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DNA甲基转移酶1的表达对小鼠精原干细胞分化的影响
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作者 李娜 苗聪秀 +3 位作者 毕慧玲 苗卉 李丹 李敏 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期395-401,共7页
目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达对小鼠精原干细胞(SSC)分化的影响。方法:采用两步酶消化法从1周龄BALB/c雄性小鼠睾丸组织中分离获取SSC,将DNMT1-siRNA、siRNA阴性对照(NC-siRNA)转染入分离纯化后第三代SSC,分别命名为DNMT1-Si组... 目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达对小鼠精原干细胞(SSC)分化的影响。方法:采用两步酶消化法从1周龄BALB/c雄性小鼠睾丸组织中分离获取SSC,将DNMT1-siRNA、siRNA阴性对照(NC-siRNA)转染入分离纯化后第三代SSC,分别命名为DNMT1-Si组、DNMT1-NC组,另取未转染细胞命名为对照组;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western印迹检测转染24 h后各组DNMT1 mRNA和蛋白表达水平,并检测转染后细胞基因组甲基化水平。干细胞生长因子诱导SSC向精母细胞方向分化,采用RT-qPCR法和Western印迹检测诱导分化48 h生殖细胞增殖相关蛋白(Nanos2)、早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)、维甲酸刺激蛋白(Stra8)mRNA和蛋白表达水平。结果:转染24 h后,DNMT1-Si组DNMT1 mRNA(0.13±0.03)和蛋白相对表达量(0.44±0.08)、DNA甲基化水平[(14.16±2.62)%]均低于对照组[0.94±0.08、1.21±0.11、(27.15±3.54)%]和DNMT1-NC组[0.93±0.09、1.19±0.10、(26.85±3.55)%,P<0.05],对照组与DNMT1-NC组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。分化48 h后,与对照组和DNMT1-NC组比较,DNMT1-Si组Nanos2、PLZF mRNA和蛋白相对表达量降低,Stra8 mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05);对照组与DNMT1-NC组Nanos2、PLZF、Stra8 mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低DNMT1可促进小鼠SSC向精母细胞方向分化,其机制可能与降低基因组甲基化水平,抑制Nanos2、PLZF表达,促进Stra8表达有关。 展开更多
关键词 DNA甲基转移酶1 精原干细胞 分化 小鼠
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