一株多重耐药产肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性的研究 被引量：2

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作者 王宁宁 李晓月 +10 位作者 刘泽文 刘威 高婷 周丹娜 杨克礼 郭锐 梁婉 陈文杰 贝为成 田永祥 袁芳艳 《湖北农业科学》 2021年第24期160-163,共4页

湖北省某猪场新生仔猪发生以剧烈腹泻、排出黄色粪便并迅速脱水死亡为主要症状的疾病,对送检病料,通过细菌培养、革兰氏染色、PCR等方法进行鉴定,确定新生仔猪病是由产肠毒素大肠杆菌感染引起。药敏试验结果表明,该分离菌株对喹诺酮类... 湖北省某猪场新生仔猪发生以剧烈腹泻、排出黄色粪便并迅速脱水死亡为主要症状的疾病,对送检病料,通过细菌培养、革兰氏染色、PCR等方法进行鉴定,确定新生仔猪病是由产肠毒素大肠杆菌感染引起。药敏试验结果表明,该分离菌株对喹诺酮类、氨基糖苷类、头孢类等药物敏感;对青霉素类、四环素类、氯霉素类、磺胺类等药物耐药,主要是阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、四环素、多西环素、磺胺异恶唑等。 展开更多

关键词 大肠杆菌(Escherichia coli) 分离鉴定 药敏试验

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一株多重耐药猪链球菌的分离鉴定与生物学特性研究

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作者 裴嘉琪 李晓月 +10 位作者 刘泽文 高婷 刘威 杨克礼 郭锐 李畅 周丹娜 陈文杰 田永祥 贝为成 袁芳艳 《湖北农业科学》 2022年第S01期284-289,共6页

从湖北省某猪场分离到一株猪链球菌,通过细菌培养、革兰氏染色镜检、16S rRNA序列比对、荚膜多糖抗原血清分型等方法鉴定分离菌株为猪链球菌2型,命名为SS2-XY202021。分离菌株的毒力基因型为mrp-epf-sly+orf2+fbps+gapdh+89k+。药敏试... 从湖北省某猪场分离到一株猪链球菌,通过细菌培养、革兰氏染色镜检、16S rRNA序列比对、荚膜多糖抗原血清分型等方法鉴定分离菌株为猪链球菌2型,命名为SS2-XY202021。分离菌株的毒力基因型为mrp-epf-sly+orf2+fbps+gapdh+89k+。药敏试验结果表明,分离菌株对利福平敏感;对氟苯尼考、头孢噻肟中度敏感;对氯霉素、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素、多西环素、青霉素G、红霉素、万古霉素、克林霉素、磺胺甲恶唑和利奈唑胺12种药物耐药。通过PCR扩增耐药基因,结果表明,分离菌株携带四环素类抗性基因tetO与大环内酯类抗性基因ermB、ermTR。 展开更多

关键词 猪链球菌 分离鉴定 药敏试验 耐药基因 毒力

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山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析 被引量：1

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作者 刘威 蒋鹏程 +7 位作者 杨克礼 袁芳艳 周丹娜 刘泽文 高婷 郭锐 孙裴 田永祥 《动物医学进展》 北大核心 2023年第2期35-40,共6页

旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761... 旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761、779 nt处的A突变为G,使改造后的LDH基因能在大肠埃希氏菌Rosetta中正确表达。SDS-PAGE电泳结果显示,IPTG诱导目的蛋白表达后获得一条大小约34 ku的蛋白条带,Western blot结果表明获得的原核表达产物可与抗6×His tag的单克隆抗体发生特异性反应,研究采用DNAStar Protean模块分析了LDH的二级结构、蛋白骨架柔性区域和可能的B细胞抗原优势表位,为进一步研究其功能奠定了基础。 展开更多

关键词 山羊支原体山羊肺炎亚种 MCCG-0521 乳酸脱氢酶 密码子改造 二级结构

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鸡白痢检测方法研究进展

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作者 张记高 程伊洛 +3 位作者 汪宏才 张腾飞 罗青平 翟新国 《中南农业科技》 2024年第11期230-233,共4页

