黑龙江省部分地区马铃薯Y病毒株系检测 被引量：8

1

作者 刘洪义 梁五生 +2 位作者 刘忠梅 张洪祥 杨立群 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期47-52,共6页

从黑龙江省克山、讷河、五大连池和北安大田种植的马铃薯上采集马铃薯病叶,提取总RNA,利用之前验证过的引物,进行反转录、PCR扩增,以及焦磷酸测序,以鉴定感染的马铃薯Y病毒(PVY)株系。结果表明,克山有2个样品分别感染PVYN:O和PVYN-Wi;... 从黑龙江省克山、讷河、五大连池和北安大田种植的马铃薯上采集马铃薯病叶,提取总RNA,利用之前验证过的引物,进行反转录、PCR扩增,以及焦磷酸测序,以鉴定感染的马铃薯Y病毒(PVY)株系。结果表明,克山有2个样品分别感染PVYN:O和PVYN-Wi;讷河有2个样品感染PVYN-Wi;五大连池有2个样品分别感染PVYN:O和PVYN-Wi;北安有1个样品感染PVYN-Wi。结合之前报道的9份黑龙江省马铃薯病样的PVY株系鉴定结果,表明黑龙江省大田种植的马铃薯至少存在PVYN-Wi、PVYN:O、PVYNTN和PVYN4种PVY株系侵染;而且,由于PVYN-Wi侵染了16份已鉴定病样中的7份,而其余3种株系均仅侵染3份病样,显示PVYN-Wi可能为优势株系。 展开更多

关键词 黑龙江省 马铃薯 马铃薯Y病毒 病毒株系鉴定 焦磷酸测序

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基于DNA环介导等温扩增技术快速检测溶藻弧菌的研究 被引量：4

2

作者 徐义刚 吴岩 +3 位作者 刘忠梅 李丹丹 崔丽春 李苏龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期72-76,共5页

溶藻弧菌是引起海产鱼类、虾、贝等细菌性疾病的主要病原之一,严重危害水产养殖业的发展,建立快速、准确的检测方法对防控溶藻弧菌及保障水产养殖安全具有重要意义。本研究引入环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,L... 溶藻弧菌是引起海产鱼类、虾、贝等细菌性疾病的主要病原之一,严重危害水产养殖业的发展,建立快速、准确的检测方法对防控溶藻弧菌及保障水产养殖安全具有重要意义。本研究引入环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以溶藻弧菌胶原酶基因为靶基因,建立了溶藻弧菌LAMP快速检测方法,45～60min内即可完成检测。试验结果显示,该LAMP方法可特异性检测溶藻弧菌,且灵敏度高,对纯培养溶藻弧菌的检测灵敏度约10CFU/mL,对污染水产品中溶藻弧菌的检测灵敏度为19CFU/mL。本研究建立的溶藻弧菌LAMP检测方法操作简便、检测快速,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 溶藻弧菌 胶原酶基因 环介导等温扩增 快速检测

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基于环介导等温扩增技术水产品中副溶血弧菌快速检测方法的建立与应用 被引量：4

3

作者 徐义刚 李丹丹 +3 位作者 刘新亮 刘忠梅 崔丽春 李苏龙 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第10期68-70,74,共4页

本试验基于环介导等温扩增(LAMP)技术,以副溶血弧菌toxR基因为靶基因,设计两对LAMP引物F3/B3和FIP/BIP,建立了副溶血弧菌LAMP检测方法,60min内即可完成检测。该LAMP方法特异性强、灵敏度高,对纯培养副溶血弧菌的检测灵敏度为42CFU/mL,... 本试验基于环介导等温扩增(LAMP)技术,以副溶血弧菌toxR基因为靶基因,设计两对LAMP引物F3/B3和FIP/BIP,建立了副溶血弧菌LAMP检测方法,60min内即可完成检测。该LAMP方法特异性强、灵敏度高,对纯培养副溶血弧菌的检测灵敏度为42CFU/mL,对污染食品中副溶血弧菌的检测灵敏度为67CFU/mL。实践应用证明,本试验建立的副溶血弧菌LAMP检测方法操作简单、检测结果准确,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 副溶血弧菌 toxR基因 环介导恒温扩增

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应用DPO-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7 被引量：11

4

作者 徐义刚 李丹丹 +2 位作者 崔丽春 刘忠梅 李苏龙 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期160-164,共5页

