原生质体培养在芸薹属蔬菜作物中的研究进展 被引量：2

1

作者 张艳 李成琼 +1 位作者 宋洪元 秦家顺 《生物技术通讯》 CAS 2007年第3期543-545,共3页

原生质体是遗传转化的优良受体。在原生质体培养过程中会产生很多无性系变异,还可以产生体细胞杂种,这些都为蔬菜育种提供了新的途径。介绍了原生质体培养及原生质体融合方法的研究进展,综述了原生质体培养在芸薹属蔬菜育种中所取得的... 原生质体是遗传转化的优良受体。在原生质体培养过程中会产生很多无性系变异,还可以产生体细胞杂种,这些都为蔬菜育种提供了新的途径。介绍了原生质体培养及原生质体融合方法的研究进展,综述了原生质体培养在芸薹属蔬菜育种中所取得的研究成果,并对今后研究的方向进行了展望。 展开更多

关键词 芸薹属 蔬菜 原生质体培养 原生质体融合

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S基因在甘蓝EDFs上的高分辨率荧光原位杂交定位(英文) 被引量：5

2

作者 杨昆 漆红艳 +1 位作者 朱利泉 王小佳 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期277-284,共8页

植物细胞壁及细胞质的存在和植物染色体所具有的高浓缩特性,限制高效率原位杂交定位在植物细胞内的进行。针对小型染色体芸薹属植物采用常规方法DNA制备纤维的效果不佳的特点,新建制备方法:利用减数分裂前期的染色体为材料, 在硅化的玻... 植物细胞壁及细胞质的存在和植物染色体所具有的高浓缩特性,限制高效率原位杂交定位在植物细胞内的进行。针对小型染色体芸薹属植物采用常规方法DNA制备纤维的效果不佳的特点,新建制备方法:利用减数分裂前期的染色体为材料, 在硅化的玻片上先后通过蛋白酶解和乙醇:乙酸(3:1)的适当处理,采用移动界面法制备EDFs。制备的EDFs比未经伸长处理的染色体在经向和横向方面分别取得较高程度的伸长与膨胀,长度可达到89-257 gm,比相应地中期染色体增长30-107倍, 分辨率可达42．8-53．0 kb。利用SRK和SCR两种探针同时在甘蓝粗线期染色体和EDFs上进行了原位杂交,首次鉴定了S基因座在其单倍体基因组中单拷贝性。在杂交信号检测中尽管未经过信号放大,但仍然可以观察到清晰的绿色信号;经荧光显微镜观察,在单一的EDF上发现两个相距1 μm的SCR和SRK的信号点,由此得出局部分辨率为4 kb的最高伸长度。 展开更多

关键词 空间分辨率 EDFs制备 S基因库 移动界面 EDF-荧光原位杂交 S基因定位 杂交图谱数量分析

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利用酵母双杂交法检测甘蓝SCR与SRK之间的相互作用 被引量：6

3

作者 罗兵 薛丽琰 +7 位作者 朱利泉 张贺翠 彭一波 陈松 杨红 杨昆 李成琼 王小佳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期579-586,共8页

为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将e... 为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将eSRK与GAL4报告基因DNA活化域融合(pGADT7eSRK)以及SCR与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SCR)。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活现象。融合的二倍体酵母(pGADT7eSRK×pGBKT7SCR)能在选择性固体培养基(SD/–Ade/–His/–Leu/–Trp/X-a-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色。结果表明,eSRK与SCR蛋白能够相互结合,为深入研究二者作用位点成功建立了一个技术平台。 展开更多

关键词 甘蓝 S位点受体激酶(SRK) S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR) 酵母双杂交

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甘蓝自交不亲和基因MLPK与SSP的FISH定位 被引量：5

4

作者 荣小营 朱利泉 +4 位作者 王永 高启国 陈晓丹 杨洋 王小佳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期802-808,共7页

利用FISH技术,对自交不亲和基因MLPK与SSP在甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂早粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种分辨率水平的靶DNA载体上进行物理定位。结果表明,在有丝分裂前中期,MLPK探针信号位于一对近中着丝粒同源染色体的短... 利用FISH技术,对自交不亲和基因MLPK与SSP在甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂早粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种分辨率水平的靶DNA载体上进行物理定位。结果表明,在有丝分裂前中期,MLPK探针信号位于一对近中着丝粒同源染色体的短臂中部,距着丝粒的百分距离约为53.41±3.16;SSP探针信号位于一对具有随体的近端着丝粒同源染色体的长臂端部,距着丝粒的百分距离约为78.36±4.26。综合3种载体上的FISH结果表明,MLPK与SSP在甘蓝染色体组中可能都只有一个同源序列座位,具有在单倍体基因组中的单拷贝性。重复FISH杂交表明,MLPK与5SrDNA位于同一对染色体。依据Armstrong的核型分析标准,初步判断MLPK与SSP可能分别位于甘蓝的2号和7号染色体,与S位点不存在连锁关系。另从比较基因组学角度对定位结果进行了讨论。 展开更多

