遵义朝天椒的化学成分研究 被引量：2

1

作者 宋长伟 覃成 +4 位作者 李三华 孟令杰 姜念 喻昌燕 刘云 《云南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2018年第6期451-454,共4页

采用硅胶、凝胶及中高压反相色谱等多种分离方法,从遵义朝天椒乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到了9个化合物,经核磁共振、质谱等波谱方法分别鉴定出其结构为:capsaicin(1),dihydrocapsaicin(2),acetovanillone(3),(-)-epiloliolide... 采用硅胶、凝胶及中高压反相色谱等多种分离方法,从遵义朝天椒乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到了9个化合物,经核磁共振、质谱等波谱方法分别鉴定出其结构为:capsaicin(1),dihydrocapsaicin(2),acetovanillone(3),(-)-epiloliolide(4),(+) dehydrovomifoliol(5),Ferulic acid(6),vanillin(7),acetosyringone(8),2-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(2-hydroxy-5-methoxyphenyl)-3-oxo-1-propanol (9).其中化合物9首次从该植物中分离获得. 展开更多

关键词 CapsicumannuumL. 遵义朝天椒 分离纯化 结构鉴定

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斑蝥素酸镁阻断MAPK信号通路抑制SMMC-7721人肝癌细胞增殖 被引量：11

2

作者 刘云 李晓飞 +5 位作者 邹倩倩 刘流 朱欣婷 贾启 王灵军 晏容 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期347-351,共5页

目的观察斑蝥素酸镁对SMMC-7721肝癌细胞丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,探讨斑蝥素酸镁的抗癌机制。方法使用蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性检测试剂盒分别检测斑蝥素酸镁和冈田酸(OA)对PP2A活性的影响。实时定量PCR检测斑蝥素酸镁... 目的观察斑蝥素酸镁对SMMC-7721肝癌细胞丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,探讨斑蝥素酸镁的抗癌机制。方法使用蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性检测试剂盒分别检测斑蝥素酸镁和冈田酸(OA)对PP2A活性的影响。实时定量PCR检测斑蝥素酸镁、OA对SMMC-7721人肝癌细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p38MAPK、c-Jun N末端激酶1/2(JNK1/2)mRNA表达水平的影响;Western blot法检测斑蝥素酸镁、OA对SMMC-7721细胞ERK1/2、p38MAPK、JNK蛋白表达以及蛋白磷酸化水平的影响。结果 0.283μmol/L斑蝥素酸镁对PP2A活性无明显抑制作用,0.567μmol/L斑蝥素酸镁能显著抑制PP2A活性,且随着药物浓度的增加,抑制作用愈趋明显;同时0.059 nmol/L OA对PP2A活性也有显著抑制作用。与空白对照组比较,0.283μmol/L斑蝥素酸镁组ERK1、ERK2 mRNA表达量无明显变化,当浓度为0.567μmol/L时,ERK1、ERK2mRNA表达量显著下降,且随着药物浓度的增加下降更明显;而0.059 nmol/L OA组ERK1、ERK2 mRNA表达量却显著升高。0.059 nmol/L OA和不同浓度斑蝥素酸镁组的p38MAPK、JNK1、JNK2 mRNA表达量均显著升高。与空白对照组比较,0.283μmol/L斑蝥素酸镁组ERK1/2磷酸化水平无明显变化,高于0.567μmol/L斑蝥素酸镁处理显著下调ERK1/2磷酸化水平,其下调程度具有浓度依赖效应;而0.059 nmol/L OA组ERK1/2磷酸化水平却显著上调。0.059 nmol/L OA和不同浓度斑蝥素酸镁组的p38MAPK、JNK磷酸化水平均显著上调。结论斑蝥素酸镁可能是通过抑制PP2A活性进而抑制ERK1/2通路来实现对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用。 展开更多

关键词 斑蝥素酸镁 蛋白磷酸酶2A(PP2A) 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK) SMMC-7721肝癌细胞

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半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺递送siRNA对肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中MRE11表达的影响 被引量：2

3

作者 刘云 潘杰 +4 位作者 董伟 惠景 李三华 范芳 朱欣婷 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第6期934-939,共6页

