生物化学与分子生物学综合实验教学改革实践

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作者 米洋 张海风 +2 位作者 王天奇 王俊萍 金戈 《中文科技期刊数据库（全文版）教育科学》 2023年第12期61-64,共4页

针对生物化学与分子生物学实验课教学中存在的问题,我们设计并实施了综合实验“肝组织乳酸脱氢酶的纯化”,取代了过去的部分独立性验证性实验,取得了良好的教学效果。该综合实验包括组织细胞的蛋白提取和定量、蛋白质的色谱分离、体外... 针对生物化学与分子生物学实验课教学中存在的问题,我们设计并实施了综合实验“肝组织乳酸脱氢酶的纯化”,取代了过去的部分独立性验证性实验,取得了良好的教学效果。该综合实验包括组织细胞的蛋白提取和定量、蛋白质的色谱分离、体外酶学实验鉴定目标组份、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析蛋白样品等内容,涵盖生物化学的常用技术方法,旨在锻炼学生用生物化学思想去解决生命科学问题。同时为了便于学生在课前课后巩固学习,更好的在分子水平理解实验细节,我们构建了该综合实验配套的虚拟仿真课程,探讨这种新的教学模式对丰富实验课的教学内容和形式、 提高实验课教学效果的应用价值。 展开更多

关键词 生物化学 分子生物学 实验教学

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浅谈医学院大学生创新实验项目人才培养 被引量：2

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作者 张善锋 盛道宇 +5 位作者 韩栋林 宋亚萱 蔺萌 朱美霖 许燕 李沛 《中国继续医学教育》 2022年第6期13-17,共5页

21世纪是科技高速发展的时代,技术发展日新月异,创新思想的重要性不言而喻,为了顺应时代需求,培养出大量创新性人才,我国多所高校设立了“国家级大学生创新创业训练计划项目”,旨在促进高校转变教育理念,改革人才培养模式,增强高校学生... 21世纪是科技高速发展的时代,技术发展日新月异,创新思想的重要性不言而喻,为了顺应时代需求,培养出大量创新性人才,我国多所高校设立了“国家级大学生创新创业训练计划项目”,旨在促进高校转变教育理念,改革人才培养模式,增强高校学生的创新能力。众所周知,医学理论知识是建立在大量的实验之上,医学院校的大学生创新项目理应处于一种高水平的状态,但现阶段我国多数医学院校大学生创新项目仍停留在研究深度低,实验水平差,学生自主性低,创新思想不足的低水平阶段。为了探究现阶段高校医学院大学生创新项目滞后的原因,同时也为了探寻医学院校创新人才培养的思路与方法,笔者通过长期对医学院大学生创新项目的实践、总结和思考,从大学生创新项目的现状、原因及举措等方面完善医学院校大学生创新项目人才培养的实施。 展开更多

关键词 医学 大学生创新实验 创新人才培养 创新思想 改革 探索 教育

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导师的指导能力与基础医学研究生培养质量关系浅析 被引量：3

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作者 臧明玺 熊承娟 《河南职工医学院学报》 2012年第4期525-527,共3页

目的在分析影响导师指导能力因素的基础上,阐述提升导师指导能力所面临的新挑战,探讨提升导师指导能力对于提高研究生培养质量的重要意义。方法结合郑州大学基础医学院在导师遴选及研究生培养工作中的体会进行分析阐述,论证提升导师指... 目的在分析影响导师指导能力因素的基础上,阐述提升导师指导能力所面临的新挑战,探讨提升导师指导能力对于提高研究生培养质量的重要意义。方法结合郑州大学基础医学院在导师遴选及研究生培养工作中的体会进行分析阐述,论证提升导师指导能力对于提高研究生培养质量的必要性。结果通过分析导师的科研水平、管理水平、责任心、基础医学的生源和质量,研究生的科研态度及整体学习氛围等,提出了提升导师指导能力的关键因素,最终对提高研究生培养质量的新途径进行了有益的探索,对河南省高校研究生培养工作提供了参考和借鉴。结论新形势下只有提高导师的遴选和考核标准,同时提高研究生毕业标准,实行淘汰制,才能加强研究生创新能力培养并进一步提高研究生培养质量。 展开更多

关键词 导师指导 研究生培养 基础医学

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以学生为中心,推进“双一流”大学医学实验中心建设 被引量：2

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作者 张善锋 李沛 《中国继续医学教育》 2021年第27期94-98,共5页

医学是一门实验性极强的学科,医学实验教学在整个医学教育中占有极其重要的地位,其水平的提高将有助于整体医学教育水平的发展。为了使郑州大学医学实验教学适应"双一流"高校发展的需要,我院积极转变医学实验教学观念,确定医... 医学是一门实验性极强的学科,医学实验教学在整个医学教育中占有极其重要的地位,其水平的提高将有助于整体医学教育水平的发展。为了使郑州大学医学实验教学适应"双一流"高校发展的需要,我院积极转变医学实验教学观念,确定医学实验教学定位,通过整合医学实验中心,构建和完善科学合理的医学实验教学体系。基础医学实验中心自整合以来,坚持"以学生为中心"理念,深化实验教学改革,构建实验教学体系,精选实验教学内容,创新实验教学方法,培养学生独立思考、解决问题、创新实践能力,全面推进适应现代医学发展的基础医学实验中心建设。 展开更多