关键词 甘蓝 MLPK基因 SSP基因 荧光原位杂交 自交不亲和性

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甘蓝中硫氧还蛋白编码基因THL1的分子特性及表达研究 被引量：4

5

作者 高启国 宋明 +3 位作者 牛义 杨昆 朱利泉 王小佳 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期909-914,共6页

采用PCR和RT-PCR技术,以‘E1’甘蓝基因组DNA和柱头cDNA为模板对THL1基因进行扩增克隆,得到的片段长度分别为732bp和455bp。序列分析表明,克隆的DNA和cDNA序列与甘蓝‘西园四号’THL1的DNA和cDNA同源性分别为97.9%和98.3%,两条序列内含... 采用PCR和RT-PCR技术,以‘E1’甘蓝基因组DNA和柱头cDNA为模板对THL1基因进行扩增克隆,得到的片段长度分别为732bp和455bp。序列分析表明,克隆的DNA和cDNA序列与甘蓝‘西园四号’THL1的DNA和cDNA同源性分别为97.9%和98.3%,两条序列内含子的大小不同;同时,前者第2内含子不符合典型的GT-AG规则:即第2个内含子3′端碱基为AT。将THL1基因cDNA序列定向克隆到原核表达载体pET-43.1a(+),构建融合表达质粒pET43.1a(+)-THL1,在大肠杆菌BL21中表达出分子量为74kD的融合蛋白,经胰岛素检测,THL1有氧化还原活性,表明THL1在大肠杆菌中得到了正确表达。 展开更多

关键词 甘蓝 类硫氧还蛋白 基因克隆 序列分析

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甘蓝自交不亲和信号传导中THL1和SRK相互作用的体外检测 被引量：4

6

作者 高启国 宋明 +3 位作者 牛义 杨昆 朱利泉 王小佳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期934-943,共10页

在甘蓝自交不亲和信号传导中SRK和THL1之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增了THL1和SRK激酶结构域(记为SRKE1)编码序列,构建了THL1原核表达质粒pET43.1-THL1,SRKE1原核表达质粒pET431-SRKE... 在甘蓝自交不亲和信号传导中SRK和THL1之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增了THL1和SRK激酶结构域(记为SRKE1)编码序列,构建了THL1原核表达质粒pET43.1-THL1,SRKE1原核表达质粒pET431-SRKE1和真核表达质粒pPIC9K-SRKE1,分别在宿主菌大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115中进行表达。THL1融合蛋白经胰岛素检测,表明表达的THL1有氧化还原活性。建立了体外检测蛋白质相互作用的新方法,并用该方法对THL1与SRKE1的相互作用进行了检测,结果表明THL1可与SRKE1相互作用并形成稳定的复合体,这为深入分析THL1与SRK相互作用机理提供了理论和技术基础。 展开更多

关键词 S-位点受体激酶 类硫氧还蛋白 毕赤酵母

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甘蓝自交不亲和信号传导元件ARC1的体外表达及其与SRK相互作用验证 被引量：3

7

作者 牛义 王志敏 +3 位作者 高启国 宋明 王小佳 朱利泉 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1202-1208,共7页

在甘蓝自交不亲和信号传导中ARC1和上游因子SRK之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增ARC1的编码序列,构建ARC1原核表达质粒pET43.1a-ARC1,转化宿主菌大肠杆菌BL21,通过SDS-PAGE检测该蛋白... 在甘蓝自交不亲和信号传导中ARC1和上游因子SRK之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增ARC1的编码序列,构建ARC1原核表达质粒pET43.1a-ARC1,转化宿主菌大肠杆菌BL21,通过SDS-PAGE检测该蛋白的表达。利用免疫共沉淀原理及pET43.1a-ARC1融合蛋白序列中的6×His标签与Ni+结合的特点建立了体外检测蛋白质相互作用的新方法,并用该方法对ARC1与SRK的相互作用进行了检测。结果表明,在体外ARC1能与SRK相互作用并形成复合体,这为深入分析ARC1与SRK相互作用机理以及探讨ARC1与下游传导元件的相互作用提供了理论和技术基础。 展开更多

关键词 甘蓝 信号传导 S-位点受体激酶(SRK) 臂重复蛋白1(ARC1)

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结球甘蓝游离小孢子培养胚发生能力的研究 被引量：10

8

作者 刘艳玲 简元才 +2 位作者 李成琼 丁云花 王东双 《西南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2006年第3期439-441,446,共4页

