外源性Nurr1基因过表达增强SK-N-SH细胞对神经毒素6-OHDA敏感性的研究 被引量：3

1

作者 刘扬 赵咏梅 +2 位作者 张海燕 李卫红 徐群渊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1171-1176,共6页

目的 通过比较自身不表达Nurrl基因的人神经母细胞瘤细胞SK—N—SH和过表达外源性Null基因的SK—N—SH／Nurrl细胞对神经毒素6-羟多巴胺（6-OHDA）损伤的敏感程度，探讨Null基因与6一OHDA引起的多巴胺（DA）能神经元特异性损伤的相关性... 目的 通过比较自身不表达Nurrl基因的人神经母细胞瘤细胞SK—N—SH和过表达外源性Null基因的SK—N—SH／Nurrl细胞对神经毒素6-羟多巴胺（6-OHDA）损伤的敏感程度，探讨Null基因与6一OHDA引起的多巴胺（DA）能神经元特异性损伤的相关性。方法①绘制SK—N—SH细胞及SK—N—SH／Nurrl细胞的生长曲线，比较外源性Null基因过表达对细胞增殖率的影响。②用不同浓度的6-OHDA（5—100μmol·L^-1）分别作用两株细胞1—24h，倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，MTT测定法比较两株细胞的存活率。③用75μmol·L^-1的6-OHDA作用12h，经Hoechst33342染色，荧光显微镜观察细胞核形态，比较两株细胞的凋亡情况。结果①生长曲线结果显示，SK—N—SH／Null细胞增殖数目低于SK—N—SH细胞一②MTT结果显示，6-OHDA对两株细胞的存活均有抑制作用，但SK—N—SH／Null细胞存活率下降更为明显。③Hoechst33342染色结果显示，用75μmol·L^-1的6-OHDA作用12h后SK—N—SH细胞核没有出现明显的凋亡形态改变，而部分SK—N—SH／Null细胞的细胞核出现了染色质凝聚、碎裂等凋亡形态改变，比例约为22％-24％。结论外源性Null基因过表达抑制SK—N—SH细胞增殖，增强SK—N—SH细胞对6-OHDA的敏感性并有可能促进6-OHDA诱导的细胞凋亡。Null基因可能作为易感因子参与多巴胺能神经元的特异性损伤。 展开更多

关键词 NULL 过表达 6-OHDA 凋亡

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成年大鼠非胰岛内Nestin阳性细胞的体外分离、培养及分化 被引量：3

2

作者 田井琦 白日星 +4 位作者 孙立波 张海燕 李卫红 介建政 张德恒 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期275-277,298,共4页

目的 :建立成年大鼠胰腺非胰岛内 Nestin阳性细胞的体外分离培养及分化的方法。方法 :采用胰管内注入胶原酶消化法分离 3只成年大鼠胰腺组织 ,并经含 10 %胎牛血清 RPMI16 4 0液 (p H7.6 )体外培养 ,36 h后弃去悬浮细胞及胰岛 ,改用无 1... 目的 :建立成年大鼠胰腺非胰岛内 Nestin阳性细胞的体外分离培养及分化的方法。方法 :采用胰管内注入胶原酶消化法分离 3只成年大鼠胰腺组织 ,并经含 10 %胎牛血清 RPMI16 4 0液 (p H7.6 )体外培养 ,36 h后弃去悬浮细胞及胰岛 ,改用无 10 %胎牛血清 RPMI16 4 0液 (p H7.4 )加 b FGF、EGF及 N2 添加剂培养 ,18～ 2 2 d后收集新生类胰岛样细胞团并传代培养。挑选新分离的胰岛和新生类胰岛样细胞团每次各 4 0个 ,共 3次 ,采用1 31 放射免疫法测定分离的胰岛及新生类胰岛样细胞团的胰岛素分泌量 ,并计算葡萄糖刺激指数 (SI) ;免疫荧光细胞化学法检查贴壁细胞及传代后的新生类胰岛样细胞团 Nestin阳性细胞的表达。结果 :胰管内注入胶原酶消化法可获得功能、形态良好的胰岛 ;分离后胰腺组织在 p H7.6的 10 %胎牛血清 RPMI16 4 0液培养条件下 ,36 h内胰岛细胞不贴壁 ,贴壁细胞中大多数表达 Nestin阳性细胞 ,无胰岛素和胰高血糖素表达 ,但 Nestin表达不一 ,培养 18～ 2 2 d可见新生类胰岛样细胞团出现 ,新生类胰岛样细胞团传代后仍可见 Nestin阳性细胞。新分离的 4 0个胰岛在含糖 3.3、 16 .7m mol· L- 1培养液中胰岛素分泌量为 (6 3.6± 4 .0 )、 (2 0 2 .2± 14 .8) m IU· L- 1 ;而新生的4 展开更多