关键词 医学实验中心 整合 实验教学 创新 教学改革 综合性实验 教育

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转染4.1N基因对人肺癌A549细胞株生物学行为的影响

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作者 武娟 刘鑫 +1 位作者 康巧珍 金戈 《肿瘤研究与临床》 CAS 2016年第9期586-589,共4页

目的：探讨4.1N在肺癌A549细胞株中的表达以及细胞转染前后增殖、侵袭、迁移等的变化。方法脂质体介导真核表达载体pEGFP-4.1N转染人肺腺癌细胞株A549，同时设空载体组及未转染组为对照，48 h后用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和... 目的：探讨4.1N在肺癌A549细胞株中的表达以及细胞转染前后增殖、侵袭、迁移等的变化。方法脂质体介导真核表达载体pEGFP-4.1N转染人肺腺癌细胞株A549，同时设空载体组及未转染组为对照，48 h后用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法检测各组细胞4.1N在mRNA和蛋白水平的表达；通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定各组细胞的增殖能力；Transwell小室模型检测各组细胞的体外侵袭、迁移能力。结果 A549转染pEGFP-4.1N 48 h后，4.1N的mRNA及蛋白表达水平均提高（P〈0.05），细胞增殖活性显著降低（P〈0.05），细胞的体外迁移及侵袭能力明显减弱（P〈0.05）。结论转染4.1N基因能显著上调人高转移肺腺癌A549细胞株中4.1N mRNA和蛋白的表达水平。4.1N基因可以抑制A549细胞株的增殖、黏附、侵袭和迁移，在肺癌转移中起重要作用，有可能成为肺癌转移的分子标志物。 展开更多

关键词 肺肿瘤 蛋白 4.1N 细胞系 A549 肿瘤转移 肿瘤侵润

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长链非编码RNA结肠癌相关转录物2在人骨肉瘤组织的表达及其对人骨肉瘤MG63细胞生物学行为的影响 被引量：3

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作者 关红亚 刘嘉 +5 位作者 王亚东 尚国伟 王义生 连鸿凯 曹巍 李月白 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期1847-1850,共4页

目的检测长链非编码RNA（lncRNA）结肠癌相关转录物2（CCAT2）在人骨肉瘤中的表达并观察其对人骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测20例人骨肉瘤患者癌组织及癌旁组织CCAT2的表达... 目的检测长链非编码RNA（lncRNA）结肠癌相关转录物2（CCAT2）在人骨肉瘤中的表达并观察其对人骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测20例人骨肉瘤患者癌组织及癌旁组织CCAT2的表达和人骨肉瘤MG63细胞与正常成骨细胞hFOB1.19的CCAT2表达。合成针对CCAT2的特异性小干扰RNA（si-CCAT2），通过脂质体介导，将其转染入MG63细胞，实验分为空白对照组、小干扰RNA（siRNA）-NC组、siRNA-1组和siRNA-2组，后利用RT-qPCR技术检测4组细胞中CCAT2的表达量，验证siRNA沉默效果；细胞计数试剂盒（CCK-8）、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的增殖、侵袭和凋亡能力。结果CCAT2在人骨肉瘤组织和正常组织中的相对表达水平为2.448±1.013和1.551±0.769，两者差异有统计学意义（t＝3.295，P＝0.002）；在MG63细胞和hFOB1.19细胞的相对表达水平为2.357±0.157和1.329±0.498，两者差异有统计学意义（t＝2.566，P＝0.020）。沉默细胞中CCAT2后，与NC组（1.064±0.092）和空白对照组（1.076±0.135）比较，siRNA-1和siRNA-2组CCAT2表达量（0.499±0.030、0.519±0.097）明显下降（tsiRNA-1组＝7.248，PsiRNA-1组＝0.002；tsiRNA-2组＝5.814，PsiRNA-2组＝0.004）。降低CCAT2的表达后，MG63细胞增殖活性明显下降，siRNA-1组和siRNA-2组平均细胞侵袭个数为（40.00±2.00）、（38.67±2.08）个，较NC组[（65.00±3.61）个]和空白对照组[（65.33±3.51）个]明显减少（tsiRNA-1组＝10.857，PsiRNA-1组＝0.001；tsiRNA-2组＝11.314，PsiRNA-2组＝0.000）；细胞凋亡能力[（44.76±2.49）%、（46.53±2.66）%]较NC组[（5.01±0.20）%]和空白组[（5.43±0.47）%]明显增加（tsiRNA-1组＝26.832，PsiRNA-1组＝0.000；tsiRNA-2组＝26.370，PsiRNA-2组＝0.000）。结论lncRNA CCAT2在人骨肉瘤组织和细胞中表达上调，抑制CCAT2的表达可显著抑制MG63细胞的增殖和侵袭，促进细胞的凋亡。 展开更多