利用双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7。根据DPO引物设计原则,以肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因为靶基因设计一对DPO引物,经... 利用双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7。根据DPO引物设计原则,以肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因为靶基因设计一对DPO引物,经过反应体系的优化,建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7 DPO-PCR检测方法,其检测灵敏度约为94 CFU/mL。与常规PCR方法相比,所建立的DPO-PCR方法对退火温度不敏感,在引物设计和实验过程中不需要对引物及其退火温度反复优化,同时基于DPO引物的特殊结构又增强了其特异性。DPO-PCR方法设计简易、特异性强,为致病性微生物的快速准确检测提供了新途径。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因 双启动寡核苷酸引物聚合酶链式反应

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应用DNA环介导恒温扩增技术快速检测空肠弯曲菌 被引量：5

5

作者 徐义刚 李丹丹 +3 位作者 田长永 刘忠梅 李苏龙 张国财 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期2751-2757,共7页

【目的】空肠弯曲菌是一种重要的人畜共患病致病菌,主要经被污染的水源、乳制品、生禽肉进行传播,建立快速、准确的诊断方法是防控空肠弯曲菌感染的重要措施。【方法】本文引入一种新型的核酸检测技术——DNA环介导恒温扩增(loop-mediat... 【目的】空肠弯曲菌是一种重要的人畜共患病致病菌,主要经被污染的水源、乳制品、生禽肉进行传播,建立快速、准确的诊断方法是防控空肠弯曲菌感染的重要措施。【方法】本文引入一种新型的核酸检测技术——DNA环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以空肠弯曲菌ORF-C序列为检测靶基因,建立了空肠弯曲菌LAMP快速检测方法。【结果】利用本LAMP方法对21种病原菌进行检测,仅空肠弯曲菌为阳性结果,说明该方法具有高度的特异性。该LAMP方法对空肠弯曲菌纯培养菌的检测灵敏度达6CFU/反应管,对污染材料中空肠弯曲菌的检测灵敏度为9CFU/反应管。【结论】本研究建立的空肠弯曲菌LAMP检测方法操作简便、检测快速,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 环介导恒温扩增 快速检测

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应用DPO技术检测番茄斑萎病毒方法的建立 被引量：5

6

作者 刘忠梅 罗佳 +5 位作者 潘仲乐 刘洪义 李丹丹 韩政坤 魏冬旭 马微 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第11期93-97,共5页

为了准确、高效地检出番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV),利用双启动寡核苷酸引物(DPO)技术,以TSWV外壳蛋白(CP)基因为靶基因,设计了一对DPO引物,对PCR反应体系中的引物、d NTPs、Taq DNA聚合酶用量进行优化,建立了TSWV的DP... 为了准确、高效地检出番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV),利用双启动寡核苷酸引物(DPO)技术,以TSWV外壳蛋白(CP)基因为靶基因,设计了一对DPO引物,对PCR反应体系中的引物、d NTPs、Taq DNA聚合酶用量进行优化,建立了TSWV的DPO-PCR检测方法,并对其灵敏度、特异性以及退火温度敏感性进行了评价。结果表明,应用DPO引物建立的PCR技术能够成功地扩增出TSWV的208 bp特异性条带,与预期目标相符。经过优化后,DPO-PCR反应体系(25μL)为:DNA模板1μL,10×Buffer(含Mg2+)2.5μL,d NTPs(每种2.5 mmol/L)2.0μL,Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.2μL,上、下游DPO引物(20μmol/L)各1.0μL,以去离子水补充至25μL。利用该检测方法,在49.8~70.0℃的退火温度范围内,均可实现目标基因片段的高效扩增,说明其对退火温度不敏感;利用病毒RNA进行检测,该方法的灵敏度为7.5 ng;通过对TSWV、番茄环斑病毒、烟草环斑病毒和番茄黑环病毒的检测表明,仅TSWV呈现阳性反应,说明该方法特异性强。所建立的DPO-PCR检测方法能够准确、高效地检测TSWV,可用于进出境种苗检疫筛查及田间病害诊断。 展开更多

关键词 番茄斑萎病毒 双启动寡核苷酸引物 DPO—PCR 检测

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ASE-GPC-GC法测定大豆及豆制品中六六六、滴滴涕农药残留 被引量：11