鸡白痢是由鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum)感染导致的传染性疾病。种鸡鸡白痢净化是防控该病最主要的措施。通过对传统病原学、分子生物学及免疫学三类检测方法进行概述和比较,指出各种方法的优势及不足,创造性地提出了将不同方法... 鸡白痢是由鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum)感染导致的传染性疾病。种鸡鸡白痢净化是防控该病最主要的措施。通过对传统病原学、分子生物学及免疫学三类检测方法进行概述和比较,指出各种方法的优势及不足,创造性地提出了将不同方法进行联合应用的思路,旨在为建立准确、快速的检测方法,优化净化程序及养殖业持续健康发展提供帮助。 展开更多

关键词 鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum) 净化 细菌学 免疫学 分子生物学 检测方法

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血清4型禽腺病毒的分离鉴定及致病性分析 被引量：1

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作者 田光明 张高峰 +7 位作者 杨俊杰 杨宏春 蒋立人 王鑫 陈俊池 商雨 温国元 罗青平 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第9期75-83,共9页

旨在从送检的病鸡中分离鉴定出禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV),为临床诊断和疫病防控提供参考依据。本研究将阳性样品接种SPF鸡胚并传代,利用PCR检测、基因序列分析、动物回归试验等方法鉴定病毒。结果:经过鸡胚传代及病毒特异性检测... 旨在从送检的病鸡中分离鉴定出禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV),为临床诊断和疫病防控提供参考依据。本研究将阳性样品接种SPF鸡胚并传代,利用PCR检测、基因序列分析、动物回归试验等方法鉴定病毒。结果:经过鸡胚传代及病毒特异性检测获得了纯净的FAdV,命名为HB2306;分析Hexon基因序列可知,HB2306株属于血清4型分支,与国内外分离的FAdV-4毒株核苷酸序列同源性为98.2%~99.9%,HB2306株与国内外的4型高致病性毒株氨基酸序列相似性在97.9%~99.8%;受试动物临床病理变化显示,HB2306株以104.5EID50/只的剂量经胸部肌肉注射后,引起宿主心包积液,肝脏变黄肿胀、淤血出血,肾出血、肿胀等典型的病理变化,与流行的高致病性毒株所致临床症状相似,且死亡率为100%。综上,本研究成功分离并鉴定出一株FAdV-4高致病力毒株,丰富了毒种库,为该病毒感染的流行情况调查和综合防控奠定了基础。 展开更多

关键词 禽腺病毒4型 致病性 Hexon基因 遗传进化

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大肠埃希氏菌疫苗生产用菌种种子批的建立与鉴定

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作者 刘泽文 袁芳艳 +8 位作者 刘威 高婷 杨克礼 郭锐 李畅 吴琼 朱佳佳 田永祥 周丹娜 《动物医学进展》 北大核心 2024年第12期39-43,共5页

为了研制仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗,以大肠埃希氏菌生产菌种C83549(k88)第2代和C83644(k99)、C83710(987p)第3代基础种子作为原始种子,建立了用于仔猪大肠杆菌病疫苗生产的大肠埃希氏菌基础种子批,分别对种子批的F1、F5... 为了研制仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗,以大肠埃希氏菌生产菌种C83549(k88)第2代和C83644(k99)、C83710(987p)第3代基础种子作为原始种子,建立了用于仔猪大肠杆菌病疫苗生产的大肠埃希氏菌基础种子批,分别对种子批的F1、F5、F10、F13代进行了全面鉴定。结果表明,各代种子的培养特性、生化特性均符合大肠埃希氏菌特征,抗原结构分别为C83549(O149∶K88)、C83644(O68∶K99)和C83710(O9∶987P);各代次菌株的菌毛抗原RIHA单位≥800,菌种免疫原性鉴定合格;各菌株经口服途径灌服1.5×10^(10)CFU/头,可引起仔猪100%发病。因此,3个菌株均可用作仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗生产的菌种。 展开更多

关键词 大肠埃希氏菌 种子批 建立 鉴定

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鸡滑液囊支原体的分离鉴定及药敏试验 被引量：2

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作者 殷梦玉 张腾飞 +4 位作者 张文婷 胡巧 卢琴 郭云清 罗青平 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期130-135,共6页