关键词 长链非编码RNA 骨肉瘤 结肠癌相关转录物2 增殖 侵袭

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叶黄素对乳腺癌细胞活力的影响 被引量：8

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作者 常景芝 王琛 +6 位作者 李宜川 刘青 沈永杰 芦琨 郭亚莉 张善锋 王明臣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期930-933,共4页

目的:探究叶黄素对人乳腺癌T47D细胞活力的影响及其可能的作用机制。方法:将人乳腺癌T47D细胞随机分为对照组和叶黄素(浓度分别为6.25、12.5、25和50 mg/L)干预组,采用MTT法检测叶黄素对T47D细胞活力的影响;RT-qPCR检测核因子E2相关因子... 目的:探究叶黄素对人乳腺癌T47D细胞活力的影响及其可能的作用机制。方法:将人乳腺癌T47D细胞随机分为对照组和叶黄素(浓度分别为6.25、12.5、25和50 mg/L)干预组,采用MTT法检测叶黄素对T47D细胞活力的影响;RT-qPCR检测核因子E2相关因子2(Nrf2),谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)及超氧化物歧化酶2(SOD2)的mRNA水平;荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;Western blot检测Nrf2和p65的蛋白表达。结果:MTT结果显示叶黄素抑制人乳腺癌T47D细胞的活力,且呈时间和剂量依赖关系。RT-q PCR结果显示各浓度叶黄素干预组细胞中Nrf2,GPx1及SOD2的mRNA水平均较对照组升高(P<0.05);且叶黄素干预组细胞内ROS水平显著下降(P<0.01)。Western blot结果显示,叶黄素干预48 h后,Nrf2蛋白表达增加(P<0.05),p65蛋白表达降低(P<0.05),呈剂量依赖关系。结论 :叶黄素对乳腺癌细胞活力的抑制作用可能与上调Nrf2的表达、诱导抗氧化酶GPx1及SOD2 mRNA表达和降低氧化应激水平,进而阻断NF-κB信号通路有关。 展开更多

关键词 叶黄素 乳腺癌 细胞活力 NF-ΚB信号通路

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靶向阻断LRP提高肺腺癌细胞对紫杉醇的敏感性 被引量：4

8

作者 张善锋 王志举 +2 位作者 崔景彬 张艳杰 张文瑾 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第3期370-374,共5页

目的利用小干扰RNA(siRNA)技术沉默肺腺癌细胞肺耐药相关蛋白基因(LRP),探讨其对肺腺癌紫杉醇耐药株(A549/TXL20)紫杉醇(TXL)敏感性的影响。方法逐步增加药物浓度法建立A549紫杉醇耐药细胞株(A549/TXL20),用小干扰RNA技术沉默LRP在A549/... 目的利用小干扰RNA(siRNA)技术沉默肺腺癌细胞肺耐药相关蛋白基因(LRP),探讨其对肺腺癌紫杉醇耐药株(A549/TXL20)紫杉醇(TXL)敏感性的影响。方法逐步增加药物浓度法建立A549紫杉醇耐药细胞株(A549/TXL20),用小干扰RNA技术沉默LRP在A549/TXL20细胞中的表达,以MTT法检测紫杉醇对A549/TXL20细胞的半数抑制浓度(IC50);以q PCR检测细胞中LRP mRNA的表达,Western blot检测细胞中LRP蛋白的水平,裸鼠腋窝皮下注射转染后的A549/TXL20细胞,建立裸鼠移植瘤模型,观察LRP靶向siRNA对人肺腺癌耐药细胞株A549/TXL20移植瘤耐药的影响。结果肺腺癌紫杉醇耐药株(A549/TXL20)对紫杉醇的敏感性明显增强(P<0.01),A549/TXL20细胞中LRP mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.01);siRNA沉默A549/TXL20细胞LRP基因后,与空白组和空质粒组比较,LRP mRNA及蛋白表达均被抑制(P<0.01);小干扰RNA可提高荷瘤裸鼠对紫杉醇的敏感性。结论 siRNA可有效沉默A549/TXL20肺腺癌耐药细胞株LRP基因的表达,提高耐药的肺腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。 展开更多

关键词 人肺腺癌细胞株 紫杉醇 肺耐药相关蛋白 RNA干扰

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番茄红素对宫颈癌HeLa细胞bax、bcl-2基因表达的影响 被引量：10

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作者 毛红丽 张善锋 王明臣 《中国现代药物应用》 2008年第19期6-8,共3页

目的研究番茄红素对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响。方法不同浓度番茄红素分别处理HeLa细胞24～72h后,MTT法检测细胞的生长活性,RT-PCR方法检测凋亡相关基因bax,bcl-2的表达。结果实验结... 目的研究番茄红素对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响。方法不同浓度番茄红素分别处理HeLa细胞24～72h后,MTT法检测细胞的生长活性,RT-PCR方法检测凋亡相关基因bax,bcl-2的表达。结果实验结果随着番茄红素浓度的增加,bax基因mRNA表达增加而bcl-2的mRNA表达减少。结论番茄红素对HeLa细胞的生长具有抑制作用,可促进宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,bcl-2基因的减少与bax基因表达增加可能是HeLa细胞凋亡的机制之一。 展开更多