背景:壳聚糖是一种常用的非病毒载体,具有良好生物相容性、生物可降解性、低毒等优点,但其基因递送能力相对较弱,常需要进行结构衍生修饰。目的:观察半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺(LA-CS-PEI)在肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中递送si RNA的... 背景:壳聚糖是一种常用的非病毒载体,具有良好生物相容性、生物可降解性、低毒等优点,但其基因递送能力相对较弱,常需要进行结构衍生修饰。目的:观察半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺(LA-CS-PEI)在肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中递送si RNA的能力及对减数分裂重组蛋白11(MRE11)表达的影响。方法:1将肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu或人肝细胞HL-7702分别与0,10,20,40,80,100 mg/L的LA-CS-PEI或壳聚糖-聚乙烯亚胺共培养24 h,检测细胞存活率;2将LA-CS-PEI与si RNA-FAM分别以0,2,4,8,16,32的质量比混合,制备复合转染颗粒。以复合转染颗粒转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu,48,72,96 h后,以转染效率筛选最佳质量比与转染时间,进行下步实验;3以复合转染颗粒、LA-CS-PEI、si RNA分别转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu 48 h后,以未转染的细胞为空白对照,检测MRE11基因及蛋白的表达。结果与结论:1与壳聚糖-聚乙烯亚胺相比,LA-CS-PEI毒性更低,且当LA-CS-PEI质量浓度高达100 mg/L时,仍表现出很低的细胞毒性;2LA-CS-PEI与si RNA-FAM质量比为4和8时转染效率均达95%以上,入胞效率极高,转染48 h转染效果最好,所以后续实验选择质量比为8,转染时间为48 h的复合转染颗粒;3复合转染颗粒组MRE11基因及蛋白表达低于LA-CS-PEI组、si RNA组、空白对照组(P<0.05);4结果表明,LA-CS-PEI能实现si RNA的有效递送,并能沉默肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中的MRE11基因。 展开更多

关键词 壳聚糖 转染 基因沉默 聚乙烯亚胺 组织工程 生物材料 材料相容性 半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺 去唾液酸糖蛋白受体 减数分裂重组蛋白11 RNA干扰 肝癌细胞BEL7402/5-Fu

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微小RNA-7敲减对ConA诱导的小鼠急性肝损伤的影响 被引量：1

4

作者 岳东旭 赵娟娟 +3 位作者 张忆雄 丁涛 陈慧子 徐林 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1643-1647,共5页

目的:研究微小RNA-7(miR-7)敲减(KD)对急性肝损伤(ALI)模型小鼠的影响。方法:野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠腹腔注射30 mg/kg刀豆蛋白(ConA)建立急性肝损伤模型;48 h后,观察小鼠肝脏的形态、重量及其脏器指数变化;HE染色观察小鼠肝脏组... 目的:研究微小RNA-7(miR-7)敲减(KD)对急性肝损伤(ALI)模型小鼠的影响。方法:野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠腹腔注射30 mg/kg刀豆蛋白(ConA)建立急性肝损伤模型;48 h后,观察小鼠肝脏的形态、重量及其脏器指数变化;HE染色观察小鼠肝脏组织病理学变化;血清学方法检查血清中谷丙转氨酶(ALT)的水平;ELISA法检测血清中细胞因子IL-4和IFN-γ的水平;流式细胞术检测肝脏组织中CD4^+T细胞的比例及其相关的细胞因子IL-4和IFN-γ的表达变化。结果:与对照组相比,miR-7敲减后急性肝损伤小鼠的肝脏组织颜色变浅,重量减轻,重量指数明显增加(P<0.05);HE染色显示miR-7KD小鼠血清炎症细胞浸润显著增多;血清学方法检测发现急性肝损伤小鼠血清ALT的水平明显上升(P<0.05);ELISA法检测显示miR-7KD小鼠血清中IFN-γ水平明显升高(P<0.01),而IL-4的表达水平则明显降低(P<0.01);流式细胞术检测结果显示,miR-7KD小鼠肝脏中CD4+T细胞比例显著升高(P<0.01),其相关的细胞因子IFN-γ的表达水平也显著上调(P<0.01),而IL-4的水平没有发生明显变化。结论:敲减miR-7基因可明显促进ConA诱导的小鼠急性肝损伤。 展开更多

关键词 微小RNA-7 急性肝损伤 CD4^+T细胞

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六神丸和砷化合物对人肝癌Hep3B细胞增殖的影响 被引量：3

