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山羊胎儿不同发育时期组织结构特点 被引量：1
1
作者 郑琪 睢梦华 +8 位作者 朱露 吴昊 敬敬 储明星 刘勇 李文雍 张子军 张运海 凌英会 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第12期19-27,共9页
【目的】获得安徽白山羊出生前后不同时期骨骼肌、肾脏、肝脏及腿骨组织结构的发育特点,以补充山羊组织系统发育资料,丰富山羊胚胎学相关内容。【方法】安徽白山羊在同期发情及配种后,采集胚龄65 d(F65)、120 d(F120)、135 d(F135)以及... 【目的】获得安徽白山羊出生前后不同时期骨骼肌、肾脏、肝脏及腿骨组织结构的发育特点,以补充山羊组织系统发育资料,丰富山羊胚胎学相关内容。【方法】安徽白山羊在同期发情及配种后,采集胚龄65 d(F65)、120 d(F120)、135 d(F135)以及出生24 h(B0)胎羊和规范饲喂90 d(B90)羔羊的骨骼肌、肾脏、肝脏及腿骨,进行石蜡切片及HE染色,运用常规电镜技术对安徽白山羊不同发育阶段各组织结构进行观察。【结果】除F135与B0外的其余时期,骨骼肌同一部位、不同发育阶段的肌纤维细胞直径以及所有时期肌纤维细胞数量和密度的变化均差异显著(P<0.05);在F120时期,初级肌纤维已完全转变为次级肌纤维。肾脏质量在除F120到F135时期外的其他时期均差异显著(P<0.05),长度在所有发育时期均差异显著(P<0.05),宽度则在除F120到F135以及F135到B0时期外的其他发育时期差异显著(P<0.05)。F65时期肾脏远曲小管和近曲小管有较为明显的区别,在F135时期具有较为清晰的肾小囊,于F65到B0时期完成了肾小体的发育。肝脏质量也在除F120到F135时期外的其他发育时期均有显著差异(P<0.05),长度在F65到F120时期及B0到B90时期变化显著(P<0.05),厚度则是在除F65到F120时期和F120到F135时期外的其他时期间存在显著差异(P<0.05)。在F65时期肝脏合胞体较多,至F135肝小叶基本形成,B0时期巨核细胞基本消失,B90时期肝细胞呈颗粒及泡沫状。股骨质量与胫骨质量均以B90时期显著高于其他时期(P<0.05),胫骨和股骨长度在每个发育阶段均存在显著差异(P<0.05)。在F120时期已经出现类似骨单位的结构,至B90时期已形成完整的骨单位。【结论】依据安徽白山羊骨骼肌肌细胞的直径、数量及密度推测,安徽白山羊肌纤维细胞从增殖到膨大的关键转折期处于胎龄65~120 d。 展开更多
关键词 安徽白山羊 胚胎发育 骨骼肌 肌纤维细胞 细胞发育
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山羊FST慢病毒载体构建及其对卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响 被引量：6
2
作者 凌英会 朱露 +5 位作者 吴昊 陈青 权青 刘勇 李文雍 张运海 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1690-1698,共9页
研究卵泡抑素(FST)对山羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响。采集山羊卵巢组织、分离培养原代卵巢卵泡颗粒细胞,RT-PCR克隆山羊FST,设计shRNA片段,构建慢病毒过表达载体和干扰载体,感染原代卵巢卵泡颗粒细胞,qPCR技术检测过表达与干扰的效果,... 研究卵泡抑素(FST)对山羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响。采集山羊卵巢组织、分离培养原代卵巢卵泡颗粒细胞,RT-PCR克隆山羊FST,设计shRNA片段,构建慢病毒过表达载体和干扰载体,感染原代卵巢卵泡颗粒细胞,qPCR技术检测过表达与干扰的效果, CCK-8检测细胞的增殖效果。结果显示:分离培养的山羊卵巢卵泡颗粒细胞经促卵泡素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,阳性率为95%;慢病毒感染颗粒细胞时荧光蛋白的表达占比80%;qPCR验证FST过表达和干扰慢病毒载体的效果均显著(P<0.05);过表达FST显著(P<0.05)抑制卵巢卵泡颗粒细胞的增殖,干扰FST显著(P<0.05)促进卵巢卵泡颗粒细胞增殖。笔者分离出山羊卵巢卵泡颗粒细胞,成功构建FST过表达和干扰两种慢病毒载体,感染结果表明FST能够抑制山羊卵巢卵泡颗粒细胞的增殖,为进一步研究FST在哺乳动物卵泡发育调控中的作用及其机制提供了基础资料。 展开更多
关键词 FST基因 卵巢卵泡颗粒细胞 慢病毒载体 SHRNA 过表达载体 细胞增殖