关键词 干细胞 胰腺 胰

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地噻咪松诱导乳鼠胸腺细胞凋亡的研究 被引量：2

3

作者 梁福佑 陈哲生 +1 位作者 李金蕾 赵俊萍 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期3-5,共3页

本文用透射电镜的方法，研究了地噻咪松诱导乳鼠胸腺细胞的凋亡，并确立了乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞形态学特征；含溴化乙锭的琼脂多糖（１５％）电泳检测乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞的断裂ＤＮＡ；末端标记法（ＴＵＮＥＬ法）直接、持异的... 本文用透射电镜的方法，研究了地噻咪松诱导乳鼠胸腺细胞的凋亡，并确立了乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞形态学特征；含溴化乙锭的琼脂多糖（１５％）电泳检测乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞的断裂ＤＮＡ；末端标记法（ＴＵＮＥＬ法）直接、持异的标记乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞断裂ＤＮＡ。获得地噻咪松诱导乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞，以及透射电镜下可见凋亡细胞的典型形态学特征；ＤＮＡ琼脂糖电泳呈典型梯状条带；ＴＵＮＥＬ法中凋亡细胞着染，褐色颗粒沉着。提示不同浓度的地噻咪松可诱导乳鼠胸腺细胞凋亡，稍加改进ＴＵＮＥＬ法后，显示结果比较好。 展开更多

关键词 地塞米松 细胞凋亡 胸腺细胞 末端标记

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神经母细胞瘤细胞分化过程中细胞周期及端粒酶基因的变化 被引量：1

4

作者 王焕民 张金哲 +4 位作者 张海燕 李卫红 毕迅 祝秀丹 李家驹 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第2期135-139,共5页

目的:观察神经母细胞瘤细胞在被维甲类化合物诱导分化过程中细胞形态、细胞周期及端粒酶基因表达方面的变化,探讨其作用机理及临床意义。方法:查耳酮酸(R9158)及丁羟胺酸(R8605)均为新一代合成维甲类化合物,采用工作浓度10-6mol/L,加入... 目的:观察神经母细胞瘤细胞在被维甲类化合物诱导分化过程中细胞形态、细胞周期及端粒酶基因表达方面的变化,探讨其作用机理及临床意义。方法:查耳酮酸(R9158)及丁羟胺酸(R8605)均为新一代合成维甲类化合物,采用工作浓度10-6mol/L,加入两个神经母细胞瘤细胞系SHSY5Y和SKNSH的培养基,作为观察组;与观察组同浓度的DMSO分别加入两个细胞系的培养基,作为溶剂对照组。分别观察用药前后细胞形态学变化、流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡、原位杂交细胞化学(ISHH)方法检测端粒酶基因(hTR)的表达。结果:1.SHSY5Y细胞在药物处理后第5天有明显的神经突起形成,形态类似成熟神经元。SKNSH细胞在药物处理后7天内均无明显变化。2.流式细胞分析发现,SHSY5Y细胞在药物处理后第5天明显地阻滞于G1期,S期比例显著减少,G2/M期比例基本不变,并有少量细胞凋亡。SKNSH细胞在药物处理第3天及第5天均无明显差别,仅第5天有个别细胞凋亡。3.显微镜下观察,SHSY5Y细胞于药物作用5天后,hTR阳性细胞显著减少,SKNSH细胞则无明显变化。结论:新合成维甲类化合物R9158及R8605诱导维甲酸敏感细胞SHSY5Y发生形态学分化,细胞周期阻滞于G1期,端粒酶基因(hTR)表达显著减少。 展开更多

关键词 维甲类化合物 端粒酶 神经母细胞瘤 SH-SY-5Y SK-N-SH 细胞周期 细胞分化

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柴油机排出颗粒物诱导各种细胞微核和SCE的研究 被引量：3