5

作者 梁世霞 刘正芸 +5 位作者 余丽梅 刘云 郭静 贾智诚 拓军雄 刘杰 《遵义医学院学报》 2016年第6期558-562,共5页

目的中药六神丸(LSW)含雄黄(As_4S_4)。近年研究表明砷化合物对血液肿瘤有显著的抑制作用,但其对实体瘤的作用报道少。故我们就六神丸和砷化合物[Na_2HAsO_4(As^(5+))、NaAsO_2(As^(3+))、As_2O_3、As_4S_4和As_2S_2]对人肝癌Hep3B细胞... 目的中药六神丸(LSW)含雄黄(As_4S_4)。近年研究表明砷化合物对血液肿瘤有显著的抑制作用,但其对实体瘤的作用报道少。故我们就六神丸和砷化合物[Na_2HAsO_4(As^(5+))、NaAsO_2(As^(3+))、As_2O_3、As_4S_4和As_2S_2]对人肝癌Hep3B细胞的抗肿瘤作用进行了研究。方法采用MTS法检测六神丸、雄黄及其他含砷化合物对人肝癌Hep3B细胞的杀灭作用,通过原子吸收光谱测定各砷化合物中砷(As)的溶出度;流式细胞仪检测药物对细胞周期和细胞凋亡的影响;荧光定量PCR检测相关基因的表达。结果六神丸中As的溶出度高于雄黄和As_2S_2,但低于亚砷酸钠(As^(3+))、砷酸钠(As^(5+))和As_2O_3。六神丸对Hep3B有较好的抑制增殖和杀灭作用其作用仅次于亚砷酸钠。六神丸可诱导Hep3B细胞凋亡,作用机制与降低Bcl-2及Bcl-w的表达有关,并降低ABCG2、VEGF(血管内皮生长因子)和肿瘤转移相关基因MMP-9的表达。但六神丸对细胞周期无明显影响。结论六神丸通过多途径对肝癌Hep3B细胞具有明显的抗增殖作用。 展开更多

关键词 六神丸 抗肿瘤 HEP3B细胞 砷化合物 凋亡

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内毒素耐受状态下胸腺细胞TCRβ链CDR3区多态性和长度的变化 被引量：1

6

作者 贾力 陶弋婧 +8 位作者 赵娟娟 郭萌萌 陈超 褚风云 王海嵘 刘云 罗军敏 姚新生 徐林 《遵义医学院学报》 2017年第2期139-142,149,共5页

目的研究内毒素耐受状态下小鼠胸腺T细胞TCRβ链CDR3多态性和长度的变化,并探讨其意义。方法以5mg/kg浓度LPS腹腔注射C57BL/6小鼠建立内毒素耐受模型,5 mg/kg浓度生理盐水腹腔注射72 h后为对照组,提取对照组、模型后72 h实验组和8 d实... 目的研究内毒素耐受状态下小鼠胸腺T细胞TCRβ链CDR3多态性和长度的变化,并探讨其意义。方法以5mg/kg浓度LPS腹腔注射C57BL/6小鼠建立内毒素耐受模型,5 mg/kg浓度生理盐水腹腔注射72 h后为对照组,提取对照组、模型后72 h实验组和8 d实验组的小鼠胸腺组织RNA,并逆转录为c DNA;以22条TRBV基因家族序列设计上游引物,TRBJ1-1基因家族序列设计下游引物,PCR扩增出完整的TCRβ链CDR3区;毛细管电泳技术分析TCRβ链CDR3区的多态性和长度。结果正常小鼠胸腺样本多数呈现中间高两边低的正态性分布的TCRβ链CDR3谱型峰图,少数呈现偏峰、寡峰或低峰;LPS注射后72 h胸腺样本TCRβ链CDR3区呈现数量不等的偏峰、寡峰和低峰;模型8 d胸腺样本大多呈现多峰。此外,与正常组相比,模型72 h和8 d胸腺样本TCRβ链CDR3区产物长度均发生了不同程度的变化。结论内毒素耐受状态下,小鼠胸腺细胞TCRβ链CDR3区的多态性和长度均发生了明显改变,为后续进一步研究该状态下胸腺细胞发育及功能变化提供前期实验基础。 展开更多

