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结核分枝杆菌ESAT6-RpfE亚单位疫苗的构建与免疫原性研究 被引量：3
1
作者 李志 达泽蛟 +5 位作者 章国平 李瑞营 刘万波 苏娟 张颖 祝秉东 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期154-160,共7页
目的构建Mtb ESAT6-RpfE(早期分泌抗原靶6-复活促进因子E)的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。方法分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表... 目的构建Mtb ESAT6-RpfE(早期分泌抗原靶6-复活促进因子E)的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。方法分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表达纯化ESAT6-RpfE蛋白。采用完全随机的方法将C57BL/6小鼠分组,每组6只,共进行了两次实验,第一次实验分为ESAT6、RpfE、ESAT6-RpfE、PBS、BCG五组,佐剂为二甲基三十六烷基胺(dimethyl-dioctyldecyl ammonium bromide,DDA);第二次实验有ESAT6-RpfE、PBS、BCG三组,佐剂为DPG[DDA+poly(I:C)+明胶]。分别于0、3、6周皮下免疫C57BL/6小鼠。末次免疫8周后,用特异性抗原ESAT6及RpfE刺激,检测其分泌IFN-γ的水平;ELISA检测血清特异性抗体IgG2b、IgG1。结果PCR扩增的esat6、rpfE基因序列与GenBank报道一致;融合蛋白主要以包涵体形式表达;亚单位疫苗免疫动物能够分泌RpfE特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(427.13±100.46)]显著高于PBS组(26.13±22.34;q=7.924,P<0.001);分泌ESAT6刺激特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(506.50±140.40)]明显高于PBS组(19.25±14.75;q=11.36,P<0.001)和BCG组(125.5±46.41;q=8.882,P<0.001)。ESAT6-RpfE免疫组能诱导产生特异性抗体。结论成功构建并表达ESAT6-RpfE融合蛋白。此融合蛋白可在C57BL/6小鼠中诱导抗原特异性的免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究。 展开更多
关键词 疫苗 亚单位 重组融合蛋白质类 细菌蛋白质类 细胞因子类 免疫活性
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结核分枝杆菌抗原Ag85B-Mpt64 190-198-HspX融合蛋白免疫原性的初步观察 被引量：2
2
作者 李青 姜雯雯 +6 位作者 雒彧 于红娟 宋楠楠 王秉翔 刘昕 张颖 祝秉东 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期103-107,共5页
目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答，本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190～198位的氨基酸多肽（CD8^＋T细胞表位）及Ag85B，构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX（AMH），并对其... 目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答，本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190～198位的氨基酸多肽（CD8^＋T细胞表位）及Ag85B，构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX（AMH），并对其免疫原性进行研究。方法PCR分别扩增Ag85B、Mpt64 190-198-HspX基因，并依次插入pET-28a质粒中，在大肠杆菌BL21中表达纯化AMH蛋白。将该蛋白和佐剂二甲基三十六烷基铵和卡介苗多糖核酸（DDA＋BCG—PSN）混合构建亚单位疫苗，分别于1、4、7周皮下免疫C57BL／6小鼠3次，最后一次免疫5周后检测体液免疫与细胞免疫反应。结果该融合蛋白以包涵体形式能在大肠杆菌中稳定表达，经Ni—NTA层析柱纯化得到纯度较高的蛋白；构建的亚单位疫苗免疫动物能产生针对结核杆菌特定抗原（PPD、Ag85B、Mpt64 190-198和HspX）的特异性的细胞免疫和体液免疫应答，具有较强的免疫原性。结论融合蛋白AMH作为结核亚单位疫苗候选的融合蛋白抗原有必要进一步研究。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 亚单位疫苗 融合蛋白 AG85B HSPX
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结核融合蛋白AMM亚单位疫苗强化BCG初始免疫的免疫效应 被引量：2
3
作者 姜雯雯 景涛 +6 位作者 于红娟 李青 易娟 雒彧 宋楠楠 张颖 祝秉东 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期631-635,共5页