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植物AP2/ERF转录因子及其在非生物胁迫应答中的作用 被引量：13
3
作者 高春艳 吴芮 +2 位作者 袁玉 刘同玥 任莉萍 《江汉大学学报（自然科学版）》 2017年第3期236-240,共5页
APETALA2/ethylene-response factor(AP2/ERF)类转录因子在植物中广泛存在,在调节植物生长发育及响应外界胁迫中发挥重要作用。鉴于此类调节蛋白的可塑性和该家族个体成员的特异性,AP2/ERF转录因子作为优异调控抗性基因在基因工程育种... APETALA2/ethylene-response factor(AP2/ERF)类转录因子在植物中广泛存在,在调节植物生长发育及响应外界胁迫中发挥重要作用。鉴于此类调节蛋白的可塑性和该家族个体成员的特异性,AP2/ERF转录因子作为优异调控抗性基因在基因工程育种中日益受到重视。综述了AP2/ERF类转录因子的发现、结构特征、调控机理及非生物胁迫应答机理,以期为深入挖掘和研究AP2/ERF家族基因提供参考。 展开更多
关键词 AP2/ERF转录因子 非生物胁迫 基因工程育种
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獭兔体外成熟卵母细胞孤雌激活及体细胞核移植 被引量：1
4
作者 刘勇 吴晓庆 +5 位作者 王子玉 宋浩洋 张领 乔凌燕 李文雍 谭景和 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期479-482,共4页
[目的]建立利用獭兔体外成熟卵母细胞进行孤雌激活及体细胞核移植的技术体系,促进獭兔现代育种技术的发展。[方法]以獭兔屠宰场废弃卵巢为试验材料,利用体外成熟、孤雌激活、体细胞核移植等方法,研究了獭兔体外成熟卵母细胞支持胚胎发... [目的]建立利用獭兔体外成熟卵母细胞进行孤雌激活及体细胞核移植的技术体系,促进獭兔现代育种技术的发展。[方法]以獭兔屠宰场废弃卵巢为试验材料,利用体外成熟、孤雌激活、体细胞核移植等方法,研究了獭兔体外成熟卵母细胞支持胚胎发育的能力。[结果]1）直径大于1 mm卵泡内的卵母细胞孤雌激活后的发育能力显著强于0.7~1.0 mm卵泡内的卵母细胞。2）卵母细胞体外培养（IVC）15~21 h后孤雌激活,卵裂率显著高于IVC 12 h组。3）2.5μmol·L-1Ionomycin处理5 min,再用2 mmol·L-16-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）与5μg·m L-1亚胺环己酮（CHX）联合处理1 h,孤雌激活效果最好。4）IVC 14 h后,78%的卵母细胞极体与核偏移角度小于10°;IVC 18 h后,34.6%的极体偏离核的角度大于45°。5）体外成熟的獭兔卵母细胞可以较好支持体细胞核移植的重构胚,核质作用期间采用MG132处理,降低了重构胚的囊胚率。[结论]从大于1 mm卵泡内回收卵母细胞并IVC 18 h后,采用2.5μmol·L-1Ionomycin处理5 min,再用2 mmol·L-16-DMAP与5μg·m L-1CHX联合处理1 h,是獭兔孤雌激活和体细胞核移植的最佳方案。 展开更多
关键词 孤雌激活 体细胞核移植 体外成熟 獭兔
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热应激对猪卵母细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性及染色质构型的影响 被引量：1
5
作者 刘勇 张领 +8 位作者 吴晓庆 卫朝辉 王艳红 王启磾 高迪 丁彪 吴风瑞 王荣 李文雍 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期22-27,共6页
将屠宰场采集的猪卵巢分为热应激组和对照组,分别检测两组未成熟卵母细胞的各项指标。利用亮甲酚蓝染色法研究葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性,对比分析热应激对细胞代谢活性的影响;利用Hoechst33342标记DNA区分染色质构型,对比分析热应激对细... 将屠宰场采集的猪卵巢分为热应激组和对照组,分别检测两组未成熟卵母细胞的各项指标。利用亮甲酚蓝染色法研究葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性,对比分析热应激对细胞代谢活性的影响;利用Hoechst33342标记DNA区分染色质构型,对比分析热应激对细胞染色质构型的影响。结果表明:热应激组卵母细胞BCB+比例显著低于对照组(P<0.05)。热应激组卵母细胞的各期染色质构型比例与对照组比例差异不显著(P>0.05)。BCB+和BCB-组卵母细胞GV1-GV3染色质构型差异不显著(P>0.05),但对照组BCB+卵母细胞的GV4构型比例明显高于BCB-(P<0.05),且GVBD差异不显著(P>0.05);而热应激组BCB+卵母细胞的GVBD比例明显低于BCB-(P>0.05),且GV4差异不显著(P>0.05)。综上,热应激对猪未成熟卵母细胞造成的损伤主要是影响了细胞的代谢活性,对细胞染色质构型的影响不大。 展开更多