5

作者 张瑾峰 王哲 +2 位作者 崔允文 付桂芳 李宝红 《中国优生与遗传杂志》 1999年第2期39-40,29,共3页

对柴油机排出颗粒物（ＤＥＰ）诱导小鼠骨髓细胞，体外培养的小鼠胚胎细胞和中国地鼠肺成纤维细胞（Ｖ７９）微核及姊妹染色单体交换（ＳＣＥ）进行了研究。结果表明柴油机排出颗粒物在动物体内可产生明显的毒性作用，并且对体外培养的... 对柴油机排出颗粒物（ＤＥＰ）诱导小鼠骨髓细胞，体外培养的小鼠胚胎细胞和中国地鼠肺成纤维细胞（Ｖ７９）微核及姊妹染色单体交换（ＳＣＥ）进行了研究。结果表明柴油机排出颗粒物在动物体内可产生明显的毒性作用，并且对体外培养的胚胎细胞和成纤维细胞产生明显的致突变作用。提取物对小鼠骨髓细胞和体外培养细胞的微核及ＳＣＥ诱导作用呈现出剂量－反应关系。各剂量组与对照组比较呈现出显著性差异（Ｐ＜００５）。这种遗传毒性作用可能是该颗粒物致癌和致突变性的机制之一。 展开更多

关键词 柴油机 颗粒物 微核 姊妹感染单体 交换

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三苯氧胺和白介素-6对人乳腺癌细胞凋亡的影响 被引量：1

6

作者 梁福佑 戎煜 +2 位作者 王箐旸 陈莉 潘颖 《首都医科大学学报》 CAS 1999年第2期77-79,共3页

应用雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株（ＭＣＦ７细胞），在体外培养条件下，观察三苯氧胺（ＴＡＭ）和重组人白细胞介素６（ＩＬ６）对该细胞凋亡的影响。样品经碘化丙啶（ＰＩ）染色后用ＥＰＩＣＳＥＬＩＴＥ流式细胞仪测定并... 应用雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株（ＭＣＦ７细胞），在体外培养条件下，观察三苯氧胺（ＴＡＭ）和重组人白细胞介素６（ＩＬ６）对该细胞凋亡的影响。样品经碘化丙啶（ＰＩ）染色后用ＥＰＩＣＳＥＬＩＴＥ流式细胞仪测定并分析。结果表明，ＴＡＭ和ＩＬ６皆可诱导ＭＣＦ７细胞凋亡，与对照组相比具显著性差异（Ｐ＜０．０１）。若将ＴＡＭ和ＩＬ６联合应用，其诱导ＭＣＦ７细胞凋亡数明显上升，与单药应用比较具非常显著性差异（Ｐ＜０．０１），提示２药合用的效果不是简单的加成而是协同作用。 展开更多

关键词 三苯氧胺 白细胞介素6 细胞凋亡 乳腺癌

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链球菌组蛋白样蛋白对人脐带静脉血管内皮细胞的损伤作用

7

作者 张力平 李卫红 +5 位作者 平国玲 沈海中 张海燕 李郁英 靖学芳 张红春 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期158-159,共2页

关键词 链球菌 组蛋白样蛋白 HlpA 人脐带 静脉血管内皮细胞 内皮细胞损伤

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外源性Nurr1基因过表达促进6-羟基多巴胺诱导的SK-N-SH细胞凋亡

8

作者 刘扬 赵咏梅 +2 位作者 张海燕 李卫红 徐群渊 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期955-958,共4页

目的研究Nurr1基因过表达在6-羟基多巴胺(6-OHDA)选择性诱导多巴胺(DA)能神经元特异性损伤中的作用。方法①不同浓度6-OHDA作用不同时间,比较细胞形态;②细胞经6-OHDA作用后,经流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布比例;③不同浓度6-OHDA作... 目的研究Nurr1基因过表达在6-羟基多巴胺(6-OHDA)选择性诱导多巴胺(DA)能神经元特异性损伤中的作用。方法①不同浓度6-OHDA作用不同时间,比较细胞形态;②细胞经6-OHDA作用后,经流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布比例;③不同浓度6-OHDA作用不同时间,经AnnexinV/PI双染后,运用共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况,获得毒素诱导凋亡的最适剂量(75μmol/L)和时间(12 h),运用FCM检测两株细胞早期凋亡比例。结果①经6-OHDA处理后,倒置相差显微镜观察,结果显示SK-N-SH/Nurr1细胞形态损伤早于SK-N-SH细胞,且损伤程度明显;②细胞周期结果显示,6-OHDA诱导SK-N-SH细胞G2/M期细胞比例下降,而SK-N-SH/Nurr1细胞S期细胞比例下降;③经AnnexinV/PI双染联合FCM检测早期凋亡比例结果显示,SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡比例明显高于SK-N-SH细胞(P<0.05)。结论外源性Nurr1基因过表达促进了6-OHDA诱导的SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡,Nurr1可能与SK-N-SH/Nurr1细胞对6-OHDA损伤敏感性增强有关。 展开更多