关键词 内毒素 胸腺 TCRβ链CDR3区 小鼠

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微小RNA-7慢病毒过表达载体的构建及其作用

7

作者 徐华林 赵娟娟 +4 位作者 褚风云 郭萌萌 何志旭 陈超 徐林 《遵义医学院学报》 2016年第5期449-454,共6页

目的构建miR-7慢病毒过表达载体,并对人肺癌细胞进行感染,观察其影响效果。方法设计引物,PCR法扩增miR-7初级序列;纯化、经BamH I和EcoR I双酶切后将其亚克隆入pLVX-shRNA慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定;将构建成功的pLVX-shRNA-m... 目的构建miR-7慢病毒过表达载体,并对人肺癌细胞进行感染,观察其影响效果。方法设计引物,PCR法扩增miR-7初级序列;纯化、经BamH I和EcoR I双酶切后将其亚克隆入pLVX-shRNA慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定;将构建成功的pLVX-shRNA-miR-7（命名为p LV-miR-7）载体体外转染293T细胞进行包装,在48 h收获上清,用Real-time PCR法测定该慢病毒滴度;将制备好的病毒上清体外感染人肺癌95 D细胞后,用Real-time PCR检测各组中miR-7成熟体表达水平;CCK-8法检测95 D细胞生长变化。结果菌液PCR和酶切结果显示miR-7目的片段418 bp成功构入载体pLVX-shRNA;同时结合测序结果证明构建miR-7慢病毒过表达载体成功;慢病毒上清滴度为1.53×10^7copies/mL;该病毒感染人肺癌95 D细胞后可有效表达miR-7成熟体,并显著抑制细胞的体外生长（P〈0.05）。结论成功构建miR-7慢病毒过表达载体,为进一步探究miR-7在肺癌发病机制中的作用提供了重要实验基础。 展开更多

关键词 miR-7 慢病毒载体 肺癌 CCK-8法 95D细胞株

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斑蝥素酸镁对人肝癌细胞株SMMC-7721转录组的影响 被引量：5

8

作者 谭香玉 晏容 +3 位作者 刘云 刘流 王灵军 李晓飞 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期691-695,共5页

目的通过RNA-seq分析斑蝥素酸镁对肝癌细胞转录组的影响,为阐明斑蝥素酸镁对肝癌细胞增殖的抑制效应提供分子信息,以期为临床上利用斑蝥素酸镁治疗肝癌提供相关理论基础。方法体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721,用不同浓度(0、0.895、1.790... 目的通过RNA-seq分析斑蝥素酸镁对肝癌细胞转录组的影响,为阐明斑蝥素酸镁对肝癌细胞增殖的抑制效应提供分子信息,以期为临床上利用斑蝥素酸镁治疗肝癌提供相关理论基础。方法体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721,用不同浓度(0、0.895、1.790、2.685μmol/L)的斑蝥素酸镁干预48 h后,利用MTT检测细胞抑制率;采用illumina Hiseq2500测序平台对1.790μmol/L处理组和对照组(0μmol/L)进行RNA-seq分析;根据RNA-seq结果,利用qRT-PCR检测了磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)等基因的表达水平。结果不同浓度(0.895、1.790、2.685μmol/L)的斑蝥素酸镁干预48 h后,与对照组(0μmol/L)比较,均能显著抑制SMMC-7721细胞增殖(t=33.48、90.30、151.01,P<0.01)。通过RNA-seq分析,斑蝥素酸镁干预后,共导致150个基因表达发生显著变化,82个基因显著下调(P<0.01),68个基因显著上调(P<0.01),这些差异基因涉及Ribosome、Hippo signaling pathway、MAPK signaling pathway、PI3K signaling pathway、mTOR signaling pathway等通路,影响肝癌细胞的增殖、代谢及凋亡;通过qRT-PCR检测,1.790μmol/L斑蝥素酸镁能够显著降低PI3K、Akt及ERK1/2的转录水平,抑制细胞增殖。结论通过RNA-seq检测及分析,PI3K、AKT和ERK信号通路的抑制可能在斑蝥素酸镁抑制肝癌细胞增殖中发挥作用。 展开更多

关键词 斑蝥素酸镁 肝癌细胞SMMC-7721 转录组 差异表达基因 RNA-SEQ

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斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制 被引量：2

9

作者 黄渝茜 晏旭航 +7 位作者 晏容 刘云 杨明洁 陈威天 古宸廷 李埝 罗明星 李晓飞 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1419-1423,共5页

目的探讨斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制。方法磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测不同浓度(1.668、3.336、5.004、6.672μmol/L)斑蝥素酸镁对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用,将细胞随机分为空白对照组、斑蝥素酸镁组(2.43、4... 目的探讨斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制。方法磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测不同浓度(1.668、3.336、5.004、6.672μmol/L)斑蝥素酸镁对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用,将细胞随机分为空白对照组、斑蝥素酸镁组(2.43、4.86、9.72μmol/L)、冈田酸组(0.072 nmol/L)。作用24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧(ROS)、线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞色素c、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、ERK1/2蛋白磷酸化表达。结果斑蝥素酸镁能明显抑制BEL-7402人肝癌细胞的增殖,呈剂量-效应关系,其IC50为4.86μmol/L;与对照组比较,斑蝥素酸镁组凋亡率、细胞内活性氧(ROS)水平、Cyt-C、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),线粒体膜电位、ERK1/2蛋白磷酸化表达显著降低(P<0.01)。结论斑蝥素酸镁可能通过抑制ERK1/2磷酸化水平来反向调节线粒体凋亡途径,最终诱导BEL-7402人肝癌细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 斑蝥素酸镁 BEL-7402人肝癌细胞 凋亡 ERK1/2 线粒体