7

作者 魏冬旭 江连洲 +2 位作者 郭伟 孟冰冰 胡少新 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第24期351-354,共4页

建立一种同时测定大豆及豆制品中α-HCH、β-HCH、γ-HCH、δ-HCH、ρ,ρ′-DDE、ρ,ρ′-DDD、ο,ρ′-DDT、ρ,ρ′-DDT8种有机氯农药残留的气相色谱分析方法。样品经加速溶剂系统萃取(ASE)和凝胶渗透色谱净化(GPC)后,采用气相色谱配... 建立一种同时测定大豆及豆制品中α-HCH、β-HCH、γ-HCH、δ-HCH、ρ,ρ′-DDE、ρ,ρ′-DDD、ο,ρ′-DDT、ρ,ρ′-DDT8种有机氯农药残留的气相色谱分析方法。样品经加速溶剂系统萃取(ASE)和凝胶渗透色谱净化(GPC)后,采用气相色谱配备电子捕获检测器进行分离测定。0.005～0.100mg/kg范围内各残留药物线性良好,相关系数r均在0.9990以上;在0.005、0.020、0.050mg/kg3个加标水平下进行了方法验证,平均回收率为78.3%～107.6%,相对标准偏差为2.1%～5.5%;方法检测限(LOD)为0.2～1.8μg/kg。该方法重现性好、灵敏度高、分析迅速,各项指标均满足国内外法规要求,适用于大豆及豆制品中六六六和滴滴涕残留的分析检测。 展开更多

关键词 大豆及豆制品 加速溶剂萃取 凝胶渗透色谱 气相色谱 六六六 滴滴涕

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东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST的表达、纯化及抑菌活性分析 被引量：10

8

作者 郭娜 肖向红 +2 位作者 徐义刚 柴龙会 张晶钰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第15期3246-3251,共6页

【目的】利用毕赤酵母菌真核表达系统重组表达东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST,分析评价dybowskin-1ST的抑菌活性。【方法】采用TRIzol法提取蛙皮总RNA,经RT-PCR扩增获得抗菌肽dybowskin-1ST基因,将目的基因克隆到毕赤酵母菌分泌型表... 【目的】利用毕赤酵母菌真核表达系统重组表达东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST,分析评价dybowskin-1ST的抑菌活性。【方法】采用TRIzol法提取蛙皮总RNA,经RT-PCR扩增获得抗菌肽dybowskin-1ST基因,将目的基因克隆到毕赤酵母菌分泌型表达质粒pPIC9K中,得到重组质粒pPIC9K-1ST。经电转化将pPIC9K-1ST转入到毕赤酵母菌GS115中,获得高效表达dybowskin-1ST的重组菌株。以甲醇诱导重组菌株,上清液经SDS-PAGE检测表明有目的蛋白dybowskin-1ST分泌表达。目的蛋白经Ni-agarose色谱柱分离纯化后,对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肠炎沙门氏菌和蜡状芽孢杆菌进行抑菌活性分析。【结果】成功构建了东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST的毕赤酵母真核表达系统,且dybowskin-1ST对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有良好的抑菌效果。【结论】东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST具有良好的广谱抗菌活性和潜在的研发价值。 展开更多

关键词 东北林蛙 抗菌肽 毕赤酵母 抑菌活性

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动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：8

9

作者 李丹丹 徐义刚 +2 位作者 王绥家 高慎阳 马广鹏 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第5期24-30,共7页

根据沙门菌属高度保守的fimY基因序列设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物性食品中沙门菌的快速检验。建立的荧光PCR方法灵敏度约为5.2cfu/mL,经对781份肉类、蛋、奶及水产品进... 根据沙门菌属高度保守的fimY基因序列设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物性食品中沙门菌的快速检验。建立的荧光PCR方法灵敏度约为5.2cfu/mL,经对781份肉类、蛋、奶及水产品进行检测,共检出56份阳性样本,与国标(GB/T4789.4——2008)方法的检测结果一致。建立的荧光PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 沙门菌 fimY基因 实时荧光定量PCR 快速检测

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超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法同时分析鸡肉中7种氟喹诺酮类药物残留 被引量：20