关键词 番茄红素 Heh细胞 凋亡相关蛋白

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葛根素抑制酒精导致细胞成脂分化研究的初步报告 被引量：3

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作者 杨春喜 李月白 王义生 《中原医刊》 2007年第6期11-13,共3页

目的探讨葛根素对酒精诱导人骨髓间充质细胞（MSCs）成脂分化的抑制作用。方法采用梯度离心法分离、培养人MSCs。取传代细胞，随机分为三组：对照组、模型组（酒精组）和实验组（酒精＋葛根素）。检测细胞内碱性磷酸酶（AIP）活性；油红... 目的探讨葛根素对酒精诱导人骨髓间充质细胞（MSCs）成脂分化的抑制作用。方法采用梯度离心法分离、培养人MSCs。取传代细胞，随机分为三组：对照组、模型组（酒精组）和实验组（酒精＋葛根素）。检测细胞内碱性磷酸酶（AIP）活性；油红“0”染色，脂肪细胞计数。结果分组干预10d，模型组细胞内ALP活性[（27±10）U／100mg蛋白]明显降低，显著低于实验组[（40±10）U／100mg蛋白]和对照组[（39±9）U／100mg蛋白]，P〈0．05。实验组细胞内AIJP活性，与对照组比较差异无统计学意义，P〉0.05。干预21d，模型组脂肪细胞最多，实验组较模型组明显减少（P〈0．05），对照组几乎无脂肪细胞出现。结论葛根素能抑制酒精诱导成人MSCs向脂肪细胞分化，保持其成骨分化能力。 展开更多

关键词 葛根素 防治 酒精 骨病 成脂分化

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神经肽基因转染干细胞联合骨移植治疗兔股骨头坏死的生物力学变化

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作者 王义生 李劲峰 +3 位作者 王亚寒 王秀利 荆凯 李月白 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2731-2733,共3页

目的观察人降钙素基因相关肽α（hCGRPα）转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）联合自体骨移植治疗模型兔股骨头坏死（ONFH）的生物力学变化。方法采用液氮冷冻法成功制作出家兔股骨头坏死动物模型。将48只ONFH模型动物随机分为3组。hCGRPα... 目的观察人降钙素基因相关肽α（hCGRPα）转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）联合自体骨移植治疗模型兔股骨头坏死（ONFH）的生物力学变化。方法采用液氮冷冻法成功制作出家兔股骨头坏死动物模型。将48只ONFH模型动物随机分为3组。hCGRPα基因转染BMSCs组（A组）：将hCGRPα基因转染BMSCs联合自体骨移植于股骨头内。BMSCs组（B组）：植入BMSCs（空质粒）联合自体骨移植。无关序列组（c组）：植入干细胞为无关基因BMSCs并联合自体骨移植。于实验第3、6个月末分批处死兔，观察兔股骨头的生物力学变化。结果治疗术后3个月时，A、B、C组中手术治疗侧股骨头软骨下骨的最大压缩强度与弹性模量分别为（29．13±1．95）与（59．61±2．18）、（24．63±1．35）与（48．87±2．15）、（25．05±1．34）与（50．13±2．28）mPa，股骨头松质骨的最大压缩强度与弹性模量分别为（16．41±1．13）与（24．11±2．32）、（11．43±1．55）与（17．63±2．45）、（12．51±1．85）与（18．22±2．32）mPa，A组均高于B、C组（P〈0．05）。A组的股骨头生物力学强度恢复最好，与正常侧比较差异无统计学意义（P〉0．05），而B、C组与正常侧比较差异有统计学意义（P〈0．05）。术后6个月时，B、C组与A组股骨头生物力学数据恢复水平趋于相同，组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论hCGRPα转染BMSCs联合自体骨移植治疗模型兔股骨头坏死，能够显著促进成骨和骨组织重建，有效恢复股骨头的正常生物力学性能。 展开更多

关键词 降钙素基因相关肽 骨髓间充质干细胞 骨移植 股骨头坏死 生物力学兔

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1-脱氧野尻霉素减轻2型糖尿病小鼠的肝纤维化 被引量：6

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作者 赫小乔 孙志远 +1 位作者 马凯元 梅英武 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1342-1349,共8页