为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。... 为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。结果显示,病原分离鉴定结果仅滑液囊支原体阳性,镜检观察到典型的“煎蛋样”菌落;16S rRNA序列与已报道的滑液囊支原体的具有高度同源性;鸡胚感染试验显示,分离株导致鸡胚发育迟缓,胚体弱小,从弱小胚体内可再次分离出滑液囊支原体;药敏试验结果显示滑液囊支原体分离株对泰妙菌素、四环素和盐酸克林霉素敏感。结果表明,从产蛋下降的鸡群中成功分离到1株滑液囊支原体,为临床该病的防治提供了科学依据。 展开更多

关键词 鸡 滑液囊支原体 分离鉴定 药敏试验

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C型产气荚膜梭菌生产用菌种种子批的建立与鉴定

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作者 刘泽文 袁芳艳 +6 位作者 刘威 高婷 周丹娜 杨克礼 郭锐 李畅 田永祥 《湖北农业科学》 2022年第22期115-118,共4页

为建立C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)生产用菌种种子批,以C型产气荚膜梭菌C59-2株第2代基础种子作为原始种子,对原始种子通过接种改良厌气肉肝汤和肉肝胃酶消化汤连续传代至第13代,分别对基础种子1代(F1)、第5代(F5)、第10... 为建立C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)生产用菌种种子批,以C型产气荚膜梭菌C59-2株第2代基础种子作为原始种子,对原始种子通过接种改良厌气肉肝汤和肉肝胃酶消化汤连续传代至第13代,分别对基础种子1代(F1)、第5代(F5)、第10代(F10)和第13代(F13)基础种子进行纯粹检验、培养特性鉴定、生化特性鉴定、产毒素能力的测定、血清型鉴定、免疫原性鉴定。结果表明,各项指标均合格,可作为仔猪大肠杆菌病、C型产气荚膜梭菌病二联灭活疫苗的生产用菌种用于疫苗的生产,基础种子批定为F1~F10代。 展开更多

关键词 C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens) 种子批 建立 鉴定

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利用杆状病毒实现外源基因在哺乳动物细胞内表达 被引量：1

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作者 邹桂莲 罗青平 +3 位作者 邵华斌 温国元 杨烨 商雨 《湖北农业科学》 2020年第23期159-163,168,共6页

杆状病毒是一类专职感染无脊椎动物的病毒,目前表达载体和基因转导载体广泛应用于科学研究和生物医药领域。研究在杆状病毒Bac-to-Bac操作系统基础上将杆状病毒载体改造成能在哺乳动物细胞内表达外源基因的载体。首先,将Bac-to-Bac操作... 杆状病毒是一类专职感染无脊椎动物的病毒,目前表达载体和基因转导载体广泛应用于科学研究和生物医药领域。研究在杆状病毒Bac-to-Bac操作系统基础上将杆状病毒载体改造成能在哺乳动物细胞内表达外源基因的载体。首先,将Bac-to-Bac操作系统中pFastBac-Dual质粒中的PH和p10启动子替换成巨细胞病毒(CMV)启动子和真核生物延伸因子(EF1)基因的启动子;然后将egfp基因和mCherry基因分别插入到EFI启动子和CMV启动子下游;通过转座获得表达egfp和mCherry基因的重组杆状病毒基因组,并转染Sf9细胞获得重组杆状病毒。重组杆状病毒可以在昆虫细胞和哺乳动物细胞内产生绿色荧光和红色荧光,表明以CMV启动子和EF1启动子构建的重组杆状病毒既可以在昆虫细胞内表达外源基因,又可以通过转导在哺乳动物细胞内表达外源基因。该载体可以应用于特殊蛋白的真核表达和基因治疗药物的研究开发。 展开更多

关键词 杆状病毒 基因表达 哺乳动物细胞

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GidA调控猪链球菌氨基酸代谢谱的分析 被引量：1

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作者 高婷 袁芳艳 +7 位作者 刘泽文 刘威 周丹娜 杨克礼 郭锐 梁婉 陈文杰 田永祥 《湖北畜牧兽医》 2021年第7期10-12,共3页