10

作者 郭伟 刘永 刘宁 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期406-411,共6页

建立了一种同时测定鸡肉中7种氟喹诺酮类药物残留的超高效液相色谱-电喷雾串联质谱确证分析方法(UPLC-ESI-MS/MS)。样品经酸化乙腈提取、正己烷脱脂和HLB固相萃取柱净化,采用ACQUITYUPLCTMBEHC18色谱柱(50mm×2.1mm,1.7μm)分离,以0... 建立了一种同时测定鸡肉中7种氟喹诺酮类药物残留的超高效液相色谱-电喷雾串联质谱确证分析方法(UPLC-ESI-MS/MS)。样品经酸化乙腈提取、正己烷脱脂和HLB固相萃取柱净化,采用ACQUITYUPLCTMBEHC18色谱柱(50mm×2.1mm,1.7μm)分离,以0.1%甲酸水溶液和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾质谱检测,正离子多反应监测模式进行定性和定量分析。7种药物在5～100μg/kg范围内线性关系良好,相关系数(r2)均大于0.99;以5,25,50μg/kg3个浓度水平进行添加回收试验,7种药物的平均回收率在79.2%～108.6%之间,相对标准偏差为4.2%～8.9%,方法的检出限(LOD)为0.2～1.4μg/kg。方法重现性好、灵敏度高、分析时间短、确证能力强,适用于鸡肉中氟喹诺酮类药物多残留的确证检测。 展开更多

关键词 超高效液相色谱-电喷雾串联质谱 固相萃取 氟喹诺酮类药物 鸡肉

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动物源性食品中志贺氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：6

11

作者 李丹丹 徐义刚 +2 位作者 王绥家 高慎阳 李一经 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期98-102,共5页

根据志贺氏菌属高度保守的ipaH基因序列,设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物源性食品中志贺氏菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物源性食品中志贺氏菌的快速检验。结果表明,该法灵敏度约为2.8 cfu·mL-1,经对205份肉类、... 根据志贺氏菌属高度保守的ipaH基因序列,设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物源性食品中志贺氏菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物源性食品中志贺氏菌的快速检验。结果表明,该法灵敏度约为2.8 cfu·mL-1,经对205份肉类、蛋、奶及其制品和动物腹泻物、人工污染样品等进行检测,共检出13份阳性样本,与国标(GB 4789.5-2012)方法的检测结果一致。表明建立的荧光PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好实用性。 展开更多

关键词 志贺氏菌 IPAH基因 荧光定量PCR 快速检测

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肠出血性大肠埃希菌O157∶H7实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：5

12

作者 李丹丹 徐义刚 +2 位作者 王绥家 高慎阳 李一经 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期81-84,共4页

本试验针对肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7高度保守的rfbE基因序列设计合成引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了检测EHEC O157∶H7实时荧光定量PCR方法。结果显示,该法灵敏度约为7.3CFU/mL... 本试验针对肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7高度保守的rfbE基因序列设计合成引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了检测EHEC O157∶H7实时荧光定量PCR方法。结果显示,该法灵敏度约为7.3CFU/mL,对310份肉类、蛋、奶及其制品和动物腹泻物、人工污染样品等进行检测,共检出阳性样本20份,与采用AOAC标准检测结果的符合率为100%。表明建立的实时荧光定量PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 肠出血性大肠埃希菌0157 H7 rfbE基因 荧光定量PCR 快速检测

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宁夏固原地区马铃薯M病毒的检测鉴定 被引量：3

13

作者 张永江 刘忠梅 +5 位作者 燕照玲 刘洪义 马洁 陈林 辛言言 马云霞 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第8期79-81,85,共4页

为了解宁夏固原地区马铃薯M病毒(potato virus M,PVM)发生情况,采集了18份表现叶片变形、茎坏死及植株矮化症状的样品,应用血清学(DAS-ELISA)和分子生物学(RT-PCR)方法进行检测。DAS-ELISA检测结果显示,有2份样品(5号和10号)为PVM阳性。... 为了解宁夏固原地区马铃薯M病毒(potato virus M,PVM)发生情况,采集了18份表现叶片变形、茎坏死及植株矮化症状的样品,应用血清学(DAS-ELISA)和分子生物学(RT-PCR)方法进行检测。DAS-ELISA检测结果显示,有2份样品(5号和10号)为PVM阳性。对2份阳性样品进行RT-PCR检测,均获得416bp的目的产物,其序列与国内外已报道的其他PVM分离物的核苷酸序列同源性最高分别达99%和98%,说明被检测样品确实感染了PVM。这是PVM在宁夏固原发生的首次报道,为今后该地区马铃薯病毒病害的防控提供了依据。 展开更多