目的探讨1-脱氧野霉素(DNJ)对糖尿病所致的肝纤维化的改善作用及其内在机制。方法建立2型糖尿病小鼠(T2D)模型,随机分为3组,5只/组:(1)对照组:腹膜内注射柠檬酸盐缓冲液(50 mg/kg);(2)糖尿病组(DM):采用高脂饮食饲养8周,静脉注射STZ(50 ... 目的探讨1-脱氧野霉素(DNJ)对糖尿病所致的肝纤维化的改善作用及其内在机制。方法建立2型糖尿病小鼠(T2D)模型,随机分为3组,5只/组:(1)对照组:腹膜内注射柠檬酸盐缓冲液(50 mg/kg);(2)糖尿病组(DM):采用高脂饮食饲养8周,静脉注射STZ(50 mg/kg),持续3 d,空腹血糖浓度≥16.7 mmol/L;(3)DNJ组:给予高脂饮食和10%DNJ(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))饮水,持续8周。测定体质量(BW)、血糖、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、超氧化物歧化酶(SOD)。制作肝组织切片行苏木精伊红染色(H&E)和天狼星红染色。此外,检测肝组织中胶原蛋白的溶解度。应用实时定量PCR法检测MCP-1、TNF-α、IL-1β、TGF-β1mRNA相对表达水平。Western-blot法测定α-SMA和Collagen2(ColA2)蛋白水平。将L929小鼠成纤维细胞用DNJ(10μg/mL)或PBS预处理30 min,然后在含高浓度葡萄糖的MEM培养基培养24 h。使用二氢乙锭(DHE)染色测定ROS的产生。结果DNJ可显著降低糖尿病小鼠血清中的血糖、TC、TG和SOD水平(P<0.05),并显著减轻肝组织胶原交联程度,尤其以酶溶型胶原(PSC)以及总胶原含量的减低为主要表现(P<0.05)。同时,DNJ显著降低由糖尿病引起的促炎因子以及纤维化相关细胞因子的高表达(P<0.05)。用DNJ预处理后培养的L929细胞在DHE染色中显示出较低的红色荧光强度(P<0.05)。结论DNJ作为一种潜在的天然功能性营养物质,可以通过降血糖,抗炎以及抗氧化作用减轻T2D诱导的肝纤维化。 展开更多

关键词 二型糖尿病 肝纤维化 1-脱氧野尻霉素 胶原交联 抗氧化应激

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METTL3 N6-甲基腺嘌呤修饰circSAFB2调控骨肉瘤细胞侵袭和凋亡

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作者 李劲峰 李炳秋 +6 位作者 纪元元 时利军 宋萌晨 王义生 李月白 毛克亚 刘宏建 《中华实验外科杂志》 CAS 2024年第8期1794-1797,共4页

目的观察甲基转移酶(METTL3)介导N6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰修饰circSAFB2对骨肉瘤细胞侵袭和凋亡的影响。方法选取经病理确诊的骨肉瘤标本16例及骨肉瘤细胞株MG63, qRT-PCR检测骨肉瘤组织与MG63细胞中METTL3 mRNA和circSAFB2的表达水平。... 目的观察甲基转移酶(METTL3)介导N6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰修饰circSAFB2对骨肉瘤细胞侵袭和凋亡的影响。方法选取经病理确诊的骨肉瘤标本16例及骨肉瘤细胞株MG63, qRT-PCR检测骨肉瘤组织与MG63细胞中METTL3 mRNA和circSAFB2的表达水平。使用SRAMP prediction server在线预测软件对circSAFB2中m6A甲基化位点进行预测, 并通过m6A MeRIP-qPCR对骨肉瘤组织和MG63细胞中circSAFB2存在m6A甲基化修饰进行验证。应用MeRIP-qPCR检测骨肉瘤组织和MG63细胞中circSAFB2 m6A甲基化修饰水平。分别将METTL3 siRNA重组慢病毒、METTL3 NC重组慢病毒感染骨肉瘤细胞后, 通过放线菌素D、Transwell和流式细胞仪分别检测各组细胞RNA稳定性、侵袭和凋亡, 两样本两组间比较用t检验;多组间比较采用单因素方差分析、组间比较采用LSD法。结果 METTL3 mRNA(2.354±0.224)和circSAFB2(2.072±0.264)在骨肉瘤组织中的表达量高于癌旁组织(1.000±0.089、1.000±0.104, P<0.05)。骨肉瘤细胞系MG63中METTL3(2.429±0.211)和circSAFB2 mRNA(2.271±0.214)表达量高于正常人成骨细胞(1.000±0.100、1.000±0.136, P<0.05)。SRAMP在线m6A甲基化位点预测结果显示, circSAFB2的115和234位存在m6A甲基化修饰位点;骨肉瘤组织和MG63细胞中, m6A抗体免疫共沉淀的circSAFB2丰度(18.397±1.627、23.338±2.225)均显著高于IgG抗体(1.000±0.130、1.000±0.060, P<0.01), 证实circSAFB2上存在m6A甲基化修饰。MeRIP-qPCR检测结果显示, 骨肉瘤组织circSAFB2 m6A RNA甲基化修饰水平(3.264±0.217)高于癌旁组织(1.000±0.070, P<0.05);MG63细胞中circSAFB2 m6A RNA甲基化修饰水平(3.379±0.205)高于正常人成骨细胞(1.000±0.064, P<0.05)。转染METTL3 siRNA重组慢病毒的MG63细胞(si-METTL3组), 放线菌素D处理6 h和12 h, circSAFB2表达水平(72.570±4.809、52.195±3.081)低于转染METTL3 NC重组慢病毒组(si-NC组)(87.540±5.539、71.131±4.320, P<0.05)。si-METTL3组侵袭数量(54.333±6.429)低于si-NC组(124.667±13.577, P<0.05);凋亡率[(25.105±1.638)%]高于si-NC组[(7.241±0.533)%, P<0.05]。结论骨肉瘤组织细胞中METTL3可通过m6A修饰circSAFB2调控骨肉瘤细胞的侵袭和凋亡。 展开更多