试验对20个基因型的结球甘蓝材料进行游离小孢子培养。探讨基因型、蔗糖浓度、激素配比与浓度、活性炭等因素对结球甘蓝小孢子胚发生能力的影响。实验结果表明：基因型、蔗糖浓度对胚发生能力影响最大，除个别基因型对蔗糖浓度有较高的... 试验对20个基因型的结球甘蓝材料进行游离小孢子培养。探讨基因型、蔗糖浓度、激素配比与浓度、活性炭等因素对结球甘蓝小孢子胚发生能力的影响。实验结果表明：基因型、蔗糖浓度对胚发生能力影响最大，除个别基因型对蔗糖浓度有较高的要求外，蔗糖浓度在13％、激素组合NAA（0．05mg／mL）＋BA（0．1mg／mL）的培养基适合较多基因型的小孢子胚发生。在培齐基中滴加活性碳（10mg／L）每皿1—2滴，诱导效果明显优于不加活性炭。实验中共有11个基因型的甘蓝材料获得了胚状体，并成功筛选出基因型G8小孢子胚高频发生的最佳蔗糖与激素浓度配比。 展开更多

关键词 结球甘蓝 游离小孢子 胚状体

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基于SRK和SCR序列的甘蓝自交不亲和系单倍型分析 被引量：2

9

作者 高启国 韦静宜 +1 位作者 朱利泉 王小佳 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期86-90,共5页

采用RT-PCR和其他分子生物学方法,以甘蓝自交不亲和系E1和F1柱头cDNA为模板扩增SRKE1和SRKF1基因,以花药cDNA为模板扩增SCRE1和SCRF1基因.经序列比对首次证明E1和F1材料分别为S28和S7单倍型.经三维结构分析,预测SCRE1上C5-C6和C7-C8之... 采用RT-PCR和其他分子生物学方法,以甘蓝自交不亲和系E1和F1柱头cDNA为模板扩增SRKE1和SRKF1基因,以花药cDNA为模板扩增SCRE1和SCRF1基因.经序列比对首次证明E1和F1材料分别为S28和S7单倍型.经三维结构分析,预测SCRE1上C5-C6和C7-C8之间氨基酸序列决定SCRE1的单倍型特异性,SRKE1上TNNSFYSRLKVS序列决定了SRKE1的单倍型特异性,并对两者相对作用的关键氨基酸位点进行了分析. 展开更多

关键词 甘蓝 自交不亲和性 SRK基因 SCR基因 单倍型

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甘蓝染色体及伸长DNA纤维制备技术的研究 被引量：2

10

作者 荣小营 朱利泉 +1 位作者 王永 王小佳 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1-7,共7页

以甘蓝根尖、花药、黄化苗等为材料,初步建立了甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种具有不同空间分辨率的靶DNA载体的制备技术.结果表明:通过变温处理可以有效提高前中期染色体分裂相比率;采用0.002 mo... 以甘蓝根尖、花药、黄化苗等为材料,初步建立了甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种具有不同空间分辨率的靶DNA载体的制备技术.结果表明:通过变温处理可以有效提高前中期染色体分裂相比率;采用0.002 mol/L 8-羟基喹啉20℃预处理1 h、2%纤维素酶和2%果胶酶混合液37℃酶解约2 h、0.075 mol/L氯化钾25℃低渗30 min,制备的前中期染色体效果最佳;2%纤维素酶和2%果胶酶混合液37℃酶解约3 h,可获得伸展良好、背景干净的粗线期染色体;分子梳理法与移动界面法相比,前者制备的伸长DNA纤维效果较好.此方法的建立为荧光原位杂交技术在甘蓝相关研究领域的应用打下了坚实的基础. 展开更多

关键词 甘蓝 染色体 伸长DNA纤维 制片

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同源重组快速构建甘蓝SCR酵母双杂交诱饵载体及其自激活作用的检测

11

作者 罗兵 朱利泉 +7 位作者 薛丽琰 张贺翠 彭一波 杨红 杨昆 高启国 李成琼 王小佳 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期79-85,共7页

采用巢式PCR获得甘蓝SCR的成熟肽编码区,利用同源重组技术首次将其克隆到pGBKT7载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pGBKT7-SCR,结果表明:通过巢式PCR获得了正确的甘蓝SCR成熟肽编码区,并成功构建到pGBKT7诱饵载体中,且转化有诱饵载体... 采用巢式PCR获得甘蓝SCR的成熟肽编码区,利用同源重组技术首次将其克隆到pGBKT7载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pGBKT7-SCR,结果表明:通过巢式PCR获得了正确的甘蓝SCR成熟肽编码区,并成功构建到pGBKT7诱饵载体中,且转化有诱饵载体的Y2HGold在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,而在SD/-His-Trp和SD/-Trp/X-a-Gal/AbA营养缺陷平板上皆不能生长,说明对报告基因无自激活作用;且毒性实验也表明,SCR蛋白对酵母没有毒害作用. 展开更多