关键词 宁夏固原 马铃薯M病毒 检测 鉴定

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肠致病性大肠杆菌DPO-PCR快速检测方法的建立 被引量：4

14

作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 陈文慧 邱索平 高慎阳 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期541-544,共4页

为建立肠致病性大肠杆菌（EPEC）的快速检测方法,本研究以EPEC bfp A基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了EPEC的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,退火温度在45℃~65℃范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物... 为建立肠致病性大肠杆菌（EPEC）的快速检测方法,本研究以EPEC bfp A基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了EPEC的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,退火温度在45℃~65℃范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感。该方法对其他菌株的扩增结果均为阴性,特异性强;其灵敏度为97 cfu/m L。利用该方法和国标法分别对采集的230份临床样品进行检测,均共计检出5份EPEC阳性样品,两者符合率为100%。本研究建立的DPO-PCR方法设计简单、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,为快速准确检测EPEC提供新的检测手段。 展开更多

关键词 肠致病性大肠杆菌 bfpA基因 DPO-PCR

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番茄黑环病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：6

15

作者 辛言言 刘洪义 +3 位作者 杨长志 刘忠梅 杨立群 张永江 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第4期88-92,共5页

为了快速有效地检测出植物样品中的番茄黑环病毒(tomato black ring virus,TBRV),根据TBRV的保守序列设计RT-LAMP反应的特异引物,通过试验成功建立了TBRV的RT-LAMP特异性检测方法。该方法检测快速,约27 min即可检测到扩增曲线;特异性强... 为了快速有效地检测出植物样品中的番茄黑环病毒(tomato black ring virus,TBRV),根据TBRV的保守序列设计RT-LAMP反应的特异引物,通过试验成功建立了TBRV的RT-LAMP特异性检测方法。该方法检测快速,约27 min即可检测到扩增曲线;特异性强,可有效区分同样侵染马铃薯的马铃薯A病毒(PVA)、马铃薯Y病毒(PVY)、番茄斑萎病毒(TSWV)及番茄环斑病毒(ToRSV);灵敏度高,比普通RT-PCR灵敏度至少高10倍;并可通过肉眼观察反应颜色的变化直接进行结果判断。该方法适用于TBRV的快速检测。 展开更多

关键词 番茄黑环病毒 反转录-环介导等温扩增 检测

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副溶血弧菌DPO-PCR检测方法的建立 被引量：2

16

作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 王昱 邱索平 高会江 高慎阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期133-136,共4页

以副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus,VP）toxR基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了DPO-PCR快速检测VP的方法.结果显示,退火温度在49～69℃都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物... 以副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus,VP）toxR基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了DPO-PCR快速检测VP的方法.结果显示,退火温度在49～69℃都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与VP的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为121 CFU/mL.利用该检测方法对采集的550份样品进行检测,共计检出19份VP阳性样品,与行标法（SN/T 1870-2007）检测结果一致,实用性良好.该DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性. 展开更多

关键词 副溶血弧菌 toxR基因 DPO-PCR

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固相萃取净化-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定大豆中18种酰胺类除草剂残留 被引量：14

17

作者 于徊萍 张盼盼 +6 位作者 潘仲乐 高雨 张品 李彦锋 李漫 姜冰 吴岩 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2581-2584,共4页

建立了大豆中乙草胺、丁草胺、苯噻酰草胺、灭锈胺等18种酰胺类除草剂多残留的分析方法.样品以乙腈为提取剂,经高速匀浆方法提取并浓缩后,以氟罗里硅土(Florisil)固相萃取柱净化,有效地降低了样品中的复杂基质所带来的背景干扰,净化液以... 建立了大豆中乙草胺、丁草胺、苯噻酰草胺、灭锈胺等18种酰胺类除草剂多残留的分析方法.样品以乙腈为提取剂,经高速匀浆方法提取并浓缩后,以氟罗里硅土(Florisil)固相萃取柱净化,有效地降低了样品中的复杂基质所带来的背景干扰,净化液以Shim-pac XR-ODSⅡ柱为分离柱,用乙腈和0.1%甲酸溶液进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)多反应模式监测,超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定,基质匹配标准曲线法定量.加标水平为5、10、20μg·kg^(-1)时,18种农药的回收率为77.2%—103.6%,相对标准偏差为1.3%—13.0%.18种农药的检出限为0.16—1.8μg·kg^(-1),在5.0—100.0μg·L^(-1)范围内线性关系良好(r>0.999). 展开更多

