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花椒几丁质酶基因ZaCHIT1的原核表达及纯化
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作者 杨德奕 毛俊文 +1 位作者 赵德刚 赵懿琛 《种子》 北大核心 2021年第12期19-25,共7页
花椒中含有的几丁质酶基因ZaCHIT1在植物病程中诱导相关蛋白表达,在植物对抗真菌病害过程中起重要作用。本研究将原核表达载体pMCSG19-ZaCHIT1转化到大肠杆菌BL 21(DE 3)菌株中,之后进行IPTG诱导表达并从诱导温度、时长和IPTG浓度3个方... 花椒中含有的几丁质酶基因ZaCHIT1在植物病程中诱导相关蛋白表达,在植物对抗真菌病害过程中起重要作用。本研究将原核表达载体pMCSG19-ZaCHIT1转化到大肠杆菌BL 21(DE 3)菌株中,之后进行IPTG诱导表达并从诱导温度、时长和IPTG浓度3个方面检测对ZaCHIT 1重组蛋白表达的影响,以获得最优体系,最优体系为诱导温度37℃、IPTG浓度为1 mmol·L^(-1)、诱导时长为14 h。进一步离心后分析各组分发现,ZaCHIT 1重组蛋白多以可溶性蛋白形式存在。利用Ni-NTA亲和层析纯化方法对ZaCHIT 1重组蛋白进行纯化,发现在经过300 mmol·L^(-1)咪唑洗脱液洗脱后的洗脱组分中的ZaCHIT 1重组蛋白表达浓度最大。经Western Blot鉴定发现,在77.51 kDa处有符合ZaCHIT 1重组蛋白大小的特异性条带出现。本研究将为后续研究ZaCHIT1基因在植物中的抗菌作用机制及结构提供依据。 展开更多
关键词 花椒 几丁质酶 原核表达 可溶性蛋白
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