关键词 甘蓝 SCR蛋白 同源重组 酵母双杂交 诱饵载体 自激活

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培育无选择标记的转基因植物

12

作者 王东双 李成琼 +1 位作者 宋洪元 刘艳玲 《生物技术通讯》 CAS 2006年第3期429-432,共4页

目前,几乎所有的植物遗传转化都要通过使用选择标记基因,如抗生素或除草剂抗性基因等来筛选转化子,虽然没有研究结果表明选择标记基因影响人类健康或环境安全,但近年来也引发了人们对转基因产品安全性的担心。为了消除公众对转基因食品... 目前,几乎所有的植物遗传转化都要通过使用选择标记基因,如抗生素或除草剂抗性基因等来筛选转化子,虽然没有研究结果表明选择标记基因影响人类健康或环境安全,但近年来也引发了人们对转基因产品安全性的担心。为了消除公众对转基因食品的安全性顾虑,无选择标记的转基因植物应运而生。本文综述了共转化系统、位点特异性重组系统(包括FLP/FRT、Cre/lox、R/RS及Gin/gix系统)和转座子系统(Ac/Ds转座子系统)在培育无选择标记转基因植物中的应用。 展开更多

关键词 转基因植物 无选择标记 共转化 位点特异性重组

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甘蓝BoSU03蛋白基因的克隆及其与SRK相互作用分析 被引量：2

13

作者 毕云龙 高启国 +7 位作者 施松梅 刘晓欢 蒲全明 张莹 张林成 廉小平 柳菁 朱利泉 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2206-2214,共9页

扩增了从甘蓝柱头蛋白质谱鉴定中获得的泛素蛋白BoSU03基因的编码序列。序列分析表明BoSU03与甘蓝泛素蛋白Bo1003815的核苷酸序列相似性最高,达98%,含有臂重复结构域,属于植物泛素蛋白家族。为探究BoSU03是否为自交不亲和S位点受体激酶(... 扩增了从甘蓝柱头蛋白质谱鉴定中获得的泛素蛋白BoSU03基因的编码序列。序列分析表明BoSU03与甘蓝泛素蛋白Bo1003815的核苷酸序列相似性最高,达98%,含有臂重复结构域,属于植物泛素蛋白家族。为探究BoSU03是否为自交不亲和S位点受体激酶(SRK)下游的互作蛋白,以SRK与ARC1相互作用为对照,利用GAL酵母双杂交系统对SRK与BoSU03进行了相互作用验证,结果表明,BoSRK/BoSU03的转化酵母在四缺平板SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/x-α-gal/25 mmol 3-AT上长势较好,显色较深,进一步检测发现BoSRK/BoSU03转化酵母的β-半乳糖苷酶活性值大于BoSRK/BoARCl转化酵母的活性值,这为进一步分析鉴定BoSU03是否参与SRK下游信号传导过程提供了依据。 展开更多

关键词 甘蓝 S位点受体激酶(SRK) BoSU03 植物泛素蛋白家族(PUB) 下游信号蛋白 酵母双杂交系统

原文传递

甘蓝两种SRK短截蛋白的体外表达及其与THL1作用检测 被引量：1

14

作者 高启国 孙梓健 +2 位作者 韦静宜 朱利泉 王小佳 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期725-732,共8页

为探明S–位点受体激酶(SRK)上与类硫氧还蛋白1(THL1)作用的氨基酸区域以及两者间作用方式,依据SRKE1上功能域分布构建了两种SRKE1短截体原核表达质粒pGEX-SRKE1A和pGEX-SRKE1B,分别在大肠杆菌BL21中获得了可溶性表达。通过体外孵育检... 为探明S–位点受体激酶(SRK)上与类硫氧还蛋白1(THL1)作用的氨基酸区域以及两者间作用方式,依据SRKE1上功能域分布构建了两种SRKE1短截体原核表达质粒pGEX-SRKE1A和pGEX-SRKE1B,分别在大肠杆菌BL21中获得了可溶性表达。通过体外孵育检测蛋白质相互作用的方法对SRKE1A、SRKE1B与THL1相互作用进行了检测,结果表明SRKE1A和SRKE1B均可与THL1结合,明确了THL1与SRK相互作用并不依赖于SRK激酶活性。两类SRK等位序列间比对结果表明Cys在两类SRK间的保守性存在明显差异,推测两类SRK材料亲和性的差异可能与Cys保守性不同有关。 展开更多

关键词 甘蓝 S–位点受体激酶 类硫氧还蛋白1 相互作用

原文传递