关键词 固相萃取(SPE) 超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS) 酰胺类除草剂 大豆

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肠侵袭性大肠杆菌DPO-PCR检测方法的建立与应用 被引量：1

18

作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期826-830,共5页

目的为建立肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）的DPO-PCR快速检测方法。方法本研究以EIECipaH基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了EIEC DPO-PCR检测方法。结果退火温度范围在47℃~67℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检... 目的为建立肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）的DPO-PCR快速检测方法。方法本研究以EIECipaH基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了EIEC DPO-PCR检测方法。结果退火温度范围在47℃~67℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与EIEC的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为1.17×102 cfu/mL。利用该检测方法对采集的230份样品进行检测,共计检出3份EIEC阳性样品,与国标法（GB 4789.6-2003）检测结果一致,显示了良好的实用性。结论该DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 肠侵袭性大肠杆菌 IPAH基因 DPO-PCR

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凝胶渗透色谱净化-气相色谱/质谱法同时测定食用油脂中16种多环芳烃 被引量：7

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作者 于徊萍 刘亚娜 +6 位作者 刘鹏 刘亚楠 徐昨非 陈雪莹 李彦锋 吴岩 王妍 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期438-441,共4页

建立了食用油脂中16种多环芳烃(PAHs)的凝胶渗透色谱(GPC)净化-气相色谱/质谱(GC-MS)分析方法.样品以环己烷-乙酸乙酯(1∶1,V/V)提取后,经GPC净化,有效地除去了样品中的脂质类物质所带来的基质干扰,净化液进行GC-MS分析,内标法定量.加... 建立了食用油脂中16种多环芳烃(PAHs)的凝胶渗透色谱(GPC)净化-气相色谱/质谱(GC-MS)分析方法.样品以环己烷-乙酸乙酯(1∶1,V/V)提取后,经GPC净化,有效地除去了样品中的脂质类物质所带来的基质干扰,净化液进行GC-MS分析,内标法定量.加标水平为1、2、10μg·kg^(-1)时,PAHs的回收率为80.6%—106.7%,相对标准偏差为1.3%—13.4%.16种PAHs的检测限为0.11—1.1μg·kg^(-1),在1.0—50.0μg·L^(-1)范围内线性关系良好(r>0.999). 展开更多

关键词 凝胶渗透色谱(GPC) 气相色谱-质谱法(GC-MS) 多环芳烃(PAHs) 食用油脂

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白菜中二硫代磷酸酯类有机磷农药降解动力学研究 被引量：1

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作者 刘永 姜冰 +3 位作者 吴岩 魏东旭 曾繁华 阎秀峰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第17期94-98,共5页

培养8叶期无菌白菜幼苗,添加5种二硫代磷酸酯类有机磷农药(马拉硫磷、乐果、甲拌磷、乙拌磷及特丁硫磷),用气相色谱及液相色谱-质谱联用法检测二硫代磷酸酯类农药及O,O-二甲基二硫代磷酸酯残留量。结果表明:二硫代磷酸酯类农药的含量在... 培养8叶期无菌白菜幼苗,添加5种二硫代磷酸酯类有机磷农药(马拉硫磷、乐果、甲拌磷、乙拌磷及特丁硫磷),用气相色谱及液相色谱-质谱联用法检测二硫代磷酸酯类农药及O,O-二甲基二硫代磷酸酯残留量。结果表明:二硫代磷酸酯类农药的含量在实验过程中呈减少的趋势,农药在样本培养过程被逐渐降解,10 d内降解水平为13.4%~65.0%,无菌苗添加药物组降解速率明显低于正常培养添加药物对照组。使用一级反应动力学模型对农药代谢动力学进行评价,无菌条件下马拉硫磷降解速率最快,降解速率常数为0.034 67,降解半衰期为19.9 d,特丁硫磷降解速率常数最小,降解速率常数为0.007 17,降解半衰期为96.7 d,乐果、甲拌磷及乙拌磷相对稳定,但降解动力学差别较大。 展开更多

关键词 白菜 有机磷农药 降解动力学

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