关键词 染色质构型 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 猪卵母细胞 热应激
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微创输精管结扎术的建立与应用 被引量：2
6
作者 刘勇 张强 +1 位作者 张先乐 李文雍 《阜阳师范学院学报（自然科学版）》 2013年第1期25-27,共3页
目前,输精管结扎手术方法较多,但普遍伤害较大。研究通过自制工具,采用微创手术,缩小了切口的大小,可以让术后小鼠尽快恢复健康,降低感染风险,也为人医相关手术提供了新的思路。
关键词 输精管结扎 微创 小鼠
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鲈鱼cxcr4 cDNA克隆和序列分析
7
作者 吴风瑞 丁彪 +1 位作者 刘勇 李文雍 《阜阳师范学院学报（自然科学版）》 2013年第2期39-43,共5页
趋化因子受体(cxcr4)是一类重要的免疫调节因子受体,对原始生殖细胞的迁移和存活具有十分重要的作用。在对脊椎动物cxcr4进行初步生物信息学分析基础上设计引物,采用RT-PCR和RACE相结合的方法从鲈鱼卵巢克隆了cxcr4a全长和4b部分cDNAs序... 趋化因子受体(cxcr4)是一类重要的免疫调节因子受体,对原始生殖细胞的迁移和存活具有十分重要的作用。在对脊椎动物cxcr4进行初步生物信息学分析基础上设计引物,采用RT-PCR和RACE相结合的方法从鲈鱼卵巢克隆了cxcr4a全长和4b部分cDNAs序列,并预测其编码的氨基酸序列。结果表明,由于鱼类基因组经历一次特有的复制,cxcr4在鱼类存在两个复制基因。鲈鱼cxcr4a cDNA全长为1432 bp,编码311个氨基酸;cxcr4b部分cDNA片段长为905 bp,编码285个氨基酸。将鲈鱼cxcr4序列与所有已克隆的硬骨鱼类进行同源性比较,结果显示硬骨鱼类保守性较高,所有已经克隆的cxcr4按照进化地位的不同成簇聚类,表现出了较高的同源性。 展开更多
关键词 鲈鱼 CXCR4 基因克隆 序列分析
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山羊胎儿肌肉干细胞的分离培养与成肌诱导分化 被引量：2
8
作者 睢梦华 郑琪 +6 位作者 吴昊 丁建平 刘勇 李文雍 储明星 张子军 凌英会 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1590-1597,共8页
【目的】通过体外建立安淮山羊胎儿肌肉干细胞分离培养及成肌诱导分化的方法,为进一步研究调控山羊肌肉干细胞增殖与分化的分子机制提供实验材料。【方法】本试验选取山羊胎儿背最长肌肌肉组织,用眼科剪剪成肉糜后,用0.1%的Ⅰ型胶原酶消... 【目的】通过体外建立安淮山羊胎儿肌肉干细胞分离培养及成肌诱导分化的方法,为进一步研究调控山羊肌肉干细胞增殖与分化的分子机制提供实验材料。【方法】本试验选取山羊胎儿背最长肌肌肉组织,用眼科剪剪成肉糜后,用0.1%的Ⅰ型胶原酶消化40 min,然后利用0.25%的胰酶消化15 min。分离得到的细胞用生长培养基(20%FBS+80%DMEM/F12+青链霉素)培养于37℃、5%CO2培养箱内。培养2h后采用差速贴壁技术对细胞进行纯化,又2h后,重复纯化一次。待细胞生长至70%左右密度时可进行传代培养。每次传代培养均采用差速贴壁30min的方法进一步纯化肌肉干细胞,共纯化至第6代。利用免疫荧光技术检测第6代细胞中肌肉干细胞标记基因Pax7、Myo D1的蛋白表达情况,从而对分离得到的细胞进行鉴定。当肌肉干细胞生长至70%左右密度时,将生长培养基更换为分化培养基(2%FBS+98%DMEM/F12+青链霉素),诱导细胞向成肌方向分化并观察细胞的形态学变化。细胞诱导分化1d后,采用免疫荧光技术检测肌肉干细胞的分化标记基因Myog的蛋白表达情况。另外,分别提取诱导0、1、3、5、7d后的细胞的总RNA,通过反转录试剂盒反转成c DNA后,利用q PCR测定Myo D1和Myog的相对表达量。【结果】分离得到的细胞呈贴壁生长,其形态趋于稳定后主要呈长梭形或纺锤形。免疫荧光技术检测的第6代细胞中Pax7和Myo D1蛋白均为阳性表达。采用分化培养基诱导细胞分化后,在显微镜下可观察到随着诱导天数的增加,细胞开始分化、相互融合成肌管且具有一定的方向性。免疫荧光检测结果表明Myog蛋白呈明显的阳性表达。另外,q PCR结果显示,标志基因Myo D1和Myog均有表达,且Myo D1的相对表达量在分化的第1天相比于0天显著升高并维持到第3天,第5、7天开始显著下降但仍显著高于增殖期。Myog在分化不同天数的细胞中的相对表达量具有类似的趋向。【结论】分离得到了纯度较高的安淮山羊胎儿肌肉干细胞,且诱导后展现出较好的成肌潜力。研究结果可为进一步开展肌肉干细胞成肌分化的分子机制研究提供材料来源。 展开更多