为比较猪链球菌中gidA缺失菌株与野生菌株氨基酸代谢之间的差异,揭示GidA调控氨基酸代谢的规律,为猪链球菌致病性的解析以及防控提供理论依据,分别收集gidA缺失菌株、野生菌株菌体,采用高效液相色谱法(HPLC)、质谱仪在正离子模式下进行... 为比较猪链球菌中gidA缺失菌株与野生菌株氨基酸代谢之间的差异,揭示GidA调控氨基酸代谢的规律,为猪链球菌致病性的解析以及防控提供理论依据,分别收集gidA缺失菌株、野生菌株菌体,采用高效液相色谱法(HPLC)、质谱仪在正离子模式下进行质谱分析,检测样本中30种氨基酸及其衍生物的含量,比较gidA缺失菌株、野生菌株菌体中氨基酸代谢谱的差异。结果表明,2种菌株中精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、肌酸酐及鸟氨酸具有显著差异(P<0.05,倍数差异>1.2),其中精氨酸上调约4倍,天冬酰胺下调约17倍。说明tRNA修饰酶GidA缺失引起猪链球菌氨基酸代谢异常,尤其是精氨酸与天冬酰胺,其机制可能与猪链球菌致病性下降相关。 展开更多

关键词 猪链球菌 tRNA修饰酶 GidA 氨基酸代谢

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C 型产气荚膜梭菌抗原含量与免疫攻毒保护的关系

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作者 蔡卫忠 吴早林 +2 位作者 全涛 刘泽文 田永祥 《中南农业科技》 2022年第3期25-26,共2页

采用不同含量的C型产气荚膜梭菌毒素抗原制备3种灭活疫苗,分别免疫怀孕母猪,同时设立不免疫对照组。母猪分娩后,对免疫组和对照组母猪所产并采食初乳24 h内仔猪分组后攻毒,静脉注射最小致死量的C型产气荚膜梭菌毒素,另设不免疫对照组母... 采用不同含量的C型产气荚膜梭菌毒素抗原制备3种灭活疫苗,分别免疫怀孕母猪,同时设立不免疫对照组。母猪分娩后,对免疫组和对照组母猪所产并采食初乳24 h内仔猪分组后攻毒,静脉注射最小致死量的C型产气荚膜梭菌毒素,另设不免疫对照组母猪所产仔猪为正常对照,攻毒后连续观察7 d,统计各试验组仔猪的发病和保护情况。结果表明,C型产气荚膜梭菌灭活疫苗抗原含量与攻毒保护率具有良好的平行关系,当疫苗中毒素含量不低于3000 MLD/mL时,免疫组攻毒保护率均不低于80%。确定了使仔猪获得保护的产气荚膜梭菌毒素最低抗原含量为3000 MLD/mL。 展开更多

关键词 C型产气荚膜梭菌 毒素抗原 免疫 攻毒 保护

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猪肺炎支原体脂蛋白LppB介导纤毛黏附功能域的鉴定

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作者 叶利颖 刘威 +5 位作者 闫安 周丹娜 杨克礼 高婷 田永祥 宋淇淇 《动物医学进展》 2025年第6期1-6,共6页

猪肺炎支原体(Mhp)主要引起地方性肺炎,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。LppB是猪肺炎支原体的毒力因子,与纤毛的黏附和呼吸道定植密切相关,然而其具体的功能域还未见报道。利用生物信息学方法,对LppB可能的串联重复区域、disorder... 猪肺炎支原体(Mhp)主要引起地方性肺炎,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。LppB是猪肺炎支原体的毒力因子,与纤毛的黏附和呼吸道定植密切相关,然而其具体的功能域还未见报道。利用生物信息学方法,对LppB可能的串联重复区域、disorder功能域、抗原表位和高级结构进行了预测;为了保留预测功能域的完整性,将LppB分成了3个截短片段,依次为ΔLppB 27-247、ΔLppB 248-424和ΔLppB 425-604;通过原核表达系统,表达3个截短片段,获得了表达的rΔLppB 27-247、rΔLppB 248-424和rΔLppB 425-604重组蛋白;借助纤毛黏附试验,测定了截短片段黏附纤毛的能力。结果显示,LppB黏附纤毛的功能域主要位于27-247 aa和425-604 aa区域。研究结果丰富了对猪肺炎支原体致病机制的理解。 展开更多

关键词 猪肺炎支原体 LppB 纤毛黏附 功能域

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