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慢性HBV感染前C区变异与病毒复制水平关系 被引量：16
1
作者 戴炜 郭亚兵 +4 位作者 杨大国 唐蔚 袁静 王召钦 舒丹 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2001年第3期152-153,共2页
探讨HBV前C基因变异与病毒复制水平的关系在慢性HBV感染者中的意义。应用错配聚合酶链反应 (PCR) -限制性片段长度多态性 (RFLP)分析与荧光定量聚合酶链反应检测HBVDNA相结合 ,对 30例HB sAg(+ )、抗 -HBe(+ )及抗 -HBc(+ )慢性HBV感染... 探讨HBV前C基因变异与病毒复制水平的关系在慢性HBV感染者中的意义。应用错配聚合酶链反应 (PCR) -限制性片段长度多态性 (RFLP)分析与荧光定量聚合酶链反应检测HBVDNA相结合 ,对 30例HB sAg(+ )、抗 -HBe(+ )及抗 -HBc(+ )慢性HBV感染者 ,其中无症状携带者 (AsC) 9例、慢性乙型肝炎 (CHB) 12例及慢性重症肝炎 (CHF) 9例进行前C区基因变异与HBVDNA水平关系进行分析。AsC组 3例 (33 33 % ) ,CHB组9例 (75 % )及CHF组 8例 (88 89% )有A83(nt 1896 )变异。荧光定量PCR结果表明HBVDNA含量在CHF组中最高。HBV前C变异在HBV不同感染状态中都可见 。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 基因变异 限制性片段长度多态性 聚合酶链反应 RFLP HBVDNA CHF
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丙型肝炎病毒NS5B的体外表达、纯化和RNA多聚酶活性鉴定
2
作者 戴炜 马为民 +2 位作者 郭亚兵 J.Monjardino 敖飞健 《实用肝脏病杂志》 CAS 2000年第2期78-80,共3页
目的 研究丙型肝炎病毒NS5B蛋白的表达及其生物学功能。方法 构建长度为1676bp(7261-9036bp,编码558aa)的HCV NS5B编码区cDNA,定向克隆到表达质粒pET16b中,并在大肠杆菌BL21中表达。应用合成的多聚A或寡聚U为模板进行~3H-UTP掺入实验分... 目的 研究丙型肝炎病毒NS5B蛋白的表达及其生物学功能。方法 构建长度为1676bp(7261-9036bp,编码558aa)的HCV NS5B编码区cDNA,定向克隆到表达质粒pET16b中,并在大肠杆菌BL21中表达。应用合成的多聚A或寡聚U为模板进行~3H-UTP掺入实验分析纯化蛋白的活性。结果 表达的NS5B蛋白分子量为65KD,以包涵体形式存在细胞内,改变部分表达条件未能减少包涵体的形成及可溶性蛋白的增加,该包涵体蛋白在6M尿素浓度、pH:10及500mM NaCl的溶液中完全溶解。~3H-UTP掺入实验表明纯化的蛋白具有RNA多聚酶活性并依赖多聚A的存在。结论 对NS5B蛋白生物学活性的研究,有助于了解HCV的复制及抗病毒药物的开发。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构区5B 体外基因表达 RNA多聚酶
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慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞内干扰素和白细胞介素的表达及意义 被引量：7
3
作者 戴炜 余卫业 +4 位作者 姜荣龙 舒丹 刘粤 李晓良 张培泽 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2001年第S1期64-65,共2页
目的探讨慢性重型肝炎（ＣＳＨ）病人外用血单个核细胞（ＰＢＭＣ）内干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）及白细胞介素－４（ＩＬ－４）的表达及其临床意义。方法常规分离ＰＢＭＣ，在ＰＭＡ、Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、Ｍｏｎｅｎｓｉｎ的刺激下，采... 目的探讨慢性重型肝炎（ＣＳＨ）病人外用血单个核细胞（ＰＢＭＣ）内干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）及白细胞介素－４（ＩＬ－４）的表达及其临床意义。方法常规分离ＰＢＭＣ，在ＰＭＡ、Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、Ｍｏｎｅｎｓｉｎ的刺激下，采用流式细胞术（ＦＡＣＳ），对１７例ＣＳＨ患者及１９例正常健康者ＣＤ４＋Ｔ细胞内ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４的表达进行分析，并应用荧光定量聚合酶链反应检测ＨＢＶ ＤＮＡ含量。结果 ＣＤ４＋Ｔｈ１、 Ｔｈ２细胞在ＣＳＨ组分别为７．２％—２６．３％（平均１５％）和０、ｌ％—１０．９％（平均２．０％），正常对照组则分别为２．２％—１１．９％（平均５．９％）和０．４％—３．９％（平均２．２％）；ＣＤ４＋Ｔｈ１细胞百分数两组间差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。荧光定量ＰＣＲ结果表明ＣＳＨ组中１３例ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性，其ＨＢＶ ＤＮＡ的含量与ＩＦＮ－γ表达细胞百分数呈负相关。结论 Ｔｈ１细胞与肝脏的炎症活动明显相关，ＩＦＮ－γ的表达对ＨＢＶ复制可能具有一定的影响。 展开更多
关键词 重型肝炎 慢性 外周血单个核细胞 白细胞介素-4 干扰素-Γ
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丙型肝炎病毒C区部分基因的克隆表达及抗原性 被引量：1
4
作者 戴炜 马为民 +3 位作者 郭亚兵 JohnMonjardino 敖飞健 江福生 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2000年第1期18-20,共3页
目的研究丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）不同长度Ｃ蛋白片段在大肠杆菌中的表达和纯化及其抗原性。方法应用核酸及蛋白分析软件对Ｃ蛋白的抗原决定簇预测分析，以ＰＣＲ方法扩增３段长度分别为２０１ｂｐ、... 目的研究丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）不同长度Ｃ蛋白片段在大肠杆菌中的表达和纯化及其抗原性。方法应用核酸及蛋白分析软件对Ｃ蛋白的抗原决定簇预测分析，以ＰＣＲ方法扩增３段长度分别为２０１ｂｐ、４０２ｂｐ及５９１ｂｐ的Ｃ基因片段，通过基因体外重组技术克隆到ｐＧＥＸ－３Ｘ表达质粒中，用所获重组蛋白免疫ＢＡＬＢ／ Ｃ鼠并应用ＥＬＩＳＡ法对免疫动物系列稀释血清进行抗体测定和分析。结果 ＰＧＥＸ－３Ｘ表达质粒转化 ＢＬ２１（ＤＥ３），通过诱导、表达的 Ｃ２０１及 Ｃ４０２蛋白分子量分别为 ３．１×１０４及３．９×１０４的融台蛋白，以包涵体形式存在表达细胞内，而全Ｃ基因Ｃ５９１则未能有效地表达出相应蛋白。Ｃ４０２融合蛋白与丙型肝炎病人血清发生强特异性反应，而Ｃ２０１片段反应较弱。ＥＬＩＳＡ 法检测重组的Ｃ４０２蛋白免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ鼠血清有明显的抗－ＨＣＶ核心抗体产生。结论确定ＨＣＶ Ｃ区主要抗原决定簇的基因片断对临床诊断试剂和ＨＣＶ基因疫苗的研制具有一定的意义。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 病毒核心蛋白 基因表达 克隆
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乙型肝炎病毒前C区变异的临床意义 被引量：1
5
作者 戴炜 郭亚兵 +4 位作者 杨大国 舒丹 唐蔚 袁静 王召钦 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2001年第4期248-248,共1页
关键词 乙型肝炎病毒 前C区 基因变异
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