关键词 m6A甲基化 骨肉瘤 凋亡 侵袭

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酒精性骨坏死发病机制和葛根素对其的预防作用 被引量：10

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作者 王义生 李月白 +2 位作者 殷力 李杰 熊腾滨 《中华显微外科杂志》 CSCD 北大核心 2006年第3期209-212,i0005,共5页

目的探讨酒精性骨坏死发病机制和葛根素的预防作用。方法分离培养小鼠骨髓基质细胞(MSCs),随饥分为3组：A组(酒精组),给予酒精0、0．03、0．09、0．15 mol/L；B组(葛根素组),酒精0．09 mol/L和葛根素终浓度为0．01 mg/ml；C组(对照组),... 目的探讨酒精性骨坏死发病机制和葛根素的预防作用。方法分离培养小鼠骨髓基质细胞(MSCs),随饥分为3组：A组(酒精组),给予酒精0、0．03、0．09、0．15 mol/L；B组(葛根素组),酒精0．09 mol/L和葛根素终浓度为0．01 mg/ml；C组(对照组),无酒精与葛根素。苏丹Ⅲ染色,光镜下脂肪细胞计数；测定细胞内甘油三酯含量、碱性磷酸酶活性和细胞培养液中骨钙素含量。采用完整细胞斑点印迹分子杂交方法检测A组和C组细胞中422(aP2)mRNA和Ⅰ型胶原mRNA的表达。采用RT-PCR技术检测3组细胞中PPARγmRNA和osteocalcin mRNA的表达。结果酒精处理细胞后21 d,MSCs分化为脂肪细胞的数量随酒精作用时间延长及浓度增大而增多；细胞内甘油三酯含量明显增高,ALP活性降低,骨钙素含量显著减少。0．09 mol/L酒精作用细胞6 d,A组中422(aP2)mRNA表达含量显著增高,Ⅰ型胶原mRNA表达含量明显降低。B组和C组细胞中PPARγmRNA表达明显低于A组,osteocalcin mRNA表达明显高于A组,而B组与C组间差异无统汁学意义(P＞0．05)。结论酒精能诱导MSCs大量成脂分化,减少其成骨分化,这可能与酒精性骨坏死的发生机制有关。葛根素能够对抗酒精诱导MSCs成脂分化,可能预防骨坏死。 展开更多

关键词 酒精 骨坏死 骨钙素 胶原 骨髓基质细胞 葛根素

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siRNA腺病毒载体对兔骨髓基质细胞成脂分化的干扰效应 被引量：8

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作者 王义生 王少华 +3 位作者 李月白 赵国强 刘鸣 王小刚 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期519-521,F0004,共4页

目的观察靶向过氧化物酶体增殖子活化受体-1（PPARy）基因siRNA腺病毒载体阻断乙醇诱导兔骨髓基质细胞（MSCs）的成脂分化。方法培养兔MSCs随机分为7组：N：对照组，M：模型组，CO：感染空载体组，C1：感染无关siRNA组，S1、S2、S3：干... 目的观察靶向过氧化物酶体增殖子活化受体-1（PPARy）基因siRNA腺病毒载体阻断乙醇诱导兔骨髓基质细胞（MSCs）的成脂分化。方法培养兔MSCs随机分为7组：N：对照组，M：模型组，CO：感染空载体组，C1：感染无关siRNA组，S1、S2、S3：干扰1、2、3组。将重组腺病毒载体转染细胞，检测MSCs内PPAR叫mRNA、osteocalcinmRNA、PPARγ蛋白表达、甘油三酯、ALP活性和培养液骨钙素含量，并计数脂肪细胞。结果N、M、CO、C1组PPARγmRNA和osteocalcinmR—NA表达值分别为（0．39±0．02）、（0．75±0．03）、（0．74±0．03）、（0．73±0．02）和（1．09±0．19）、（0．50±0．10）、（0．46±0．12）、（0．49±0．13），M、CO、C1组脂肪细胞多，甘油三酯高，ALP活性与骨钙素量均低。S1、S2、S3组PPARγmRNA和osteocalcinmRNA表达值分别为（0．28±0．03）、（0．30±0．03）、（0．31±0．01）和（0．92±0．09）、（0．87±0．32）、（0．93±0．25），脂肪细胞数、甘油三酯量、ALP活性值与骨钙素含量均接近正常，与M、CO、C1组间差异有统计学意义（P〈0．05），与N组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论该腺病毒载体能阻断乙醇诱导的MSCs成脂分化。 展开更多

关键词 RNA干扰 过氧化物酶体增殖子活化受体1 腺病毒载体 骨髓基质细胞 乙醇

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葛根素对乙醇性股骨头坏死的预防作用 被引量：10

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作者 王义生 刘沛霖 +1 位作者 殷力 李月白 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期479-481,共3页