关键词 NURR1 过表达 6-OHDA 凋亡 FCM

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cAMP与小鼠胸腺细胞凋亡相关性的研究

9

作者 梁福佑 陈哲生 +1 位作者 郑莉 赵俊萍 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期25-28,共4页

本文采用Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ诱导小鼠胸腺细胞凋亡，探讨胞内ｃＡＭＰ浓度上升与细胞凋亡的相关性。采用透射电镜、ＦＣＭ和ＭＴＴ法。结果显示，Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ能诱导小鼠胸腺细胞凋亡，不同浓度其作用程度不同，已由ＦＣＭ证实。... 本文采用Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ诱导小鼠胸腺细胞凋亡，探讨胞内ｃＡＭＰ浓度上升与细胞凋亡的相关性。采用透射电镜、ＦＣＭ和ＭＴＴ法。结果显示，Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ能诱导小鼠胸腺细胞凋亡，不同浓度其作用程度不同，已由ＦＣＭ证实。透射电镜显示细胞凋亡的形态学特征。Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ激活胞内腺苷酸环化酶，产生大量ｃＡＭＰ，其诱发细胞凋亡数目最多的浓度，ＭＴＴ法显示其光密度（ＯＤ５７０）值最高，表示细胞活性最强。我们认为胞内ｃＡＭＰ浓度上升，导致ＰＫＡ途径激活可能与小鼠胸腺细胞凋亡相关。 展开更多

关键词 胸腺细胞 细胞凋亡 包皮素 蛋白激酶A

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6-OHDA诱导过表达Nurr1基因的SK-N-SH细胞凋亡的机制研究

10

作者 刘扬 赵咏梅 +1 位作者 张海燕 李卫红 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期130-134,共5页

为了探讨过表达外源性Nurr1基因的SKNSH/Nurr1细胞经6-羟多巴胺(6OHDA)诱导凋亡的机制,本实验比较了自身不表达Nurr1基因的SKNSH细胞和过表达外源性Nurr1基因的SKNSH/Nurr1细胞经6OHDA作用后的生化改变。经75μmol/L6OHDA作用6～24h,rho... 为了探讨过表达外源性Nurr1基因的SKNSH/Nurr1细胞经6-羟多巴胺(6OHDA)诱导凋亡的机制,本实验比较了自身不表达Nurr1基因的SKNSH细胞和过表达外源性Nurr1基因的SKNSH/Nurr1细胞经6OHDA作用后的生化改变。经75μmol/L6OHDA作用6～24h,rhodamine123染色后,激光扫描共聚焦显微镜检测两株细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化,用Westernblot方法检测两株细胞凋亡因子caspase3活性前体蛋白的表达水平。结果表明,经6OHDA作用,两株细胞△Ψm均先上升后下降,但在12～24h,SKNSH细胞△Ψm下降显著低于SKNSH/Nurr1细胞(P<0.001);75μmol/L6OHDA作用6～24h,SKNSH/Nurr1细胞caspase3活性前体蛋白表达水平显著下降(P<0.001),而SKNSH细胞caspase3前体蛋白表达变化不明显。以上结果提示,6OHDA诱导SKNSH/Nurr1细胞凋亡可能与激活caspase3有关,而6OHDA诱导SKNSH细胞毒性损伤与线粒体膜电位显著下降有关。 展开更多

关键词 NURR1 过表达 6-OHDA 凋亡

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6-OHDA诱导过表达nurr1基因的SK-N-SH细胞凋亡

11

作者 刘扬 赵咏梅 +2 位作者 张海燕 李卫红 岳云 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第4期525-533,共9页