目的研究结核融合蛋白Ag85B—Mpt64190-198-Mtb8．4（AMM）和佐剂二甲基三十六烷基铵（DDA）、卡介苗多糖核酸（BCG—PSN）构建的亚单位疫苗强化BCG初始免疫的免疫效应。方法将融合蛋白AMM、佐剂DDA和BCG—PSN混合构建AMM亚单位疫苗。实... 目的研究结核融合蛋白Ag85B—Mpt64190-198-Mtb8．4（AMM）和佐剂二甲基三十六烷基铵（DDA）、卡介苗多糖核酸（BCG—PSN）构建的亚单位疫苗强化BCG初始免疫的免疫效应。方法将融合蛋白AMM、佐剂DDA和BCG—PSN混合构建AMM亚单位疫苗。实验1组BCG初免后第10周用AMM亚单位疫苗加强免疫小鼠一次；实验2组BCG初免后分别于第8周、第10周用AMM亚单位疫苗加强免疫小鼠一次。同时设立生理盐水及仅BCG免疫两个对照组。BCG初免后第14周、第22周，应用ELISPOT、ELISA检测免疫小鼠的细胞及体液免疫反应。同时在第22周用BCG活菌攻击被免疫小鼠，间隔4周后用流式细胞术和ELISA技术检测T细胞分型及体液免疫反应。结果（1）IFN-γ水平：BCG初免后14周，特异性抗原Ag85B刺激后实验2组分泌IFN-γ的细胞数（135±14）明显高于仅BCG免疫组（19±16），t=10．98，P〈0．01；BCG初免后22周，实验2组（208±11）同样高于仅BCG免疫组（57±18），t=6．43，P〈0．01。（2）体液免疫应答水平：实验2组的IgG1抗体滴度明显高于实验1组，而作为反映Th1型免疫反应指标的IgG2a／IgG1比值，强化免疫两次组低于强化一次组。（3）BCG模拟攻击被免疫小鼠后，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞含量：实验1、2组均高于仅BCG免疫组（t1=3．08，t2=3．16，P〈0．05）。结论BCG免疫-AMM亚单位疫苗加强免疫两次能够引起较强的细胞及体液免疫反应，同时激活调节性免疫反应。 展开更多
关键词 亚单位疫苗 融合蛋白 BCG 免疫策略 加强免疫
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结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力 被引量：1
4
作者 李青 傅林锋 +5 位作者 王秉翔 姜雯雯 于红娟 雒彧 张颖 祝秉东 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期280-285,共6页
目的探讨结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力。方法将Ag85B、Ag85B-Mpt64190-198-HspX(AMH)、Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4(AMM)以及AMH+AMM蛋白分别与佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和卡介苗多糖核酸(BCG-P... 目的探讨结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力。方法将Ag85B、Ag85B-Mpt64190-198-HspX(AMH)、Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4(AMM)以及AMH+AMM蛋白分别与佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)混合,制备亚单位疫苗。第0周用BCG皮下免疫C57BL/6小鼠,第8、10周分别用各蛋白疫苗皮下加强免疫,以PBS和BCG(仅免疫1次)作为对照。末次免疫后4周,采血检测血清抗体水平,并分离脾淋巴细胞,检测分泌IFNγ的水平;末次免疫后12周,经尾静脉注射H37Rv株,6周后取肺,进行菌落计数,抗酸及HE染色观察。结果各亚单位疫苗加强组诱导产生的特异性抗Ag85BIgG抗体水平均明显高于BCG组;融合蛋白疫苗加强组免疫小鼠脾细胞经Ag85B和PPD刺激后,产生分泌IFNγ的淋巴细胞数明显多于BCG组;融合蛋白加强组免疫小鼠肺组织结核结节面积与BCG组比较,差异无统计学意义;仅AMM+AMH加强组免疫小鼠肺组织菌落计数明显低于BCG组,其抗酸染色阳性细菌数明显低于PBS、BCG及AMH、Ag85B加强组。结论AMH和AMM疫苗联合加强BCG免疫,能诱导小鼠特异性的细胞免疫和体液免疫应答,具有较强的免疫原性,可增强BCG的保护效力。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 融合蛋白 亚单位疫苗 初始-强化免疫策略
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甘肃省甘南、定西两地耐异烟肼、利福平结核分枝杆菌散在分布重复单位基因分型 被引量：3
5
作者 司红艳 李苗 +7 位作者 甘培尚 田丽丽 姜维民 杨枢敏 景涛 张文宏 张颖 祝秉东 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期76-81,共6页
结核病是当今全球范围内对人类最具威胁的传染性疾病之一。针对其致病菌——结核分枝杆菌的分子流行病学，目前已建立多种基因分型技术，如IS6110-限制性片段长度多态性分析（RFLP），
关键词 结核分枝杆菌 基因分型技术 耐异烟肼 限制性片段长度多态性分析 甘肃省 利福平 分子流行病学 传染性疾病
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