目的探讨葛根素对小鼠乙醇性ONFH的预防作用。方法4周龄小鼠随机分为3组,A组给予白酒,B组给予白酒和葛根素,C组给水。4、6、8、10个月分批检测动物血清学、肝脏和股骨头组织学、基因表达等变化。结果实验6个月时:(1)3组血清CHO、TG、AL... 目的探讨葛根素对小鼠乙醇性ONFH的预防作用。方法4周龄小鼠随机分为3组,A组给予白酒,B组给予白酒和葛根素,C组给水。4、6、8、10个月分批检测动物血清学、肝脏和股骨头组织学、基因表达等变化。结果实验6个月时:(1)3组血清CHO、TG、ALP分别为:(6.39±0.49)、(3.19±0.11)、(2.98±0.36)mmol/L,(1.01±0.15)、(0.71±0.13)、(0.68±0.22)mmol/L,(161.6±32.44)、(196.5±31.52)、(203.4+22.83)IU。(2)A组出现脂肪肝,股骨头骨小梁变细稀疏,髓内造血组织减少,脂肪与空骨陷窝明显增多。B组股骨头内脂肪稍增加,空骨陷窝比正常C组少。3组最大脂肪细胞平均直径和空骨陷窝计数分别为(40.02±3.25)、(39.15±3.67)、(38.51±3.09)μm,(13.5±1.6)、(9.8±2.2)、(10.3±2.7)%。(3)A组中PPARγmRNA呈高表达,Osteocalcin mRNA呈低表达。B组和C组中PPARγmRNA呈低表达,Os- teocalcin mRNA呈高表达。始自6个月,A组各数据和B、C组间差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),B、C组差异无统计学意义(P>0.05)。结论葛根素能够预防小鼠乙醇性ONFH的发生。 展开更多

关键词 乙醇 葛根素 预防 骨坏死

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激素对人骨髓间充质干细胞凋亡及神经肽受体基因表达的影响 被引量：6

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作者 王义生 左松 +2 位作者 荆凯 张毅 李月白 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期602-604,共3页

目的观察在激素诱导下，人骨髓问充质干细胞（hBMSCs）内降钙素基因相关肽受体（CGRPR）、P物质受体（SPR）、过氧化物酶体增殖子活化受体吖（PPARy）、成骨转录因子Runx2以及B淋巴细胞／白血病-2（bcl．2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3... 目的观察在激素诱导下，人骨髓问充质干细胞（hBMSCs）内降钙素基因相关肽受体（CGRPR）、P物质受体（SPR）、过氧化物酶体增殖子活化受体吖（PPARy）、成骨转录因子Runx2以及B淋巴细胞／白血病-2（bcl．2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）等基因表达的变化。方法密度梯度离心和贴壁培养获得hBMSCs，流式细胞仪鉴定后，将传代培养的第3代细胞随机分为两组，实验组加入浓度为1×10^-7 mmol／L的地塞米松，对照组正常培养。于诱导后的第7天，实时定量-聚合酶链反应（RT．qPCR）分别测定bcl-2mRNA、Caspase-3mRNA、CGRPRmRNA、SPRmRNA、Runx2mRNA以及PPARymRNA的表达。结果分离培养的hBMSCs呈均匀-致的长梭形，排列成旋涡状或放射状。实验组Caspase-3mRNA、PPA聊mRNA较对照组明显升高，^2-△△C1值分别为5．99±2．00、6．93±0．70；而bcl-2tuRNA、CGRPRmRNA、SPRmRNA、Runx2mRNA较对照组明显降低，2^-△△C1值分别为0．20±0．5l、o．Il-t-O．02、0．28±0．08、0．13±0．2l，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论激素能够上调hBMSCs中凋亡基因、成脂基因表达，下调抗凋亡基因、神经肽因子、成骨基因表达，促进细胞凋亡、成脂分化，抑制其成骨分化。 展开更多

关键词 人骨髓间充质干细胞 激素 神经肽 脱噬作用

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降钙素基因相关肽基因转染干细胞移植在兔股骨头坏死模型中的成骨基因表达 被引量：4

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作者 王义生 王亚寒 +3 位作者 李劲峰 王秀利 荆凯 李月白 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期2460-2462,共3页

目的 观察人降钙素基因相关肽α（hCGRPα）转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）联合自体骨移植在兔股骨头坏死（ONFH）模型中成骨基因的表达.方法 采用液氮冷冻法成功制作出家兔股骨头坏死兔.将72只ONFH模型兔随机分为3组.hCGRPα基因转染BM... 目的 观察人降钙素基因相关肽α（hCGRPα）转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）联合自体骨移植在兔股骨头坏死（ONFH）模型中成骨基因的表达.方法 采用液氮冷冻法成功制作出家兔股骨头坏死兔.将72只ONFH模型兔随机分为3组.hCGRPα基因转染BMSCs组（A组）：将hCGRPα基因转染BMSCs移植于股骨头内;BMSCs组（B组）：植入BMSCs;无关序列组（C组）：植入干细胞为无关基因BMSCs.3组中均同时将自体骨植入股骨头.于实验第1个月末观察兔股骨头的细胞内hCGRPα和成骨基因骨钙素的表达.结果 将hCGRPα基因转染BMSCs植入股骨头1个月时,A、B、C组中hCGRPα mRNA与其蛋白的相对表达量分别为0.84±0.06、0.31±0.02、0.29±0.02与0.76±0.07、0.21±0.02、0.18±0.02.3组中骨钙素mRNA与其蛋白的相对表达量分别为0.76±0.07、0.39±0.04、0.29±0.04与0.68±0.06、0.33±0.03、0.31±0.03.A组股骨头细胞中hCGRPα基因和骨钙素基因均呈高表达,明显高于B组和C组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 hCGRPα修饰BMSCs植入ONFH动物模型股骨头中,可促进细胞中成骨因子hCGRPα和骨钙素基因的表达. 展开更多