目的比较自身不表达核相关受体因子(nuclear receptor related factor1,Nurr1)基因的人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH和过表达外源性nurr1基因的SK-N-SH/Nurr1细胞对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)的损伤反应,探讨nurr1基因在6-O... 目的比较自身不表达核相关受体因子(nuclear receptor related factor1,Nurr1)基因的人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH和过表达外源性nurr1基因的SK-N-SH/Nurr1细胞对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)的损伤反应,探讨nurr1基因在6-OHDA致细胞损害(死亡或凋亡)中的作用。方法用免疫细胞化学方法和RT-PCR检测基因转染细胞SK-N-SH/NURR1的nurr1蛋白及NURR1 mRNA的表达。细胞经不同浓度6-OHDA(50～100μmol/L)作用不同时间(6、12 h),经AnnexinV/PI双染后流式细胞术(flow cytometry,FCM)测定早期细胞凋亡比例。细胞经75μmol/L 6-OHDA作用12 h,通过透射电镜(transmission electronmicroscopy,TEM)观察细胞超微结构变化。用Western blotting方法检测75μmol/L6-OHDA作用6、12 h,细胞凋亡因子Caspase-3活性前体蛋白的表达水平。结果免疫细胞化学染色结果显示,基因转染细胞SK-N-SH/Nurr1表达NURR1蛋白;经RT-PCR检测,基因转染细胞表达NURR1 mRNA,说明外源性nurr1基因在转染细胞内过表达。FCM检测结果显示,75μmol/L 6-OHDA作用12 h,SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡比例明显高于SK-N-SH细胞(P=0.000),而100μmol/L6-OHDA作用6、12 h后,2株细胞均表现为毒性损伤。TEM显示,75μmol/L6-OHDA作用12 h后,部分SK-N-SH/Nurr1细胞出现了典型凋亡改变,而SK-N-SH细胞主要表现为毒性损伤。4.75μmol/L6-OHDA作用6、12 h,SK-N-SH/Nurr1细胞Caspase-3活性前体蛋白表达显著下降(P=0.000),而SK-N-SH细胞Caspase-3活性前体蛋白表达变化不明显。结论外源性nurr1基因过表达促进6-OHDA诱导的SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡,在低剂量(≤75μmol/L)时,凋亡比例与剂量呈正相关,高剂量时6-OHDA主要诱导细胞毒性损伤。 展开更多

关键词 核相关受体因子 过表达 6-羟基多巴胺 凋亡 流式细胞术

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甲鱼油对胰岛素抵抗细胞模型胰岛素敏感性和葡萄糖代谢的影响

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作者 白晶 田亚平 郭多 《标记免疫分析与临床》 CAS 2007年第4期217-220,共4页

采用高浓度胰岛素诱导建立胰岛素抵抗（IR）HepG2细胞模型，评价甲鱼油对IR细胞模型胰岛素敏感性和葡萄糖代谢的影响。利用甲鱼油处理IR细胞模型，通过葡萄糖氧化酶及^3H-D葡萄糖参入实验分别检测其葡萄糖消耗和^3H-D-葡萄糖参入率。结... 采用高浓度胰岛素诱导建立胰岛素抵抗（IR）HepG2细胞模型，评价甲鱼油对IR细胞模型胰岛素敏感性和葡萄糖代谢的影响。利用甲鱼油处理IR细胞模型，通过葡萄糖氧化酶及^3H-D葡萄糖参入实验分别检测其葡萄糖消耗和^3H-D-葡萄糖参入率。结果表明，HepG2细胞模型的葡萄糖参入率在各种浓度的胰岛素刺激下均低于对照细胞（P〈0．05），并且HepG2细胞模型与对照细胞的^3H-D-葡萄糖参入率随着胰岛素浓度的升高而升高，但前者升高的幅度低于后者。MTT（甲基噻唑基四唑）结果显示甲鱼油均具有促进对照细胞和IR细胞模型增殖作用。与对照组细胞相比，采用不同浓度胰岛素诱导的模型细胞经甲鱼油处理后其葡萄糖摄取和消耗显著增加（P〈0．05）。甲鱼油明显增加该IR细胞模型的葡萄糖消耗和^3H-D-葡萄糖参入率，提高IR细胞模型的胰岛素敏感性，改善其糖代谢。 展开更多

关键词 甲鱼油 胰岛素抵抗 细胞模型 胰岛素敏感性

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