 Gleheda 和刺槐外源凝集蛋白 (RPA) 结合在 Sepharose 4B作为亲和配体,采用亲和层析法连续纯化 2 次,然后进一步采用离子交换层析 Q Fast Flow 提纯. 经每一步骤提纯得到的抗体组分对 Gleheda 的特异性,均同时采用双向免疫扩散检验和 Western blot 分析. 结果表明,以 Gleheda 为配体,亲和纯化制备得到的抗体组分对叶片粗提物中的许多植物 (糖) 蛋白仍然表现交叉反应. 为除去由植物糖蛋白中的聚糖所引起这些非特异性交叉反应抗体,接着以 RPA 为配体再次进行亲和纯化,Western blot 分析显示,抗体的特异性得到提高但并非除去了所有非特异性交叉反应的抗体. 最后进一步采用离子交换层析制备得到仅抗 Gleheda 蛋白的特异性抗体组分,此抗体组分适用于免疫探测研究. 该抗体纯化制备程序简易而高效,而且不需要昂贵的设备. 展开更多

关键词 特异性多克隆抗体 抗体制备 欧亚活血丹外源凝集素(Gleheda)

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