关键词 降钙素基因相关肽 骨髓间充质干细胞 兔 股骨头坏死 成骨基因

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激素对人骨髓间充质干细胞神经肽受体mRNA表达的影响 被引量：5

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作者 王义生 张战峰 +2 位作者 李月白 赵国强 朱绍阳 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期933-936,共4页

目的观察激素对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）内神经肽受体降钙素基因相关肽受体（CGRPR）、P物质受体（SPR）及过氧化物酶体增殖子活化受体1（PPA脚）、成骨转录因子Runx2等基因表达的影响。方法密度梯度离心联合贴壁分选法体外分离培... 目的观察激素对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）内神经肽受体降钙素基因相关肽受体（CGRPR）、P物质受体（SPR）及过氧化物酶体增殖子活化受体1（PPA脚）、成骨转录因子Runx2等基因表达的影响。方法密度梯度离心联合贴壁分选法体外分离培养hBMSCs，流式细胞仪鉴定后传至第3代，随机分为两组，实验组细胞给予1×10^-7mol／L地塞米松干预9d，对照组正常培养。观察细胞形态、生长趋势，油红O染色脂肪细胞，实时定量-聚合酶链反应（RT—qPCR）分析mRNA表达的变化。结果分离培养的贴壁细胞呈纤维状、漩涡样生长，CD29、CD44表达率为（91．4±0．7）％、（93．8±0．5）％，CD34表达率为（2．7±0．8）％。实验组细胞生长缓慢、出现大量脂肪细胞，对照组细胞增殖旺盛、未见脂肪细胞。RT—qPCR发现实验组CGRPRmRNA、SPRmRNA、Runx2mRNA的表达显著降低，2△△^Cr分别为0．10±0．03、0．16±0．04、0．23±0．05（P均〈0．01）。实验组PPARlmRNA表达量2△△^Cr是对照组的（5．08±3．37）倍，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论激素能够诱导hBMSCs成脂分化，下调细胞中CGRPRmRNA、SPRmRNA、Runx2mRNA表达，抑制细胞成骨分化与生长增殖，使骨修复能力不足，这可能与激素性骨坏死的发生机制有关。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 激素 神经肽 降钙素基因相关肽受体 P物质受体

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重组人降钙素基因相关肽逆转录病毒对人骨髓间充质干细胞增殖与成骨活性的影响 被引量：5

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作者 王义生 王宸 +4 位作者 王亚寒 孙俊魁 李劲峰 赵国强 李月白 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期2367-2370,共4页

目的 将重组人降钙素基因相关肽α（hCGRPα）逆转录病毒载体（pLNCX2-hCGRPα）感染人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）,观察其对hBMSCs增殖与成骨活性的影响.方法 采用Ficoll淋巴细胞分离液梯度离心法获得自体原代hBMSCs并传代保存.将重组... 目的 将重组人降钙素基因相关肽α（hCGRPα）逆转录病毒载体（pLNCX2-hCGRPα）感染人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）,观察其对hBMSCs增殖与成骨活性的影响.方法 采用Ficoll淋巴细胞分离液梯度离心法获得自体原代hBMSCs并传代保存.将重组逆转录病毒pLNCX2-hCGRPα感染第2代hBMSCs.细胞分3组：（1）实验组：pLNCX2-hCGRPα感染hBMSCs.（2）空载体组：空载体pLNCX2感染hBMSCs；（3）正常对照组：正常培养hBMSCs,不给予特殊处理.实验7d采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法检测细胞内hCGRPα基因mRNA与蛋白表达,1 ～7d采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性,14 d检测细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性值与培养液骨钙素含量,7d检测细胞层粘连蛋白（LN）.结果 实验组细胞中表达hCGRPα mRNA,而空载体组和正常对照组细胞不表达.与空载体组和正常对照组比较,实验组细胞表现出较高增殖率（P＜0.05）.实验组细胞ALP活性值、LN、培养液骨钙素含量分别为（119.33±11.95） U/100 mg蛋白、（12.11±1.56） μg/L、（1.123 ±0.115） μg/L,均高于空载体组[（66.16±6.82） U/100 mg蛋白、（7.32±0.98）μg/L、（0.602 ±0.097） μg/L和正常对照组[（67.73±7.31） U/100 mg蛋白、（6.46±1.41） μg/L、（0.498±0.109） μg/L],差异均有统计学意义（P＜0.05）,而空载体组和正常对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 重组hCGRPα逆转录病毒成功转入hBMSCs,并表达hCGRPα基因而促进hBMSCs增殖和增强细胞的成骨活性. 展开更多

关键词 重组逆转录病毒 降钙素基因相关肽 骨髓间充质干细胞 细胞增殖 成骨活性

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