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基因沉默LMTK3对甲状腺乳头状癌细胞株BCPAP恶性生物学行为的影响 被引量：1

10

作者 泮红飞 冯继红 +6 位作者 杨涛羽 苏俊 刘芊伊 刘旭恒 龙润莹 殷茜 罗军敏 《遵义医学院学报》 2018年第3期282-287,292,共7页

目的探讨基因沉默LMTK3对人甲状腺乳头状癌细胞株BCPAP增殖、迁移、侵袭和凋亡等恶性生物学行为的影响。方法用携带sh LMTK3的重组慢病毒载体(LV-sh LMTK3-1、LV-sh LMTK3-2和LV-sh LMTK3-3)分别感染人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞株,作为... 目的探讨基因沉默LMTK3对人甲状腺乳头状癌细胞株BCPAP增殖、迁移、侵袭和凋亡等恶性生物学行为的影响。方法用携带sh LMTK3的重组慢病毒载体(LV-sh LMTK3-1、LV-sh LMTK3-2和LV-sh LMTK3-3)分别感染人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞株,作为实验组(LV-sh LMTK3组);以对照慢病毒载体(LV-Control)感染人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞株,作为阴性对照组(LV-Control组);空白对照组(Control组)细胞常规培养,不作任何处理。用Western Blot检测各组细胞中LMTK3蛋白的表达;CCK8实验检测细胞增殖能力的变化;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化;流式细胞术检测各组细胞的凋亡能力。结果 Western blot方法显示LV-sh LMTK3组中LMTK3蛋白的表达较阴性对照组显著降低(P<0.01);CCK8实验显示基因沉默LMTK3显著抑制BCPAP细胞的增殖(P<0.001);Transwell实验结果显示,与LV-Control组相比,LV-sh LMTK3组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(均为P<0.01),流式细胞术显示基因沉默LMTK3明显促进细胞的凋亡(P<0.01)。结论基因沉默LMTK3可显著抑制BCPAP细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进其凋亡。 展开更多

关键词 LMTK3 甲状腺乳头状癌 慢病毒 增殖 侵袭迁移 凋亡

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微小RNA-126基因敲减对CD4^+T细胞体外功能的影响

11

作者 褚风云 胡燕 +6 位作者 郭萌萌 李永菊 贾力 王海嵘 周涯 罗军敏 徐林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期158-163,共6页

目的研究微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)后对CD4^+T细胞体外功能的影响并探讨其意义。方法 MACS分选miR-126 KD小鼠脾脏CD4^+CD62L^+T细胞,ConA刺激48h后,Real-time PCR技术检测细胞内miR-126成熟体表达水平... 目的研究微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)后对CD4^+T细胞体外功能的影响并探讨其意义。方法 MACS分选miR-126 KD小鼠脾脏CD4^+CD62L^+T细胞,ConA刺激48h后,Real-time PCR技术检测细胞内miR-126成熟体表达水平;FACS分别检测CD4^+T细胞表面活化分子CD69、CD62L、CD44和增殖相关分子Ki-67,以及细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17表达变化;Annexin V/PI双染色法检测CD4^+T细胞的凋亡情况。结果与野生型(wide-type,WT)小鼠相比,miR-126KD小鼠的CD4^+T细胞中miR-126成熟体表达显著下调(P<0.001);miR-126 KD小鼠CD4^+T细胞活化后CD62L的表达比例显著减少(P<0.01),而CD69、CD44的比例显著增加(P<0.05);同时Ki-67^+的比例也明显增加(P<0.05);此外,miR-126 KD小鼠CD4^+T细胞的INF-γ表达比例显著上调(P<0.001),IL-4的比例显著下调(P<0.01),而IL-17的比例没有明显变化(P>0.05);最后,CD4^+T细胞的凋亡比例显著减少(P<0.05)。结论 miR-126基因敲减后CD4^+T细胞的活化、增殖和相关细胞因子分泌均明显增强,为后续深入探讨miR-126在免疫应答中的作用及机制提供前期实验基础。 展开更多

关键词 微小RNA-126 CD4+T细胞 活化 增殖 凋亡

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