关键词 山羊胎儿 肌肉干细胞 分离培养 鉴定 成肌分化
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碳黑和碳黑与铅复合物对小鼠肺部损伤作用机理 被引量：3
9
作者 木魁 姜楠 +2 位作者 尚梦婷 温海燕 姜双林 《宿州学院学报》 2017年第9期111-114,共4页
[目的]评估大气中碳黑和碳黑与铅复合物对活体动物肺部的损伤作用,从氧化应激和炎症损伤两个方面探讨毒性机理。[方法]将30只6周龄雌性昆明白小鼠体重为(25.0±1.3)g,随机分成3组,每组10只。碳黑和碳黑与铅的复合物(硝酸铅∶碳黑为1... [目的]评估大气中碳黑和碳黑与铅复合物对活体动物肺部的损伤作用,从氧化应激和炎症损伤两个方面探讨毒性机理。[方法]将30只6周龄雌性昆明白小鼠体重为(25.0±1.3)g,随机分成3组,每组10只。碳黑和碳黑与铅的复合物(硝酸铅∶碳黑为1∶250)用磷酸盐缓冲液制成悬液对小鼠进行气管滴注,剂量为4 mg·kg-1小鼠体重,滴注量为50μL,空白组用磷酸盐缓冲液处理,染毒1次,72 h后处死小鼠。对小鼠肺部进行病理学切片,并检测肺灌洗液生理生化指标,测得乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量,炎症指标的白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,以及肺部酶活力超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)活性。[结果]通过对病理学观察分析,染毒组肺部出现炎症损伤。染毒组LDH和MDA均显著高于对照组(P<0.01);IL-8含量高于对照组(P<0.05);TNF-α含量显著高于对照组(P<0.05);染毒组酶活力(SOD、AKP、ACP)也均高于对照组。[结论]小鼠肺部在短期高剂量的碳黑和碳黑与铅复合物暴露下,引起急性炎症损伤,黑碳与铅复合物毒性高于黑碳。 展开更多
关键词 碳黑 小鼠 作用机理
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碳黑和碳黑与铅复合物对人肺腺癌细胞A549毒性作用的比较 被引量：1
10
作者 木魁 姜楠 +3 位作者 温海燕 李响 高祥志 姜双林 《宿州学院学报》 2017年第7期121-124,共4页
【目的】比较碳黑和碳黑与铅复合物对人肺腺癌细胞A549的氧化损伤和凋亡方面的毒性。【方法】分别将浓度为40μg/mL的碳黑和碳黑与铅的复合物(硝酸铅∶碳黑为250ng∶1g)暴露A549细胞,MTT法测定24、48、72h时的细胞毒性;检测细胞上清中... 【目的】比较碳黑和碳黑与铅复合物对人肺腺癌细胞A549的氧化损伤和凋亡方面的毒性。【方法】分别将浓度为40μg/mL的碳黑和碳黑与铅的复合物(硝酸铅∶碳黑为250ng∶1g)暴露A549细胞,MTT法测定24、48、72h时的细胞毒性;检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)活力,胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的活性和总蛋白含量;荧光染色法检测细胞产生的活性氧(ROS)的含量;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡。【结果】处理组暴露24h后A549细胞的存活率均降低,碳黑与铅复合物最低,处理48h和72h与处理24h的趋势一致;处理组LDH和MDA均显著高于对照组(P<0.05),其中碳黑与铅复合物最高;处理组CAT活性、SOD活性和GSH-Px含量均显著低于对照组(P<0.01),碳黑与铅复合物最低;碳黑处理组ROS高于对照组,碳黑与铅复合物处理组ROS最高;碳黑处理组凋亡率是空白组的2.73倍,碳黑与铅复合物处理组凋亡率是对照组的4倍。【结论】碳黑与铅复合物和碳黑对A549细胞均产生细胞毒性,导致胞内抗氧化酶下降,细胞凋亡率增高,碳黑与铅复合物比碳黑对A549细胞具有更强的毒性损伤。 展开更多
关键词 碳黑 A549 毒性
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